藥監(jiān)系統(tǒng)官方培訓(xùn) 細(xì)菌和真菌感染多重核酸檢測(cè)試劑盒宣貫-劉東來(lái)-20200929 中檢院 傳染病診斷試劑二室

細(xì)菌和真菌感染多重核酸檢測(cè)試劑盒宣貫劉東來(lái)中檢院

傳染病診斷試劑二室2020年9月29日匯報(bào)內(nèi)容行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)概況制定背景介紹行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)條款標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)介紹行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)概況標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)：YY/T1725-2020標(biāo)準(zhǔn)性質(zhì)：推薦性行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)歸口單位：全國(guó)醫(yī)用臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室和體外診斷系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（SAC/TC136）起草單位：中國(guó)食品藥品檢定研究院任務(wù)來(lái)源：國(guó)家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布日期：2020-06-30實(shí)施日期：2021-12-01國(guó)內(nèi)外相關(guān)試劑情況一、已批準(zhǔn)試劑：?

呼吸道病原菌核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?cái)U(kuò)增芯片法），成都博奧晶芯生物科技有限公司（國(guó)械注準(zhǔn)20173401346）?

碳青霉烯耐藥基因檢測(cè)試劑盒（實(shí)時(shí)熒光PCR法）XpertCarba-R

Assay，美國(guó)賽沛公司Cepheid，國(guó)械注進(jìn)20203400221二、注冊(cè)/研發(fā)中試劑：?

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革蘭陰性菌和耐藥基因聯(lián)合檢測(cè)試劑（微陣列芯片法），廣州萬(wàn)孚生物技術(shù)股份有限公司行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)條款——范圍?

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了細(xì)菌和真菌感染多重核酸檢測(cè)試劑盒（以下簡(jiǎn)稱“試劑盒”）的術(shù)語(yǔ)和定義、要求、試驗(yàn)方法、標(biāo)簽和使用說(shuō)明書、包裝、運(yùn)輸和貯存等。?

本標(biāo)準(zhǔn)適用于對(duì)人體樣本（包括血液、腦脊液和糞便等）或其培養(yǎng)物進(jìn)行單次檢測(cè)可報(bào)告三種及以上細(xì)菌和真菌（以下簡(jiǎn)稱“病原菌”,不包括支原體和衣原體）的試劑盒的質(zhì)量控制。適用于檢測(cè)原理為聚合酶鏈反應(yīng)、等溫?cái)U(kuò)增以及第二代測(cè)序等技術(shù)的試劑盒。?

本標(biāo)準(zhǔn)不適用于單次檢測(cè)可報(bào)告一種或兩種病原菌的試劑盒。不適用于單次檢測(cè)可報(bào)告一種或兩種病原菌的不同基因的試劑盒。不適用于單次檢測(cè)可報(bào)告一種或兩種病原菌的不同型別（基因型或血清型）的試劑盒。標(biāo)準(zhǔn)介紹——要求和試驗(yàn)方法項(xiàng)目4要求5試驗(yàn)方法4.1外觀外觀應(yīng)符合但不限于以下要求：a）試劑盒各組分應(yīng)齊全、完整，液體無(wú)滲漏；在自然光下以正常視力或矯正視力目視檢查b）中文包裝標(biāo)簽應(yīng)清晰，無(wú)磨損4.2核酸提取

核酸提取功能應(yīng)符合如下要求：按照制造商提供的方法進(jìn)行試驗(yàn)功能a）包含核酸提取組份的試劑盒，制造商應(yīng)對(duì)核酸提取做適當(dāng)要求，并對(duì)核酸提取功能進(jìn)行驗(yàn)證；b）樣本需要提取，但不含有核酸提取組份的試劑盒，由制造商說(shuō)明或指定提取試劑盒，并提供驗(yàn)證資料；c）樣本無(wú)需提取，直接進(jìn)行擴(kuò)增的試劑盒，制造商應(yīng)能提供充分證據(jù)，以證明其產(chǎn)品中酶的抗干擾性標(biāo)準(zhǔn)介紹——要求和試驗(yàn)方法項(xiàng)目4要求5試驗(yàn)方法4.3內(nèi)標(biāo)和制造商宜根據(jù)其產(chǎn)品工藝特點(diǎn)，在反應(yīng)體系

