卡介苗治療腫瘤的論文（共2篇）

卡介苗治療腫瘤的論文〔共2篇〕第1篇：腫瘤中卡介苗藥物治療的方法膀胱腫瘤是泌尿系統(tǒng)中最常見(jiàn)的腫瘤，90%以上為移行上皮細(xì)胞癌，大部分為淺表性膀胱癌,除了用手術(shù)治療以外，還須輔以抗腫瘤藥物膀胱內(nèi)灌注治療，但有一定的復(fù)發(fā)率和應(yīng)用藥物的副作用，其中卡介苗是重要的治療藥物。本研究采取MNU膀胱灌注誘導(dǎo)建立大鼠膀胱腫瘤模型，用塞來(lái)昔布和卡介苗單獨(dú)和聯(lián)合用藥，評(píng)價(jià)其療效，以尋求更安全有效的膀胱腫瘤藥物聯(lián)合治療方法。1材料與方法1.1材料實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及重要試劑5～6周齡Wistar雌性大鼠，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；MNU由美國(guó)Sigma公司生產(chǎn)；凍干卡介苗購(gòu)自上海生物制品研究所；塞來(lái)昔布由美國(guó)輝瑞公司生產(chǎn)。試劑的配制MNU溶液：用pH6.0的0.1mol/L枸櫞酸緩沖液為溶劑，將MUN配成濃度為20mg/ml的溶液，每只大鼠用量0.1ml。BCG溶液：50mg/支凍干卡介苗溶于5ml生理鹽水中，每只大鼠用量0.1ml。塞來(lái)昔布:每只大鼠用量100mg/kg，按大鼠體重確定其用量，溶于2ml生理鹽水中。1.2方法膀胱腫瘤大鼠模型的制備40只大鼠造模經(jīng)過(guò)：灌注前腹腔內(nèi)打針0.6%的戊巴比妥鈉麻醉動(dòng)物，劑量為2.5ml/kg。起效后仰臥固定，0.1%的碘伏消毒尿道外口后，用5cm硬膜外導(dǎo)管導(dǎo)尿排空膀胱后，接上帶有6號(hào)半針頭的1ml打針器按計(jì)劃向膀胱內(nèi)注入0.1mlMNU溶液，每2周1次，共5次。分組及處理于第10周，將40只大鼠隨機(jī)分為4組：PBS組，塞來(lái)昔布組、卡介苗組、塞來(lái)昔布+卡介苗組，每組10只。開(kāi)始給予藥物干涉治療，分別給予0.1mlPBS、100mg/kg塞來(lái)昔布、0.1ml卡介苗、100mg/kg塞來(lái)昔布+0.1ml卡介苗，PBS與卡介苗采取膀胱灌注給藥，每周1次，共3次，塞來(lái)昔布采取灌胃給藥，天天1次，共3周。1.3標(biāo)本處理病理切片觀察：于第13周采取斷頸法處死大鼠，解剖膀胱，完好切取膀胱，于膀胱前壁剖開(kāi)，觀察膀胱內(nèi)外表及腫瘤構(gòu)成的大體情況；在病變明顯處切取部分腫瘤組織，置于中性福爾馬林溶液中固定24h，慣例石蠟包埋，4μm切片，HE染色，顯微鏡下觀察。1.4免疫狀況檢測(cè)：用免疫組化法分別檢測(cè)切片中腫瘤組織中CD3+、CD4+、CD8+的表達(dá)量；TUNEL法檢測(cè)腫瘤組織細(xì)胞的AI值。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用x±s表示，所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采取SPSS11.5軟件進(jìn)行處理,用SNK法進(jìn)行多個(gè)樣本均數(shù)的方差分析，以α=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。2結(jié)果誘發(fā)膀胱腫瘤情況解剖切開(kāi)膀胱發(fā)現(xiàn)膀胱壁增厚、慘白、菜花狀新生物構(gòu)成，絕大多數(shù)為多發(fā)腫瘤。HE染色結(jié)果:移行上皮構(gòu)造特征部分消失，呈彌漫分布或排列成實(shí)體性癌灶。細(xì)胞異形明顯，表現(xiàn)為細(xì)胞大小不一，排列紊亂，極向消失，核畸形，核漿比例大，核分裂像明顯。每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，計(jì)數(shù)3個(gè)視野，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占細(xì)胞總數(shù)的百分率。