DB15T 2734-2022向日葵總DNA快速提取及檢測(cè)技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.01CCSICS65.020.01CCSB05內(nèi)蒙古自治區(qū)地方標(biāo)準(zhǔn)DB15/T2734—2022向日葵總DNA快速提取及檢測(cè)技術(shù)規(guī)程TechnicalcodeofpracticeforrapidextractionanddetectionoftotalsunflowerDNA2022-07-292022-07-292022-08-29內(nèi)蒙古自治區(qū)市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧廳提出。本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（SAM/TC20）歸口。本文件主要起草人：郭樹(shù)春、李素萍、張艷芳、孫瑞芬、邵盈、于海峰、劉慧、李麗君、李二珍、段宇坤、聶惠、喬慧蕾、牟英男、張勇、張曉蒙、梁晨、張聰子、李有良、張立華、劉錦川。向日葵總DNA快速提取及檢測(cè)技術(shù)規(guī)程范圍DNADNA本文件沒(méi)有規(guī)范性引用文件。本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。DNADNA0.8μg～1.2μg，DNAA260/280值在1.8～2.0之間。5藥品準(zhǔn)備藥品準(zhǔn)備見(jiàn)附錄A。6DNA提取樣品準(zhǔn)備取向日葵4～8葉期的葉片、根、莖80mg～120mg。樣品研磨1.5mL離心管加入樣品，液氮制冷，用磨砂尖頭玻璃棒迅速研磨成粉末。DNA抽提DNA抽提方法：700μl2%CTAB（A）；651h10min700μl/（24∶1）10min。離心沉淀方法：410000rpm6min；700μl430min；10000rpm1min；1mL70%DNA2，10000rpm1min將6.4得到的沉淀物在超凈工作臺(tái)下風(fēng)干，加入1×TE100μl（1μl10mg/mlRNase）溶解DNA，在37℃水浴中水浴1h去除RNA。DNA紫外分光光度計(jì)測(cè)定DNA濃度，并將其稀釋到20ng/μl，取5μl稀釋液，以DL2000marker為對(duì)照，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。具體檢測(cè)方法見(jiàn)附錄B。保存DNA質(zhì)量檢測(cè)合格后，-20℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩NA提取過(guò)程中注意事項(xiàng)：DNA提取過(guò)程中注意事項(xiàng)：——加入CTAB后輕輕搖勻，防止基因鏈斷裂；——操作過(guò)程中，全程佩戴醫(yī)用口罩和專(zhuān)用手套。附錄A（2%CTAB：CTAB4g，Nacl16.364g，1MTris-HCI20ml(PH8.0)，0.5MEDTA8ml，70mlddH20200ml1MTris-HCITris6.06g40mlddH202.1mlPH至8.0，定容至50ml。0.5MEDTA(pH8.0)50ml9.306gEDTA-Na2·2H2035ml1gNaOHpH8.050ml(EDTANaOHpH8.010×TE：5ml1MTris-HCI，1ml0.5MEDTA44ml1ml10×TE9ml1×TE。27.55420mL0.5mol·L-1ddH2O1L19ddH2O0.5×TBE。附錄B（資料性）1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)方法：1（70