新版洗滌劑生產(chǎn)制備方法配方及應(yīng)用工藝專(zhuān)利技術(shù)文集三.1bb組合物

(19)中民國(guó)家知識(shí)

(10)公告號(hào)CN101374935(21)申請(qǐng)?zhí)?(22)PCT/US2007/001803WO2007/087319EN(73)地址俄亥俄(72)P·F·蘇特J·A·K·博奇A·斯文森M·米克爾森J·溫德N·J·蘭特司72001呂彩霞李炳愛(ài)(57)CN101374935CN101374935

C11D3/386WO02062973WO0060063US6624129員權(quán)利要求書(shū)1說(shuō)明書(shū)31序列表5CNCN101374935權(quán)利要求1/1I255Y+T231R+N233R240％12％表面；組合物的洗滌水溶液；洗滌劑組合 [0004]直至前主要的市售脂肪酶如Lipolase(商品名為Novozymes)才可在洗滌過(guò)程烘干階段的較低水分含量下產(chǎn)生尤其有效的作用。這些酶僅在第二洗滌步驟趨于產(chǎn)生US6,939,702B1WO00/60063ResearchDisclosureIP6553D的有效性通常直接與該組合物賦予用該組合物清潔或處理過(guò)的制品的氣味相關(guān)聯(lián)。申請(qǐng)?jiān)噭┊a(chǎn)生的氣味與凈相關(guān)聯(lián)。具有C-末端延伸序列的、減少氣味的變體實(shí)例參見(jiàn)WO02/062973，但是這些脂肪酶變體未第一洗滌脂肪酶的強(qiáng)效洗滌性能諸如那些WO00/60063中的脂肪酶包括以商品名銷(xiāo)售的變體。 [0008]本發(fā)明涉及包含洗滌劑成分和脂肪酶變體的洗滌劑組合物，所述脂肪酶變體在說(shuō)明給定測(cè)試條件下具有至少0.8的平均相對(duì)性能(RPavg)和至少1.1的效險(xiǎn)(BR)。[0009]序列列表 每分鐘1.0微摩爾丁酸的酶量。 T231R+N233R取代的序列標(biāo)識(shí)號(hào)2純化，優(yōu)選至少40％純化，更優(yōu)選至少60％純化，甚至更優(yōu)選至少80％純化，最優(yōu)選至少90％95％純化的多肽。按重量計(jì)最多10優(yōu)選最多8更優(yōu)選最多6選最多5更優(yōu)選最多43甚至更優(yōu)選最多2最優(yōu)選最多1甚至最優(yōu)選最多0.5％的與其天然結(jié)合的其它優(yōu)選至少94％純959696％更優(yōu)選至少97989999.5％純化，甚至最優(yōu)選至少100％純化。[0022]對(duì)本發(fā)明來(lái)說(shuō)，通過(guò)使用來(lái)自EMBOSSpackage()2.8.0版本于Needleman，S.B.和WunschC.D.(1970)J.Mol.Biol.48443-453。使用的取代矩陣是[0023]本發(fā)明的氨基酸發(fā)明如序列標(biāo)識(shí)2的氨基1269和差異氨基酸序列(“外來(lái)序列”)之間的同一性程度通過(guò)以下方法計(jì)算個(gè)序列比對(duì)的精確匹2269)。 [0027]AACMSHTWGER- ||||[0029]B： 2[0031]15′3′靜突變(編碼的多肽無(wú)變化)或可以編碼具有改變的氨基酸序列的多肽。多肽的等位變體是由 cDNA本文術(shù)“cDNA”定義為能從得自真核細(xì)胞的成剪接的mRNA分子通的初級(jí)轉(zhuǎn)錄物是mRNA的前體它通過(guò)一系列步驟被加工成剪接mRNA這些步驟包括通過(guò)所謂的剪接方法移除內(nèi)含子序列。cDNA衍生自mRNA因此缺乏任何內(nèi)含子序列。 核酸構(gòu)建在此所用的術(shù)“核酸構(gòu)建是指單鏈或雙鏈核酸分子它們分離自天然存在的或以某種方式被修飾以含有核酸片段否則其不會(huì)天然存在。當(dāng)核酸構(gòu)建包 可操作的連接術(shù)“可操作的連接本文表示一種構(gòu)造其中控制序列被置于相 編碼序列本文所用術(shù)“編碼序列是指直接為其蛋白質(zhì)產(chǎn)物的氨基酸序列編碼的核苷酸序列。編碼序列的邊界通常由開(kāi)放讀框決定開(kāi)放讀框通常以ATG起始子或 子諸如GTG和TTG開(kāi)始。編碼序列可以是DNAcDNA或重組核苷酸序 2多肽組成以及編碼多肽的DNA的 。