如何解讀肝炎病毒核酸定量檢測(cè)結(jié)果

如何解讀肝炎病毒核酸

定量檢測(cè)結(jié)果乙型肝炎病毒核酸

HBVDNAPrevalenceofHBsAginChina

Sero-epidemiologicalSurvey200681,775personssurveyedin160registriesin31provinces;HBsAgprevalence:7.18%(9.72%in1992)HBV基因組AntibodiestothevirusAnti-HBc,Anti-HBc-IgMAnti-HBeAnti-HBsSeverityofliverdamageBilirubinAlbuminProthrombintimeMarkersofthevirusHBVDNAHBeAgHBsAgcccDNAMarkersofliverdamageALTASTBilirubin乙型肝炎實(shí)驗(yàn)室診斷5HBVDNA定量的臨床意義病毒復(fù)制的指標(biāo)長(zhǎng)期感染臨床轉(zhuǎn)歸預(yù)測(cè)抗病毒治療指征抗病毒治療應(yīng)答評(píng)估，及時(shí)調(diào)整治療方案隱匿性乙肝病毒感染的診斷病毒變異的提示<<>>HBeAg+HBeAg-/anti-HBe+(precore/corepromotervariants)ALTHBVDNANormal/mild

CHModerate/severeCHModerate/severeCHNormal/mildCHCirrhosisImmuneToleranceImmuneClearanceLowReplicativePhaseReactivationPhaseCirrhosis<2000IU/mL>2000IU/mLInactivecirrhosis2x108-

2x1011IU/mL慢性HBV感染自然過(guò)程200,000-2x109IU/mLInactive-carrierstateHBeAg-

chronichepatitis

HBeAg+

chronichepatitisHBV病毒載量

與肝硬化、肝癌發(fā)生顯著相關(guān)各指南抗病毒治療適應(yīng)癥對(duì)照2005中國(guó)指南2007AASLD2008APASL2008Keeffe2009EASLHBeAg(+)CHB患者HBVDNA≥105cp/mLHBVDNA>20,000IU/mLHBVDNA>20,000IU/mLHBVDNA>20,000IU/mLHBVDNA>2,000IU/mLHBeAg(-)CHB患者HBVDNA≥104cp/mLHBVDNA>2,000IU/mLHBVDNA>2,000IU/mLHBVDNA>2,000IU/mLALT≥2ULN或ALT<2ULN，但肝組織學(xué)顯示KnodellHAI≥4或≥G2炎癥壞死ALT>2ULN或ALT<2ULN肝活檢顯示中重度炎癥或顯著纖維化ALT>2ULN，或年齡>40歲且ALT接近ULN的患者，建議進(jìn)行肝活檢ALT>ULN，或ALT正常但年齡>35-40歲，證實(shí)有組織學(xué)病變和/或血清ALT>ULN且肝組織活檢或有效的非創(chuàng)傷性指標(biāo)≥MetavirA2F2

1.慢性乙型肝炎防治指南ChineseHepatology,Dec2005,10(4)：348～3572.LokA.Gastroenterolog2007;132:1586-15943.LiawY-F,etal.HepatolInt(2008)2:pp2664.KeeffeEB,etal.ClinGastroenterolHepatol2008;6:1315–13415.EASLClinicalPracticeGuideline:ManagementofCHB,JHepatol50(2009),doi:10.1016/j.jhep.2008.10.001中國(guó)慢乙肝防治指南

對(duì)口服抗病毒藥物治療慢乙肝療程的建議

HBeAg（+）:≥1年HBVDNA轉(zhuǎn)陰、ALT復(fù)常且發(fā)生e抗原血清轉(zhuǎn)換后繼續(xù)治療12月（≥2年）

HBeAg（-）:≥1年HBVDNA轉(zhuǎn)陰、ALT復(fù)常后繼續(xù)治療18月（≥2.5年)2009EASL指南推薦的治療終點(diǎn)對(duì)于HBeAg(+)及HBeAg(-)患者，理想的治療終點(diǎn)是持久的HBsAg轉(zhuǎn)陰(不論是否伴隨血清轉(zhuǎn)換至anti-HBs)對(duì)于HBeAg(+)患者，持久的HBeAg血清轉(zhuǎn)換是令人滿意的終點(diǎn)對(duì)于尚未達(dá)到HBeAg血清轉(zhuǎn)換的HBeAg(+)患者、及HBeAg(-)患者，基本的治療終點(diǎn)是HBVDNA持續(xù)處于不可測(cè)水平根據(jù)HBVDNA的應(yīng)答調(diào)整治療方案12周

