糖的薄層層析課件

實(shí)驗(yàn)十

糖的薄層層析學(xué)時(shí):3一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握吸附層析法。2掌握薄層層析的原理和操作技術(shù)。二、實(shí)驗(yàn)原理

薄層層析是將吸附劑或支持物均勻地鋪在玻璃上成為薄層，然后把要分析的樣品加到薄層的一端，用合適的溶劑展開而達(dá)到分離目的。按照不同的樣品和不同的分離要求可選用不同的支持物，如硅膠G、硅藻土、氧化鋁G、纖維素、離子交換纖維素等。薄層層析的優(yōu)點(diǎn)是設(shè)備簡(jiǎn)單，操作方便，層析時(shí)間短，樣品用量范圍大（1μg～0.5g），靈敏度高，可以分離多種化合物，顯色方法可采用腐蝕性顯色劑，其分辨率較高。本實(shí)驗(yàn)是以硅膠G為支持物的薄層層析。在鋪有吸附劑的薄層上，樣品經(jīng)過連續(xù)反復(fù)的被吸附劑吸附及展開劑解吸附的過程后，不同的糖因其分子量不同，羥基數(shù)目及醛基、酮基性質(zhì)的差異，故而在薄層上以不同速度移動(dòng)而得以分離。被吸附劑吸附強(qiáng)及被展開劑解吸附弱的在薄層上移動(dòng)速度慢，展開距離短；反之則移動(dòng)速度快，展開距離長(zhǎng)，于是混合糖液中的各種糖就被分離開來。糖在薄板上的移動(dòng)速度是戊糖＞己糖＞雙糖＞三糖。在相同條件下，對(duì)照已知糖的Rf值可對(duì)未知糖進(jìn)行定性分析。三、實(shí)驗(yàn)材料、儀器和試劑1．實(shí)驗(yàn)材料和儀器：玻璃板、天平、電熱烘箱、電吹風(fēng)、毛細(xì)管、層析缸、噴霧器。2.試劑(1)、1%標(biāo)準(zhǔn)糖溶液：稱取木糖、鼠李糖、蔗糖、葡萄糖各100mg,分別用75%乙醇定容至10ml。(2)、混合糖溶液：稱取木糖、鼠李糖、蔗糖、葡萄糖各1g溶于50ml蒸餾水。(3)、糖顯色劑（苯胺－二苯胺－磷酸顯色劑）：稱取1g二苯胺，加入1ml苯胺。待溶解后加入50ml丙酮，最后加入5mlH3PO4，邊滴加邊攪拌。此溶液應(yīng)透明、無渾濁。(4)、展開劑：用前配制。1、正丁醇︰乙酸乙酯︰異丙醇︰冰乙酸︰水=2︰6︰6︰4︰12、氯仿︰甲醇=60︰40（V/V）(5)、0.02mol/L醋酸鈉（含有0.5%的CMC-Na）。四、實(shí)驗(yàn)步驟1、薄板制備：稱取硅膠G1.5g于燒杯中，加入0.02mol/L醋酸鈉6ml(含有CMC-Na0.5%），調(diào)成均勻糊狀后，立即傾于玻璃板上，使糊狀物迅速鋪平，布滿整塊玻板。將鋪好的硅膠G薄板于100℃烘箱中烘干（30min），取出后即可使用。2、點(diǎn)樣：用毛細(xì)管分別吸取4種標(biāo)準(zhǔn)糖溶液及其混合液，在距玻板一段1.5cm處，間距1cm分別點(diǎn)樣，用電吹風(fēng)吹干樣點(diǎn)。3、展開：先在層析缸中放入展開劑，液面不要超過點(diǎn)樣線，將硅膠板點(diǎn)樣點(diǎn)朝下放入層析溶劑中，將層析缸密閉，待溶劑到達(dá)標(biāo)志線(距玻璃板上緣一厘米處）后取出電吹風(fēng)吹干。4、顯色：用噴霧器向薄層均勻地噴上糖顯色劑，置于80～100℃烘箱烘烤約3～5min，至色斑出現(xiàn)為止。5、記錄各斑點(diǎn)的位置、顏色，繪出層析圖譜。計(jì)算各標(biāo)準(zhǔn)糖及混合糖中各組分斑點(diǎn)的Rf值，以鑒定混合糖中糖的組分。

移動(dòng)速率(比移值)：

原點(diǎn)到層析點(diǎn)中心的距離