修飾可以是氨基酸的取代刪除和/或、[0043] 人造變體性由表達(dá)序列標(biāo)識(shí)號(hào)1 的修飾核苷酸序列的生物體產(chǎn)生。通過(guò)人工干預(yù)獲得修飾核苷酸，號(hào)1。品的丁酸與從序列標(biāo)識(shí)號(hào)2的脂肪酶成熟部分洗滌樣品的丁酸量之間的比率，兩[0047][0049]195G195E。在相同的位點(diǎn)缺失甘氨酸的話(huà)表示為G195*而附加的氨基酸殘基如賴(lài)氨酸表示為G195GK。[0050]36*36D 當(dāng)應(yīng)用所述序列比對(duì)方法時(shí)，X231表示在親本多肽中對(duì)應(yīng)位點(diǎn)231的氨基酸。2TX231R 在一個(gè)甚至更優(yōu)選的實(shí)施例中所述脂肪酶具有至少1.5的BR諸如1.6或甚至1.7。 在另一方面本發(fā)明的多肽在本說(shuō)明書(shū)的給定測(cè)試條件下還具有小于1諸如小于甚至小于0.80。2或其等位變并且還具有至少1.1的BR和至少0.8的RP。在另發(fā)明的分離的多肽具有如下氨基酸序列它被包含在或包含序列標(biāo)識(shí)號(hào)2或其等位變體的成熟部1.1BR0.8RP。2 (i)序列標(biāo)識(shí)號(hào)：1(iii)(i)(ii)的子序列，或(iv)(i)(ii)(iii)的互補(bǔ)鏈(J.SambrookE.F.FritschT.Maniatus1989MolecularCloningALaboratory112的氨基酸序列或其具有脂肪酶活性的多肽的DNA。具體地講，這些探針可用于與所關(guān)注的屬或種的組或少500個(gè)核苷酸。甚至可以使用更長(zhǎng)的探長(zhǎng)度為至少600個(gè)核苷酸優(yōu)選至少700個(gè)核苷更優(yōu)選至少800個(gè)核苷酸的核酸探針。可以使用DNA和RNA探針。探針通常進(jìn)行標(biāo)記以檢測(cè)相應(yīng)的(例如，用32P3H35S生物素、或親合素標(biāo)記)。本發(fā)明涵蓋了這1 1在這些條件下雜交到核酸探針上的分子可以用X射線膠片進(jìn)行檢測(cè)。2R.L.Hill1979The 33 (CunninghamandWells1989Science2441081-1085)。在最近1996J.Biol.Chem.2714699-deVos1992，255306-312Smith1992J.Mol.Biol.224899-904Wlodaver59- Sauer1988SciencBowieauer1989Poc.atl.cd.Sci.SA2152-WO108WO92/062046145Ner7127) DNA 2321。 下文提到的區(qū)域I至區(qū)域IV的位點(diǎn)是序列標(biāo)識(shí)號(hào)2中的氨基酸殘基位點(diǎn)。使用“同源性和序列比對(duì)部分所述的方法來(lái)發(fā)現(xiàn)不同脂肪酶中對(duì)應(yīng)的(或同源的)位點(diǎn)。 區(qū)域I中的取代[0077]區(qū)域I由圍繞N-末端殘基E1的氨基酸殘基組成。在此區(qū)域優(yōu)選用帶較多正電的氨基酸來(lái)取代親本脂肪酶中的氨基酸。區(qū)域I包含對(duì)應(yīng)以下位點(diǎn)的氨基酸殘基1至11和223至239。以下位點(diǎn)具有特別的意義 233234和236。X1N[0078在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，親本脂肪酶與序列標(biāo)2具有至少80諸85％或9095％或96％或97％或98％或99％的同一性。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)本脂肪酶與序列標(biāo)識(shí)號(hào)2[0079]II[0080] 域II一分面酸在此區(qū)域優(yōu)選用帶較多正電的氨基酸或較低疏水性的氨基酸來(lái)取代親本脂肪酶中的氨基域II基202至211和249至269。以下位點(diǎn)具有特義： 256259代X202G、X210K/W/AX255Y/V/AX256K/R和X259G/M/QV。[0081在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，親本脂肪酶與序列標(biāo)2具有至少80諸85％或9095％或96％或97％或98％或99％的同一性。