實(shí)驗(yàn)五 微生物的接種技術(shù)及分離純課件

實(shí)驗(yàn)五微生物的接種技術(shù)及分離純化目的要求初步掌握微生物的分離、培養(yǎng)和菌種保藏的基本方法。

練習(xí)微生物接種、移植和培養(yǎng)的基本技術(shù)，掌握無(wú)菌操作技術(shù)。實(shí)驗(yàn)原理土壤是微生物生活的大本營(yíng)，為了獲得某種微生物的純培養(yǎng)，一般是根據(jù)該微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)、酸堿度、氧等條件要求不同，而供給它適宜的培養(yǎng)條件，或加入某種抑制劑，淘汰其他一些不需要的微生物，再用各種方法分離、純化該微生物，直至得到純菌株。稀釋涂板法、劃線(xiàn)分離實(shí)驗(yàn)材料樣品：新鮮土壤。培養(yǎng)基：滅菌的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基、高氏一號(hào)培養(yǎng)基、馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基。無(wú)菌水：帶有玻璃珠裝有45mL無(wú)菌水三角瓶、裝有9mL無(wú)菌水的試管。其它：無(wú)菌培養(yǎng)皿、無(wú)菌吸管、無(wú)菌三角玻棒、電子天平、記號(hào)筆、接種環(huán)、酒精燈、火柴。試劑：1萬(wàn)U/mL鏈霉素液、10％苯酚實(shí)驗(yàn)步驟稀釋涂板法劃線(xiàn)分離微生物的培養(yǎng)制平板：每組制培養(yǎng)皿3付。

在無(wú)菌培養(yǎng)皿底部注明分離菌名、稀釋度、組別、班級(jí)。實(shí)驗(yàn)步驟1（微生物的分離—稀釋涂平板法）制備土壤稀釋液：(無(wú)菌操作過(guò)程見(jiàn)教師示范）1.稱(chēng)取土壤5g，放入45mL無(wú)菌水的三角瓶中，振蕩10min，即為稀釋10－1的土壤懸液。

2.另取裝有9mL無(wú)菌水試管5支，用記號(hào)筆編上10－2、10－3、10－4、10－5、10－6。取已稀釋成10－1的土壤液，振蕩后靜止0.5min，用無(wú)菌吸管吸取1mL土壤懸液加入10－2的無(wú)菌水的試管中，并在試管內(nèi)輕輕吹吸數(shù)次，使之充分混勻，即成10－2土壤稀釋液。同法依次連續(xù)稀釋至10－4、10－5、10－6土壤稀釋液。

在土壤稀釋過(guò)程中，需換用不同的吸管吸取稀釋液

取一吸管，以無(wú)菌操作法分別吸取10－4、10－5、

10－6土壤稀釋液0.1mL，加在已制好的平板培養(yǎng)基上。涂板

用玻璃刮鏟將稀釋液在培養(yǎng)機(jī)上充分混勻鋪平，倒置于恒溫箱培養(yǎng)。計(jì)算出每克土壤中細(xì)菌的數(shù)量。

即用某一培養(yǎng)皿內(nèi)真菌的菌落數(shù)乘以該培養(yǎng)皿接種液的稀釋倍數(shù)即得。挑取單個(gè)菌落，進(jìn)行劃線(xiàn)分離。實(shí)驗(yàn)程序2（微生物的分離—混菌法）制平板吸取稀釋液

取一吸管，以無(wú)菌操作法分別吸取10－4、10－5、

10－6土壤稀釋液0.1mL，加在空培養(yǎng)皿中?；炀?/p>

水平輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使菌液、培養(yǎng)基充分混勻鋪平，放在平坦的桌面上，凝固后倒置于恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。計(jì)算出每克土壤中放線(xiàn)菌的數(shù)量。挑取單個(gè)菌落，進(jìn)行劃線(xiàn)分離。實(shí)驗(yàn)程序4（微生物的接種方法）接種方法：常用的有斜面接種法、平板接種法、液體接種法、試管深層固體培養(yǎng)基的穿刺接種法。接種工具：常用的有接種針、接種環(huán)、接種鉤、接種圈、接種鏟或接種鋤、玻璃涂棒等（見(jiàn)圖－6）。圖－6