按照制造商提供的方法進(jìn)行試驗(yàn)（或）對(duì)照

中合理設(shè)置內(nèi)標(biāo)和（或）對(duì)照，內(nèi)標(biāo)和（或）對(duì)照宜與樣本同等對(duì)待4.4陰性參考

對(duì)國(guó)家參考品或企業(yè)參考品中的陰性參考品

參考國(guó)家或企業(yè)參考品說(shuō)明書并按品符合率進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陰性。陰性參考品設(shè)置宜參考如下要求：a）包含一定數(shù)量的非目標(biāo)病原菌，可以是獨(dú)立或混合樣本；照試劑盒說(shuō)明書操作，對(duì)國(guó)家或企業(yè)參考品中的陰性參考品進(jìn)行檢測(cè)b）包含與目標(biāo)病原菌種屬相近、感染部位相同或感染癥狀相似的非目標(biāo)病原菌。注：本標(biāo)準(zhǔn)所涉及的國(guó)家參考品信息可參見(jiàn)附錄A標(biāo)準(zhǔn)介紹——要求和試驗(yàn)方法項(xiàng)目4要求5試驗(yàn)方法4.5陽(yáng)性參考

對(duì)國(guó)家參考品或企業(yè)參考品中的陽(yáng)性參考品進(jìn)行檢測(cè)，

參考國(guó)家或企業(yè)參考品品符合率檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性且與已知病原體種類相符。陽(yáng)性參考品設(shè)置宜參考如下要求：說(shuō)明書并按照試劑盒說(shuō)明書操作，對(duì)國(guó)家或企業(yè)參考品中的陽(yáng)性參考a）包含全部目標(biāo)病原菌，可以是獨(dú)立或混合樣本；b）可以每種目標(biāo)病原菌只選擇一株具有代表性的菌株；

品進(jìn)行檢測(cè)c）對(duì)于難以獲得標(biāo)準(zhǔn)株或臨床分離株的病原菌可以使用模擬樣本，如包裹病原菌核酸的噬菌體顆粒。注：本標(biāo)準(zhǔn)所涉及的國(guó)家參考品信息可參見(jiàn)附錄A4.6檢出限對(duì)國(guó)家參考品或企業(yè)參考品中的檢出限參考品進(jìn)行檢測(cè)，參考國(guó)家或企業(yè)參考品檢測(cè)結(jié)果應(yīng)符合相應(yīng)要求。制造商應(yīng)規(guī)定并提供試劑盒對(duì)于每種目標(biāo)病原菌的檢出

明書操作，對(duì)國(guó)家或企限。宜優(yōu)先選擇感染性單位，如菌落形成單位每毫升

業(yè)參考品中的檢出限參說(shuō)明書并按照試劑盒說(shuō)（CFU/mL）；如難以獲得感染性單位，可以選擇非感

考品進(jìn)行檢測(cè)染性單位，如拷貝數(shù)每毫升（copies/mL）等。注：本標(biāo)準(zhǔn)所涉及的國(guó)家參考品信息可參見(jiàn)附錄A標(biāo)準(zhǔn)介紹——要求和試驗(yàn)方法項(xiàng)目4要求5試驗(yàn)方法4.7重復(fù)性對(duì)國(guó)家參考品或企業(yè)參考品中的重復(fù)性參考品進(jìn)行檢測(cè)，參考國(guó)家或企業(yè)參考品檢測(cè)結(jié)果應(yīng)滿足：說(shuō)明書并按照試劑盒說(shuō)明書操作，對(duì)國(guó)家或企a）對(duì)于報(bào)告Ct值的試劑盒，對(duì)同一份樣本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果應(yīng)均為陽(yáng)性且與已知病原體種類相符，目

業(yè)參考品中的檢出限參標(biāo)病原菌Ct值的變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于5.0％；或b）對(duì)于不報(bào)告Ct值的試劑盒，對(duì)同一份樣本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果應(yīng)均為陽(yáng)性且與已知病原體種類相符。重復(fù)性參考品應(yīng)包括高、低兩個(gè)濃度，具體設(shè)置宜參考如下要求：考品進(jìn)行檢測(cè)a）可以使用包含目標(biāo)病原菌的混合樣本進(jìn)行驗(yàn)證，覆蓋全部目標(biāo)病原菌；或b）可以使用包含代表性的目標(biāo)病原菌的獨(dú)立或混合樣本進(jìn)行驗(yàn)證，覆蓋有限數(shù)量目標(biāo)病原菌；c）對(duì)于難以獲得標(biāo)準(zhǔn)株或臨床分離株的病原菌可以使用模擬樣本，如包裹病原菌核酸的噬菌體顆粒。注：本標(biāo)準(zhǔn)所涉及的國(guó)家參考品信息可參見(jiàn)附錄A標(biāo)準(zhǔn)介紹——要求和試驗(yàn)方法項(xiàng)目4要求5試驗(yàn)方法4.8穩(wěn)定性可對(duì)效期穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性進(jìn)行驗(yàn)證：5.8.1效期穩(wěn)定性a）效期穩(wěn)定性：制造商應(yīng)規(guī)定產(chǎn)品的有效期。取到效取到效期后一定時(shí)間內(nèi)期后一定時(shí)間內(nèi)的產(chǎn)品檢測(cè)陽(yáng)性參考品符合率、陰性參