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)本脂肪酶與序列標(biāo)識(shí)號(hào)2[0082]III 22 IVX58N/AG/T/P和X60V/S/G/N/R/K/A/L。[0087在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，親本脂肪酶與序列標(biāo)2具有至少80諸85％或9095％或96％或97％或98％或99％的同一性。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)本脂肪酶與序列標(biāo)識(shí)號(hào)2[0088][0089]親本脂肪酶可任選地包含其它氨基酸的取代，尤其是少于10個(gè)和少于5個(gè)這樣 27131137143147X150G/K和X249R/I/L。 變體可包含在限定區(qū)域I至IV之外的取代在限定區(qū)域I至IV之外的取代數(shù)量?jī)?yōu)個(gè)或二個(gè)或一個(gè)。作為另外一種選擇變體不包含任何在限定區(qū)域I至IV之外的取代。 例如根據(jù)本領(lǐng)域已知的法則可進(jìn)行的取代如WO92/05249WO94/25577、WO95/22615WO97/04079和WO97/07202中所述的取代。 下組的取代中的一組或多組： X4V+X227G+X210K+X227G+X231R+X227G+X231R+X4V+X231R+X227G+X231R+2會(huì)是：Q4V+L227G+E210K+L227G+T231R+L227G+T231R+Q4V+T231R+L227G+T231R+[0104]例如，根據(jù)本領(lǐng)域已知的法則可進(jìn)行的取代，如WO92/05249WO94/25577、WO95/22615WO97/04079WO97/07202中所述的取代。[0105][0106]對(duì)于本發(fā)明來(lái)說(shuō)，通過(guò)本領(lǐng)域已知的計(jì)算機(jī)程序，如GCG程序包中所提供的GAP(ProgramManualfortheWisconsinPackage81994年8GeneticsComputerGroup575ScienceDrive，Madison，Wisconsin，USA53711)(Needleman，WnchCD.190)JuralBiology48443-下列多肽序列對(duì)GAP地測(cè)定同源性程度GAP3.0并且GAP延伸罰分為0.1。 刀菌異孢鐮刀菌米曲霉卡門(mén)柏青霉臭曲霉黑曲霉嗜熱真菌(同物異名高溫毛殼霉)、和Landerin nisapora脂肪酶序列中對(duì)應(yīng)的(或同源的)位點(diǎn)通過(guò)圖1中顯示的序列 1GCG(ProgramManualfortheWisconsinPackage，Version8，August1994，GeneticsComputerGroup575ScienceDrive，Biology48443- 250 (RPavg)5脂肪酶變體可具有至少0.8至11至1.5或甚至至少2至約1000的平均相 [0115]4LU/A280LU/A280。本文所述的脂肪酶變體1000.9小于0.81.00至約0.1的相對(duì)LU/[0116][0117] 本發(fā)明的多肽可獲取自任何微生物屬。對(duì)于本發(fā)明來(lái)在此所用的術(shù)“獲取當(dāng)與給定來(lái)源相聯(lián)系時(shí)是指核苷酸序列編碼的多肽由來(lái)源產(chǎn)生或由其中了來(lái)源核苷酸序列的菌株產(chǎn)生。在一個(gè)優(yōu)選的方面獲取自給定來(lái)源的多肽被到細(xì)胞外。[0118] 本發(fā)明的多肽可以是細(xì)菌多肽。例如所述多肽可以是革蘭氏陽(yáng)性菌多肽諸如桿菌多肽例如嗜堿芽孢桿菌解淀粉芽孢桿菌短桿菌環(huán)狀芽胞桿菌凝固芽胞桿菌燦爛芽胞桿菌遲緩芽孢桿菌地衣芽孢桿菌巨大芽胞桿菌嗜熱脂肪芽胞桿菌枯草芽孢桿菌或蘇云金芽胞桿菌多肽或鏈霉菌多肽例如變鉛青鏈霉菌或鼠鏈霉菌多肽或革蘭氏菌多肽例如大腸桿菌或假單胞菌屬多肽。