評(píng)估原發(fā)無(wú)應(yīng)答24周評(píng)估早期療效預(yù)測(cè)因素完全應(yīng)答PCR檢測(cè)HBVDNA陰性部分應(yīng)答HBVDNA60到<2000IU/mL不充分應(yīng)答HBVDNA≥2000IU/mL繼續(xù)治療每6個(gè)月監(jiān)測(cè)增加另一種沒(méi)有交叉耐藥的藥物,或者繼續(xù)每3個(gè)月監(jiān)測(cè)增加另一種沒(méi)有交叉耐藥的藥物或換成另一種更強(qiáng)效的藥物,并且每3個(gè)月監(jiān)測(cè)治療中DNA監(jiān)測(cè)對(duì)持續(xù)應(yīng)答的預(yù)測(cè)LAM治療52周1

HBeAg+ETV治療52周2

HBeAg+LdT治療52周1

HBeAg+

HBVDNA水平隨訪期間PCR陰性的患者

(%)n=<QL<QL<QL≥QL≥QL≥QL842096509533020406080100146317255153160203≥HBVDNAandHBsAgarekeyto

diagnosisandmonitoringofCHBHBsAgandHBVDNAprovidedifferentbutcomplementaryinformationPresenceofHBsAginserumfor>6monthsdefinesCHBInhibitViralReplicationEstablish

ImmuneControlQuantitativeHBVDNAQuantitativeHBsAgOptimizeHBVTreatmentandImprovePatientOutcomesHBVDNAandHBsAg:ComplementarymarkersformonitoringCHBpatientsHBsAglevelsprovidesseparationbetweenrelapsersandrespondersTreatmentperiod0Time(weeks)122448729612345678HBVDNA(logcopies/mL)0Sustainedresponders(N=12)*Relapsers(N=18)**Non-responders(N=18)**HBVDNAundetectableatEOTbutdetectedinfollowing24weeksTreatmentperiod122448729612340HBsAg(logIU/mL)Time(weeks)0HBeAg-positivepatientstreatedwithPEG-IFN-2b+/-lamivudinefor52weeks*HBVDNAundetectablebyPCR1yearpost-treatmentDifferenttestsprovidedifferentlevels

ofinformationoninfectionandresponse

totherapyHBVDNAHBVDNAAnti-

HBsQuant

HBsAgHBeAg,HBVDNAHBVDNA,ALTHBsAg,HBeAg,

anti-HBe,anti-HBcIgMDiagnoseIdentifyinitial

responsePredictsustained

responseDemonstratesustained

response/indicateimmunityInitiate

therapy

野生型病毒及其變異株

自然界物種普遍存在變異，變異是生物適應(yīng)環(huán)境謀求生存的重要方式，對(duì)遺傳進(jìn)化有重要意義。野生型病毒包括多種有差異的毒株，表現(xiàn)為不同的基因型、亞型病毒變異是指基因型以外的改變變異類(lèi)型：點(diǎn)突變、重組、移框突變病毒變異的結(jié)果負(fù)性選擇：發(fā)生對(duì)病毒自身是致死性的或有害的改變適應(yīng)性選擇：復(fù)制能力增強(qiáng)逃避免疫清除：一處或多處氨基酸替代改變了病毒表位耐藥逃逸：病毒基因序列中有效靶位的改變,停藥后野毒株可重新成為優(yōu)勢(shì)株，抗藥性可以消失PreC突變和HBeAg陰性的慢性乙型肝炎DNAATGATGTAGP25e固定裂解部位P15-18eP21C組裝病毒血清可變裂解部位內(nèi)質(zhì)網(wǎng)DNAATGATGTAGP21C組裝病毒？終止密碼（A）（B）ATG啟動(dòng)密碼子，TAG終止密碼子。單線表示DNA，條帶表示抗原蛋白，灰?guī)П硎拘盘?hào)肽。由第一個(gè)（前C）ATG編碼HBeAg的前體P25e，裂解為HBeAg（P15-18e）；由第二個(gè)（C基因）ATG編碼HBcAg（P21C）。前C區(qū)A83變異使HBeAg缺失。P25e的殘端作用不明。PrecoremutationsaremorelikelywithHBVgenotypesB,C,D,E1858LoopBulgeStemIIStemI1896WildTypeTGEnhancedstabilitybasepairing1858LoopBulgeStemIIStemI1896PrecoreMutantTAMann-WhitneyU-Testp<0.05HBVVariantsandHBeAgTitreinvivo

PC/BCPvariantsreduceHBeAgtitreWildtypeBCPPCHBeAgcorrelatedweaklywithserumHBVDNAr=0.35p=0.001PrevalenceofHBeAg-veCHBAmongHBsAgCarriersinAsiaInAsiaamedianof50%(range19-100%)ofHBeAg-veCHBpatientshaveprecoremutants19%21%16%IndiaChinaJapan11%Hong