其余3組CD3+、CD4+、CD8+細(xì)胞的浸潤(rùn)百分比與PBS組相比，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義〔P0.05〕。聯(lián)合用藥組與卡介苗組及塞來(lái)昔布組比較，免疫細(xì)胞浸潤(rùn)更明顯〔P0.05〕，聯(lián)合用藥能夠加強(qiáng)免疫細(xì)胞在腫瘤組織部分的作用。各組均出現(xiàn)不同水平的腫瘤細(xì)胞核呈棕褐色染色。其他實(shí)驗(yàn)組AI均明顯高于PBS組〔P0.05〕。且聯(lián)合用藥組與卡介苗組及塞來(lái)昔布組比較凋亡更明顯，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義〔P0.05〕。3討論研究發(fā)現(xiàn)，以卡介苗為基礎(chǔ)的聯(lián)合灌注治療能夠明顯地延長(zhǎng)膀胱癌患者的總體生存時(shí)間?？ń槊绨l(fā)揮抗癌作用的重要方式是通過(guò)激活免疫系統(tǒng)而發(fā)揮作用[1]。最近研究表示清楚,在淺表性膀胱癌和人類其他腫瘤的癌組織和細(xì)胞系中檢測(cè)到COX-2蛋白及分子水平都有高表達(dá)[2-4]。COX-2誘導(dǎo)產(chǎn)生的PGE2分泌增長(zhǎng)與機(jī)體免疫抑制相關(guān)，PGE2能降低機(jī)體的抗腫瘤免疫而促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)[5]。研究以為，塞來(lái)昔布抗腫瘤效應(yīng)重要是通過(guò)降低PGE2水平進(jìn)而加強(qiáng)免疫系統(tǒng)的功能來(lái)起作用的。研究表示清楚，在BCG激活的膀胱腫瘤部分免疫中，CD4+T細(xì)胞在膀胱黏膜下層的浸潤(rùn)是最主要的，CD4+T細(xì)胞的表達(dá)量直接關(guān)系到BCG激活的免疫系統(tǒng)的效能[6]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，聯(lián)合用藥組CD3+、CD4+T細(xì)胞比單獨(dú)用藥組有顯著的增加，其差異不同有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究中，CD8+T細(xì)胞的表達(dá)量用藥組比PBS組均減小，聯(lián)合用藥組減少更顯著。研究表示清楚，CD8+T細(xì)胞在用藥治療早期是升高的，但是治療后期會(huì)下降，這與大量的CD8+T細(xì)胞作用于腫瘤細(xì)胞，殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，本身也崩解、凋亡有關(guān)。塞來(lái)昔布組與PBS組比較，腫瘤免疫細(xì)胞的表達(dá)量的差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這說(shuō)明在無(wú)BCG激活部分免疫反應(yīng)的條件下，使用塞來(lái)昔布難以充足調(diào)動(dòng)機(jī)體的免疫反應(yīng)，其抗腫瘤效應(yīng)重要是通過(guò)抑制PGE2的產(chǎn)生進(jìn)而提升腫瘤定向細(xì)胞毒性作用[7]。說(shuō)明聯(lián)合使用塞來(lái)昔布和卡介苗能夠更大地激活免疫系統(tǒng)的反應(yīng)性。凋亡細(xì)胞指數(shù)是衡量組織中細(xì)胞凋亡發(fā)生水平的一項(xiàng)指標(biāo)，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)TUNEL法檢測(cè)各組腫瘤組織的凋亡細(xì)胞，觀察藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的凋亡和生長(zhǎng)抑制的影響。本研究中，聯(lián)合用藥組的AI值明顯高于其他各組，差異不同有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明聯(lián)合塞來(lái)昔布和卡介苗能顯著增長(zhǎng)腫瘤細(xì)胞的凋亡，抑制其分化增值。