[0119]本發(fā)明的多肽也可以是真菌多肽，更優(yōu)選地是酵母多肽諸如假絲酵母、克魯維酵母、 2[0125]公眾可容易地在多個(gè)菌種保藏中心獲得這些菌種的菌株，諸如AmericanTypeCultureCollection(ATCC)、DeutscheSammlungvonMikroanisndZellkulturenGmbH(DSMZ)、CentraalbureauVoorSchimmelcultures(CBS)、和AgriculturalResearchServicePatentCultureCollection、NorthernRegionalResearchCenter(NRRL)。碼多肽的多核苷酸序列，可利用本領(lǐng)域的普通技術(shù)熟知的技術(shù)來(lái)分離或克隆多核苷酸(參 [0129]本發(fā)明的脂肪酶優(yōu)選地衍生自具有編碼本發(fā)明多肽的核苷酸序列的分離的多核苷酸，更優(yōu)選地衍生自編碼以下多肽的核苷酸序列所述多肽是序列標(biāo)識(shí)號(hào)2或其成熟多肽2[0130]用于分離或克隆編碼多肽的多核苷酸的技術(shù)是本領(lǐng)域已知的，包括從組DNA選來(lái)檢測(cè)具有共同結(jié)構(gòu)特征的克隆DN段。參見(jiàn)例如Innis等人的PCR：AGuidetonPressNewYork1990 多肽可以衍生自具有核苷酸序列的多核苷酸所述核苷酸序列與序列標(biāo)識(shí)號(hào)160％65％70％75％80％85％90％95％的同一性它編碼具有脂肪酶活性以及至少1.1的BR和至少0.8的RP的活性多肽。 為了基本上類(lèi)似于所述多肽的多肽必須對(duì)編碼本發(fā)明多肽的核苷酸序列進(jìn)來(lái)源在某些工程學(xué)方面不同例如人造變體在特異活性熱穩(wěn)定性最佳pH等方面有所1的核苷酸取代。核苷酸取代的綜述參見(jiàn)例如Ford等人的ProteinExpressionandPurification295-1071991 Wells1989Science2441081-子活性至關(guān)重要的氨基酸殘基。也可以通過(guò)三維結(jié)構(gòu)分析測(cè)定底物和酶的交互作用位點(diǎn)，Science255306-3121992Smith1992Wlodaver30959-641992) (i) [0139] 細(xì)胞是同源 枯草芽孢桿菌果聚糖蔗糖酶(sacB)、地衣芽孢桿菌α-淀粉酶(amyL)、嗜熱脂肪芽胞桿菌麥芽糖淀粉酶(amyM)、解淀粉芽孢桿菌α-淀粉酶(amyQ)、地衣芽 (penP)、枯草芽孢桿菌xylA和xylB 、和原核β-內(nèi)酰胺酶基(Villa-aroff1978，ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesUSA7537273731tac啟動(dòng)子(DeBoer1983ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesUSA80：2125)“UsefulproteinsfrombinantbacteriaScientificAmerican1980241989supra 半乳糖激酶(GAL1釀酒酵母醇脫氫酶/甘油醛-3-磷酸鹽脫氫酶(ADH1ADH2/GAP釀酒酵母丙糖磷酸鹽異構(gòu)酶(TPI釀酒酵母金屬硫蛋白(CUP13-磷酸甘油酸鹽激酶。酵母宿主細(xì)胞的其它可用啟動(dòng)子Romanos1992Yeast8：423488中有所描[0143]控制序列也可以是合適的轉(zhuǎn)錄終止子序列，終止子序列是宿主細(xì)胞可識(shí)別的用于[0144]用于絲狀真菌宿主細(xì)胞的優(yōu)選終止子獲取自以下：米曲霉TAKA淀粉酶、黑曲[0145]用于酵母宿主細(xì)胞的優(yōu)選終止子獲取自以下：釀酒酵母烯醇酶、釀酒酵母細(xì)[0146]mRNA[0147]用于絲狀真菌宿主細(xì)胞的優(yōu)選前導(dǎo)序列獲取自以下：米曲霉TAKA淀粉酶和[0148]用于酵母宿主細(xì)胞的優(yōu)選前導(dǎo)序列獲取自以下：釀酒酵母烯醇酶(ENO-1)、酸鹽脫氫酶(ADH2/GAP)。 [0150]用于絲狀真菌宿主細(xì)胞的優(yōu)選聚腺苷酸序列獲取自以下：米曲霉TAKA淀粉α[0151]用于酵母宿主細(xì)胞的可用聚腺苷酸序列在GuoandSherman1995MolecularCellularBiology1559835990中有所描述。[0152]控制序列也可以是信號(hào)肽編碼區(qū)，它編碼連接到多肽氨基末端的氨基酸序列，并且指導(dǎo)編碼多肽進(jìn)入細(xì)胞的途徑。