KongTaiwan20%HBsAg突變的產(chǎn)生及其臨床意義Naturallyoccurring(variations)VaccinationInjectionsofHBIGMutationsintheoverlappingpolymerasegene(antiviral-drug-associated)MutantvirusesmayescapedetectionbycertaincommercialHBsAgkitsMutationsidentifiedfromthe“a”determinant(124aa-147aa)tothemajorhydrophilicregion(MHR,99aa-169aa)NaturallyoccurringorcausedbyimmuneselectionpressureHBsAgnegativehepatitisB

(OcculthepatitisBinfection,OBI)PatholBiol(Paris).2010Mar18.[Epubaheadofprint]

隱匿性乙肝

Anti-HBc滴度與HBV載量關(guān)系

（s陰性獻(xiàn)血員）HBsAg衣殼部分雙鏈

DNA拉米夫定阿德福韋恩替卡韋替比夫定A(n)有感染性的乙肝病毒顆粒(-)-DNA有感染性的乙肝病毒顆粒mRNAcccDNADNA多聚酶RT被包裹的前基因組mRNA核苷(酸)類(lèi)似物作用靶點(diǎn)及RT區(qū)基因突變Antiviral-drug–associatedpotentialvaccinemutants(ADAPVMs)

AdaptedfromLocarniniSA,YuenL.AntivirTher.2010andLeeJM,AhnSHWJG2011耐藥突變的檢測(cè)方法SequencesanalysisLineprobeassayPCR-RFLPanalysisReal-timePCRDNAchip質(zhì)譜測(cè)定法(MALDI-TOFMS)

高通量測(cè)序抗病毒治療持續(xù)時(shí)間野生型病毒耐藥病毒32651104987AmplicorHBV監(jiān)測(cè)?V2.0

HBVDNA的最低檢測(cè)極限

log10

拷貝/ml檢測(cè)方法敏感度影響臨床判斷丙型肝炎病毒核酸

HCVRNA我國(guó)人群血清HCV抗體的陽(yáng)性率0.58%我國(guó)六大省市血清HCV抗體陽(yáng)性率源自:2007年P(guān)LoSONE2007年瑞金醫(yī)院各科室患者HCV抗體陽(yáng)性檢測(cè)出率0.72%推測(cè)上海自然人口血清HCV抗體陽(yáng)性率源自：黃翀、仇德琪、張欣欣，2009，肝臟HCV感染實(shí)驗(yàn)診斷血清學(xué)特異性抗HCV抗體(anti-HCV)檢測(cè)方法:酶免法，化學(xué)發(fā)光法確認(rèn)實(shí)驗(yàn)(RIBA=recombinantimmunoblotassay)

HCV核心抗原(HCVcoreAg)核酸檢測(cè)HCV-RNAPCR基因型及亞型檢測(cè)DNA序列分析，芯片丙型肝炎病毒基因組及其編碼的蛋白HCVRNA定量的臨床意義病毒復(fù)制的指標(biāo)診斷病毒感染，縮短窗口期抗病毒治療指征抗病毒治療應(yīng)答評(píng)估，及時(shí)調(diào)整治療方案HCV感染血清學(xué)癥狀±暴露后時(shí)間滴度抗-HCVALT正常01234561234年月HCV-RNAHCV核心抗原癥狀±暴露后時(shí)間滴度抗-HCVALT正常01234561234年月HCV-RNAHCV核心抗原15%左右急性感染痊愈75%左右急性感染進(jìn)展為慢性感染0102030405060708090100HCVRNAHCV抗原HCV抗體第一代抗體檢測(cè)第三代抗體檢測(cè)第二代抗體檢測(cè)HCV抗原HCVRNA病毒核酸及抗原檢測(cè)可縮短窗口期早期發(fā)現(xiàn)感染，早期治療感染日：0HCVRNA：12天

HCV抗原：12~15天抗HCV：30~70天40丙肝抗體檢測(cè)結(jié)果可能與臨床不符抗HCVHCV抗原HCVRNA說(shuō)明陰性陰性未感染陽(yáng)性陽(yáng)性活動(dòng)性感染（急性或慢性）陰性陽(yáng)性早期感染免疫抑制患者的慢性感染

陽(yáng)性陰性既往感染假抗HCV反應(yīng)性結(jié)果“被動(dòng)”獲得的抗體清除或持續(xù)抑制體內(nèi)HCV，獲得持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答(SVR)穩(wěn)定或減輕肝損害、防止進(jìn)展為肝硬化、肝衰竭或HCC改善患者的生活質(zhì)量抗病毒治療目的抗病毒治療應(yīng)答的定義根據(jù)HCVRNA定量結(jié)果決定抗病毒治療療程（RGT策略）影響抗病毒治療療效的因素病毒因素：基因型病毒載量病毒準(zhǔn)種治療因素：藥物類(lèi)型患者依從性不良反應(yīng)處理應(yīng)答情況應(yīng)答快慢應(yīng)答程度宿主因素：肥胖人種年齡合并感染合并慢性病疾病