綜上所述，塞來(lái)昔布聯(lián)合卡介苗治療膀胱腫瘤，比單純使用卡介苗及塞來(lái)昔布更有效，但要成為一種新的膀胱腫瘤的治療方法，還需要進(jìn)一步的試驗(yàn)和研究。劉彥斌，米振國(guó)，楊新晶，任連生第2篇：卡介苗治療腫瘤的啟示膀胱癌是沁尿系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤，其中約75%為淺表性膀胱癌，它的特點(diǎn)是極易復(fù)發(fā)。怎樣降低腫瘤復(fù)發(fā)一直是人們探究的焦點(diǎn)。自1976年莫拉萊斯將卡介苗〔BCG)，灌注膀胱成功地治療人膀胱癌以來(lái)[1]，國(guó)內(nèi)外對(duì)BCG的治療做了很多基礎(chǔ)和臨床研究。如今，BCG膀胱內(nèi)灌注也成為膀胱原位癌和淺表性膀胱癌的一種最有效的治療手鍥2。2002年，巴錫(Bassi)總結(jié)了1496例病人的臨床研究資料證明，BCG治療膀胱原位癌的完全緩解率為60%~79%[3]。當(dāng)前以為BCG治療膀胱癌是腫瘤免疫治療最為成功的范例之一。因而，對(duì)BCG治療膀胱癌機(jī)制的分析和討論可能為正在開(kāi)展的腫瘤細(xì)胞免疫治療提供一些新的研究策略。1BCG治療淺表性膀觥癌的免疫機(jī)制由于膀胱的解剖特征，BCG灌注后能與腫瘤細(xì)胞和腫瘤內(nèi)的基質(zhì)細(xì)胞充足接觸，治療后的組織學(xué)和細(xì)胞學(xué)檢查以及尿中的免疫細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞等產(chǎn)生的細(xì)胞因子和其他產(chǎn)品，均可通過(guò)膀胱鏡和尿液檢查獲得，這為全面了解治療機(jī)制提供了具體的信息。當(dāng)BCG灌注膀胱后，在纖連蛋白的介導(dǎo)下，尿道上皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞將其內(nèi)吞，被內(nèi)吞后消化處理的菌體蛋白、脂類、小分子肽和糖類物質(zhì)能夠更好的刺激和募集免疫效應(yīng)細(xì)胞，產(chǎn)生一系列免疫級(jí)聯(lián)反應(yīng)。通過(guò)膀胱鏡活檢和尿液細(xì)胞學(xué)檢查證明，參與免疫反應(yīng)的細(xì)胞既有固有免疫應(yīng)答細(xì)胞也有適應(yīng)性免疫應(yīng)答細(xì)胞。在參與的這些細(xì)胞中樹突狀細(xì)胞〔DC)起到非常關(guān)①當(dāng)兵的人第九七醫(yī)院江蘇徐州鍵的作用，由于它既能夠激活固有免疫細(xì)胞產(chǎn)生非特異性免疫應(yīng)答，又能夠激活T細(xì)胞產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答。研究證明，膀胱癌組織中樹突狀細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)與預(yù)后親密相關(guān)[4]。近些年研究表示清楚，結(jié)核桿菌低分子多肽抗原可特異性地?cái)U(kuò)増免疫Y沏細(xì)胞。Y沏細(xì)胞對(duì)多種腫瘤細(xì)胞具有殺傷溶解活性，它對(duì)抗原的辨別是MHC非限制性的，能直接辨別應(yīng)激抗原、磷酸化抗原和熱休克蛋白等內(nèi)源分子，在卡介苗膀胱灌注后，可在膀胱癌組織中檢出激活的Y茳細(xì)胞。除此之外，BCG中的一些成份是廣泛表達(dá)于免疫細(xì)胞外表的Toll樣受體配基，它們之間的互相作用同樣能誘發(fā)細(xì)胞因子的合成和分泌，誘發(fā)炎癥反應(yīng)，促進(jìn)DC向T細(xì)胞提呈抗原，啟動(dòng)T細(xì)胞應(yīng)答，進(jìn)而使固有免疫和適應(yīng)性免疫嚴(yán)密相聯(lián)。因而，BCG膀胱灌注后幾乎引發(fā)了機(jī)體固有免疫和適應(yīng)性免疫中的所有抗腫瘤免疫效應(yīng)細(xì)胞。假如把上述抗腫瘤免疫效應(yīng)細(xì)胞比方為加入戰(zhàn)斗中的各軍軍種的兵士，那么免疫細(xì)胞釋放的各種介質(zhì)、細(xì)胞因子和趨化性細(xì)胞因子等則構(gòu)成信息傳遞系統(tǒng)和武器系統(tǒng)，只要這些系統(tǒng)運(yùn)轉(zhuǎn)正常，能力最終殺死癌細(xì)胞。