核苷酸序列的編碼序列的5’末端可固有的包含信 用于細(xì)菌宿主細(xì)胞的有效信號(hào)肽編碼區(qū)是獲取自以下的信號(hào)肽編碼區(qū)：菌Plva1993Microbiologica109-137中有所描述。[0154]用于絲狀真菌宿主細(xì)胞的有效信號(hào)肽編碼區(qū)是獲取自以下的信號(hào)肽編碼區(qū)TAKA性淀曲霉冬氨酸蛋白[0155]用于酵母宿主細(xì)胞的可用信號(hào)肽獲取自以下：釀酒酵母α-因子和釀酒酵母Romanos1992，supra(WO95/33836)。[0157]信號(hào)肽和肽原都存在于多肽的氨基末端，肽原區(qū)域位置在緊鄰著多肽的氨基末[0158]閉的調(diào)控。原核體系中的調(diào)控體系包括lactac和trp子體系。在酵母中可以使用ADH2體系或GAL1TAKAα-粉酶啟動(dòng)子和米曲霉葡糖淀粉酶啟子作為調(diào)列。其它調(diào)控序的實(shí)例是那允許[0159][0161] 體(組DNA程序并能表達(dá)核苷酸序列。載體的選擇將通常取決于載體和引入載體的宿主細(xì)胞的相容性。載體可以是線性的或閉合環(huán)形的質(zhì)粒。 載體可以是自主載體即載體是在外存在的實(shí)體其獨(dú)立于染色體例如質(zhì)粒外因子微型或人工。載體可包含用于確保自主的任何元件。作為另外一種選擇載體可以是這樣一種形式當(dāng)引入宿主細(xì)胞時(shí)載體整合進(jìn)入組與引入其的組一起此外可以使用單一載體或質(zhì)?；騼蓚€(gè)或更多個(gè)載體或質(zhì)粒它們一起包含總DNA以被引入宿主細(xì)胞的組或可以使用轉(zhuǎn)位子。 一種選擇性標(biāo)記物是其產(chǎn)物提供抗生素或抗性重金屬抗性對(duì)營(yíng)養(yǎng)缺陷體的原[0164] 條件性可作為非抗生素選擇性標(biāo)記物使用。細(xì)菌的條件性非抗生素選擇性標(biāo)記物的非限制性實(shí)例是da1桿失D-情UDPUTP(EC2.7.7.10)UDP酶(EC2.7.7.12)或UDP-酶(EC5.1.3.2)用木糖異構(gòu)酶諸如桿菌的xylA生長(zhǎng)gnK和gntP一碳源的本培基中作細(xì)胞長(zhǎng)的選標(biāo)記物。它條性的例是本領(lǐng) 和吸水鏈霉菌的bar。 。[0168] 對(duì)自主來(lái)說(shuō)載體可進(jìn)一步包含起點(diǎn)以使得載體能在所考慮的宿主細(xì)胞中自主起點(diǎn)可以是在細(xì)胞中發(fā)揮功能的調(diào)控自主的任何質(zhì)粒。術(shù)起質(zhì)文定使得粒載體體的核酸列。[0169] 細(xì)菌起點(diǎn)的實(shí)例是質(zhì)粒起點(diǎn)pBR322pUC19pACYC177和pACYC184它們?cè)试S在大腸桿菌中以及pUB110pE194pTA1060和pAMβ1它們?cè)试S在桿菌中復(fù)制。。 ARS4CEN6[0171]用于絲狀真菌細(xì)胞中的起點(diǎn)的實(shí)例是AMA1和ANS1(Gems等人，1991，Gene986167Cullen1987NucleicAcidsResearch1591639175WO00/24883)。根據(jù)WO00/24883所公開(kāi)的方法，可分離AMA1并構(gòu)建包含的質(zhì)粒或載體。[0173]用于連接上述元件以構(gòu)建本發(fā)明的重組表達(dá)載體的方法是本領(lǐng)域技術(shù)熟知[0174] ChangandCohen1979MolecularGeneralGenetics168111115)、使用感受態(tài)細(xì)胞參見(jiàn)例如YoungSpizizin1961JournalofBacteriology81：823829Dubnau和Abelson1971Journal209如，ShigekawaDower1988Biotechniques6742751或結(jié)合例如，KoehlerThorne1987JournalofBacteriology16957715278)。 HawksworthIn，AinsworthandBisby’sDictionaryofTheFungi，81995，CABInternational，UniversityPress，絲孢子真菌(Hawksworth等人，1995，supra)。子酵母(內(nèi)孢孔生擔(dān)孢子酵母、和屬于不完全菌綱(芽孢綱)的酵母。