的試劑盒，按照5.4～5.7考品符合率、檢出限、重復(fù)性，應(yīng)符合4.4～4.7項(xiàng)要求。

方法進(jìn)行檢測(cè)。效期穩(wěn)定性試驗(yàn)，一般情況下,效期為1年時(shí)選擇不超過(guò)

5.8.2熱穩(wěn)定性1個(gè)月的產(chǎn)品進(jìn)行試驗(yàn)，效期為半年時(shí)選擇不超過(guò)半個(gè)取有效期內(nèi)的試劑盒在月的產(chǎn)品進(jìn)行試驗(yàn)，以此類推。但如超過(guò)規(guī)定時(shí)間，產(chǎn)

制造商規(guī)定的溫度放置品符合要求時(shí)也可以接受；規(guī)定時(shí)間，按照5.4～5.7b）熱穩(wěn)定性：取有效期內(nèi)的試劑盒在制造商規(guī)定的溫度放置規(guī)定時(shí)間，檢測(cè)陽(yáng)性參考品符合率、陰性參考品符合率、檢出限、重復(fù)性，應(yīng)符合4.4～4.7項(xiàng)要求。注1：熱穩(wěn)定性試驗(yàn)不能用于推導(dǎo)產(chǎn)品有效期，除非是采用基于大量的穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)建立的推導(dǎo)公式。注2：根據(jù)產(chǎn)品特性可選擇a),b)方法的組合，但所選用方法宜能驗(yàn)證產(chǎn)品的穩(wěn)定性。以保證在效期內(nèi)產(chǎn)品性能符合標(biāo)準(zhǔn)要求方法進(jìn)行檢測(cè)適用參考品介紹——附錄AA.1總則附錄A給出了本標(biāo)準(zhǔn)“4要求”項(xiàng)中適用的國(guó)家參考品信息，該國(guó)家參考品為“34種細(xì)菌和真菌感染多重核酸檢測(cè)試劑國(guó)家參考品（參考品批號(hào)：370026-201801）

”。A.2類別體外診斷試劑參考品。A.3批號(hào)370026-201801。A.4性狀液體。適用參考品介紹——附錄AA.5用途本參考品為首批研制，參考品原料系34種可導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)、血液、呼吸道、腸道以及生殖道感染的致病性細(xì)菌或真菌（以下簡(jiǎn)稱“病原菌”，不包括支原體和衣原體）的培養(yǎng)物。本參考品適用于對(duì)人體樣本或其培養(yǎng)物進(jìn)行單次檢測(cè)可報(bào)告3種及以上病原菌檢測(cè)結(jié)果的多重核酸檢測(cè)試劑盒(聚合酶鏈反應(yīng)法、恒溫?cái)U(kuò)增法以及第二代測(cè)序法)部分性能要求的質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)：陽(yáng)性參考品符合率、陰性參考品符合率、重復(fù)性及最低檢出限。本參考品不適用于單次檢測(cè)可報(bào)告一種或兩種病原菌的試劑盒。不適用于單次檢測(cè)可報(bào)告1種或2種病原菌的不同靶基因的試劑盒。不適用于單次檢測(cè)可報(bào)告1種或2種病原菌的不同型別（基因型或血清型）的試劑盒。適用參考品介紹——附錄AA.6規(guī)格和組成適用參考品介紹——附錄AA.7使用方法參考品稀釋：所有混合參考品復(fù)融至室溫后，用無(wú)核酸酶無(wú)菌去離子水或試劑盒說(shuō)明書中規(guī)定的稀釋基質(zhì)按適當(dāng)比例進(jìn)行稀釋后使用。陰、陽(yáng)性參考品稀釋后終濃度應(yīng)不低于1.