膀胱內(nèi)灌注BCG后，除了激活各種免疫效應(yīng)細(xì)胞釋放細(xì)胞因子外，膀胱粘膜上皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞等也產(chǎn)生一些細(xì)胞因子，在這些細(xì)胞因子中，主要的有IL一12、IFN—r?和IL一2這些細(xì)胞因子通過(guò)龐大的免疫細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)效應(yīng)來(lái)擴(kuò)大和増強(qiáng)其抗腫瘤作用。除此之外BCG膀胱內(nèi)灌注后，可以被腫瘤細(xì)胞內(nèi)化，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞外表MHC—II類分子、細(xì)胞內(nèi)粘附分子1和Fas受體的表達(dá)，這樣免疫效應(yīng)細(xì)胞就能容易辨別和粘附腫瘤細(xì)胞，通過(guò)Fas—FasL和穿孔素等作用使其凋亡和死亡。2BCG成功治療膀觥癌對(duì)腫瘤免疫治療的啟示現(xiàn)代研究表示清楚，固有免疫和適應(yīng)性免疫應(yīng)答中的細(xì)胞均參與抗腫瘤免疫，如樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞、Y茳細(xì)胞、CD3+/CD8+T細(xì)胞和CD3+細(xì)胞，其中樹突狀細(xì)胞既參與固有免疫應(yīng)答，也參與適應(yīng)性免疫應(yīng)答。從上述能夠看出，BCG膀胱內(nèi)灌注后參于的細(xì)胞如此諸多，與參于調(diào)節(jié)的細(xì)胞因子、協(xié)同刺激分子、粘附分子和集落刺激因子等構(gòu)成一個(gè)復(fù)雜的抗腫瘤免疫效應(yīng)網(wǎng)絡(luò)，細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子作用于不同的靶細(xì)胞，效應(yīng)細(xì)胞之間的互相作用通過(guò)信息分子又刺激放大這些細(xì)胞的免疫效應(yīng)功能，使得抗腫瘤免疫效應(yīng)既充足又持久，進(jìn)而獲得很好的臨床治療效果。在牽涉的細(xì)胞因子中多為Thl細(xì)胞因子，沒(méi)有能檢出Th2細(xì)胞因子中的關(guān)鍵分子IL一4通過(guò)對(duì)患膀胱癌小鼠基因剔除技術(shù)發(fā)現(xiàn)，IL一12和頂F—Y是抗腫瘤關(guān)鍵分子。從上述治療的免疫病理性改變和獲得的臨床療效給我們很多啟示：2.1有效的腫瘤生物治療必需聯(lián)合固有免疫和適應(yīng)免疫反應(yīng)中的免疫細(xì)胞協(xié)同作用從2080年代，美國(guó)國(guó)立癌癥研究所羅森伯將淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞〔LAK細(xì)胞〕應(yīng)用于惡性腫瘤治療，迄今，己用于臨床試治的免疫效應(yīng)細(xì)胞有A-LAK、腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞、CD3單抗激活的殺傷細(xì)胞〔重要為多克隆CD3+/CD8+T細(xì)胞和細(xì)胞〕、巨噬細(xì)胞、以樹突狀細(xì)胞為基礎(chǔ)的免疫治療(成熟和未成熟的樹突狀細(xì)胞、腫瘤抗原致敏的樹突狀細(xì)胞〕、細(xì)胞因子激活的殺傷細(xì)胞〔由細(xì)胞和CD3+/CD4+T細(xì)胞和NKT細(xì)胞構(gòu)成〕、腫瘤抗原致敏的樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)的腫瘤特異性T細(xì)胞等，這些細(xì)胞單獨(dú)應(yīng)用和聯(lián)合其他治療方法均獲得一定的治療效果[6_但是由于治療的腫瘤患者大多為晚期，腫瘤負(fù)荷大，且多數(shù)己發(fā)生轉(zhuǎn)移，此時(shí)患者除了腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的免疫抑制分子如TGF—卩、IL一10、半乳凝集素等抑制T細(xì)胞和降低淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒外，患者體內(nèi)還出現(xiàn)CD4+CD25+T細(xì)胞増多，樹突狀細(xì)胞和細(xì)胞毒T細(xì)胞等抗腫瘤效應(yīng)細(xì)胞數(shù)質(zhì)量方面的改變。