因?yàn)榻湍阜诸?lèi)將來(lái)可能發(fā)生改變，對(duì)于本發(fā)明來(lái)說(shuō)，酵母應(yīng)按照BiologyandActivitiesofNo.91980和卵菌亞門(mén)所有的絲狀形式(由Hawksworth等人定義1995supra。絲狀真菌通常特征 擬蠟菌、干擬蠟菌、CeriporiopsiscaregieaCeriporiopsisgilvescens、Ceriporiopsispannocinta、Ceriporiopsisrivulosa，Ceriporiopsissubrufa、或蟲(chóng) Yelton1984，ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesUSA811989Gene7147-156WO96/00787中有所描述。酵母可以用以下文獻(xiàn)中描述的方法進(jìn)行轉(zhuǎn)化：GuarenteInAbelsonJ.NSimonM.IeditorsGuideandMolecularBiology，MethodsinEnzymology，Volume194，pp182-187，AcademicIto1631978，ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesUSA751920 [0189](a)[0190]用于生產(chǎn)本發(fā)明的多肽的方法也可包括(a)在有益于多肽生產(chǎn)的條件下培養(yǎng)宿(b)重新獲得多肽。[0191]用于生產(chǎn)本發(fā)明的多肽的方法也可包括(a)在有益于產(chǎn)生多肽的條件下培養(yǎng)宿122 養(yǎng)基中進(jìn)行。合適的培養(yǎng)基可得自商業(yè)供應(yīng)商或根據(jù)的組合(例如，在AmericanTypeCultureCollection [0194]所得多肽可以使用本領(lǐng)域已知的方法重新獲得。例如，多肽可以通過(guò)以下常規(guī)方 York1989 、、[0199]多肽組合物可以根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法，并能夠以液體或干燥組合物的形式[0200] 、 、[0203]5％30％表面活性劑，優(yōu)選0.0050.1％蛋白酶活CoronasTMSavinasM0.001％粉酶活性蛋白，其中所述淀粉酶優(yōu)選選自TermamylTMNatalaseTMStainzymeTM和PurastarTM1A [0206](1) TAED或它們的混合物。 1135121101。[0211] 表面活性劑-如本發(fā)明所述的洗滌劑組合物可包含表面活性劑或表面活性劑體系其中所述表面活性劑可選自非離子表面活性劑陰離子表面活性劑陽(yáng)離子表面活性劑兩性表面活性劑兩性離子表面活性劑半極性非離子表面活性劑以及它們的混合物如果存在的話(huà)表面活性劑通常以按本組合物的重量計(jì)約0.1％至約60％約0.1％至約40％約0.1％至約12％約1％至約50％或者甚至約5％至約40％的含量存在。[0212] 如果存在的話(huà)所述洗滌劑通常將包含約1％至約40％的陰離子表面活性劑諸如直鏈烷基苯磺酸鹽α烯烴磺酸鹽烷基硫酸鹽(脂肪醇硫酸鹽)羥基環(huán)氧硫酸鹽仲烷基磺酸鹽α磺基脂肪酸甲酯烷基或烯基丁二酸或皂。[0213]0.240％的非離子表面活性劑，諸如醇乙氧基乙醇酰胺、多羥基烷基脂肪酸酰胺、或葡糖NN-烷基衍生物(“葡糖酰胺”)。[0214]助洗劑-本發(fā)明的洗滌劑組合物可包括一種或多種洗滌劑助劑或助洗劑體系。當(dāng)15％至約6010％至約40％的助洗堿金屬乙酸(如乙二胺四乙酸和氨三乙酸)(如苯六甲酸、酸、135三羧以及0.005％153.0％10％的螯合劑。熒光增白劑。這些增白劑吸收紫外光并發(fā)出可見(jiàn)光。合適的熒光增白劑含量包括從約0.01％重量0.05％重量0.1％重量，或甚至約0.2％重量的較低含量至0.5％重量或甚至0.75％重量的較高含量。[0217]分散劑-本發(fā)明的組合物還可包含分散劑。合適的水溶性有機(jī)物包括均聚或共聚 [0219]pH WO94/25583中。 WO92/19729，WO98/20115WO98/20116WO235245252274S103AV104IG159DA232VQ236H、Q245RN248DN252K)WO757679123127159[0222]優(yōu)選的可商購(gòu)獲得的蛋白酶包括AlcalaseTMSavinaseTMPrimaseTMDuralaseTM、EsperaseTM、CoronaseTM、PolarzymeTMandKannaseTM(NovozymesA/S)、MaxataseTM、MaxacalTMMaxmTMProperaseTMPurafectTMPurafectPrimeTMPurafectOxPTMFNAFN2FN3FN4(GenencorInternationalInc.[0223] 脂肪酶包括那些細(xì)菌或真菌來(lái)源的脂肪酶。包括化學(xué)改性的或蛋白質(zhì)工程的突EP258068EP305216WO96/13580(EP218272(EP331376)B1,372,034)SD705(WO95/06720WO96/27002))(WO96/12012)s(1993)BiochemicaetBiophsicaActa1131253-360)(JP64/744992)(WO91/16422) WO92/05249WO94/01541EP407225EP260105、WO95/35381WO96/00292WO95/30744WO94/25578WO95/14783WO95/22615 其它可商購(gòu)獲得的脂肪酶包括LipolaseTMLipolaseUltraTMLipexTM(NovozymesA/S)[0226]合適的淀粉酶(αβ)[0227]WO94/02597WO94/18314WO96/23873WO 304305391408和444[0228]DuramylTMTermamylTMStainzymeTMStainzymeUltraTMFungamylTMBANTM(NovozymesA/S)RapidaseTMPurastarTMGenencorInternationalInc.)。 US4,435,307US5,648,263US5,691,178US5,776,757 EP0495257EP0531372WO96/11262WO96/29397WO98/08940WO94/07998EP0531315US5,457,046US5,686,593US5,763,254WO95/24471WO98/12307PCT/DK98/00299[0231]RenozymeTMCellucleanTMEndolaseTMCelluzymeTM、和CarezymeTM(NovozymesA/S)ClazinaseTM、和PuradaxHATM(GenencorInternationalInc.)KAC-500(B)TM(KaoCorporation)。[0234]GuardzymeTM(NovozymesA/S)[0235]0.00001％至約20.0001％10.0010.5％酶蛋白的含量存在。[0236]WO92/19708描述的方法配制。[0237]溶劑-合適的溶劑包括水與其它溶劑如親脂性流體。合適的親脂性流體的實(shí)例包括[0238] 3025℃20℃以下是尤其有益的。水與織物的比率通常為約 EMPA221，來(lái)自EMPASt.Gallen，Lerchfeldstrasse5，CH-9014 ]342H6.5。一旦pH7.010％H3PO4來(lái)保持此值恒定。培養(yǎng)基中的溶解氧水平通過(guò)改變攪拌速率以及使用每升培養(yǎng)基每分鐘1.0料 AMSA 6mm，深10mm) PH度 [0253]505g(SantaMaria，Denmark100g(38Arla，[0254]酶變體的性能可通過(guò)用具體酶變體洗滌的織物樣品的顏色亮度進(jìn)量。亮度也可[0255](PFUDL2400pro)Kodak反射IT8色卡頻繁校準(zhǔn)掃描儀。[0256]使用一個(gè)特別設(shè)計(jì)的應(yīng)用(NovozymesColorVectoryzer)來(lái)從掃描圖 P＝Int(v)-Int(r)其中 體的性能(P)之和與參考酶性能的比值： (0.1250.250.51.0m RPavg＝ 2 (SPME-GC(GC)Stabilwax-DAw/Integra-Guard柱(30m0.32mm內(nèi)徑和0.25micro-mdf)CarboxenPDMSSPME(75micro-m)Varian3800GC0404022403 脂肪酶變體的風(fēng)險(xiǎn)性能氣味(R)是從脂肪酶變體洗滌樣品的丁酸與從具有2(R) [0272]α＝氣味測(cè)試酶-[0273]α＝氣味參考酶-空白[0274]R＝α/α參考 通過(guò)以下檢測(cè)分析U/A280測(cè)定脂肪酶相