因而，使用上述單一種免疫細(xì)胞治療常具有兩方面的不足:一是輸入體內(nèi)細(xì)胞數(shù)量常不足以抗衡體內(nèi)為數(shù)諸多的腫瘤細(xì)胞，二是單一種免疫細(xì)胞通常不能構(gòu)成一個(gè)高效的抗腫瘤免疫細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)，這可能是療效欠安的主要原因[8]。將BCG膀胱內(nèi)灌注治療淺表性膀胱癌的細(xì)胞生物學(xué)和分子免疫機(jī)制與近年提出的腫瘤免疫編纂理論結(jié)合起來(lái)進(jìn)行分析，我們以為，腫瘤在經(jīng)過(guò)相持期后發(fā)展到免疫逃逸期，機(jī)體體內(nèi)參于抗腫瘤的固有免疫和適應(yīng)性免疫反應(yīng)的細(xì)胞中，存在著多種細(xì)胞功能障礙和多種信號(hào)傳導(dǎo)途徑缺陷。因而，在腫瘤治療上除了“大綜合〞即手術(shù)切除(盡可能去除腫瘤負(fù)荷，減少腫瘤所致免疫抑制〕放療和化療(二者除了減少腫瘤負(fù)荷外，放療和某些藥物還可使腫瘤細(xì)胞壞死凋亡，便于抗原提呈細(xì)胞加工處理腫瘤抗原)外，在生物治療上也應(yīng)采用“小綜合〞治療，如生物應(yīng)答調(diào)變劑IFN、IL—2、OK432和香茹多糖等與免疫細(xì)胞的聯(lián)合應(yīng)用，固有免疫細(xì)胞如NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞、Y貧細(xì)胞和巨噬細(xì)胞與適應(yīng)性免疫細(xì)胞aT細(xì)胞以及樹突狀細(xì)胞聯(lián)合應(yīng)用，這樣能力獲得好的療效。我們最近幾年用樹突狀細(xì)胞聯(lián)合CIK細(xì)胞(?町細(xì)胞和NKT細(xì)胞〕治療一些晚期腫瘤，獲得較好療效。我們還應(yīng)用樹突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞皮下或淋逢迎內(nèi)打針、環(huán)磷酰胺靜注和3個(gè)療程的CIK回輸，使一例晚期膽管細(xì)胞癌和1例無(wú)法手術(shù)切除的肝癌到達(dá)完全緩解。分析其原因，可能是由于環(huán)磷酰胺抑制體內(nèi)細(xì)胞功能和通過(guò)巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞的補(bǔ)充，充足引發(fā)了體內(nèi)固有免疫和適應(yīng)性免疫反應(yīng)細(xì)胞，加上補(bǔ)充分夠量的特異性和非特異性殺傷腫瘤的免疫效應(yīng)細(xì)胞所致。體內(nèi)抗腫瘤免疫尤如一場(chǎng)戰(zhàn)斗，必需充足了解把握信息(腫瘤抗原的辨別)，“各軍軍種(各種類型細(xì)胞)親密配合，集中兵力協(xié)同作戰(zhàn)〞能力打贏這場(chǎng)戰(zhàn)斗。2.2使用的生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑和免疫細(xì)胞必需與腫瘤細(xì)胞直接作用能力發(fā)揮最有效的抗腫瘤作用從BCG灌注治療中還有一點(diǎn)值得看重的就是BCG和免疫效應(yīng)細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞的直接接觸，只要這樣能力觸發(fā)一系列免疫反應(yīng)并直接殺傷腫瘤細(xì)胞，己有很多報(bào)告顯示BCG腫瘤內(nèi)應(yīng)用效果好于其他應(yīng)用處徑。由于實(shí)體瘤中心缺乏血管，因而，盡量將BCG和免疫細(xì)胞注入瘤體中心，以發(fā)揮最有效的抗腫瘤效應(yīng)。我們?cè)鴮渫粻罴?xì)胞和CIK注入己經(jīng)無(wú)水