無菌檢查操作規(guī)程

無菌檢查操作規(guī)程無菌檢查操作規(guī)程無菌檢查操作規(guī)程xxx公司無菌檢查操作規(guī)程文件編號：文件日期：修訂次數(shù)：第1.0次更改批準(zhǔn)審核制定方案設(shè)計(jì)，管理制度修訂記錄序號修訂內(nèi)容摘要版本變更日期1《無菌檢驗(yàn)操作規(guī)程》2016-02-22目的建立無菌檢查的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。范圍本規(guī)程適用于本公司一次性使用體腔熱灌注治療管道組件的無菌檢測職責(zé)負(fù)責(zé)對一次性使用體腔熱灌注治療管道組件的無菌檢測4.內(nèi)容檢驗(yàn)依據(jù)《中華人民共和國藥典2015年版》1101無菌檢查法儀器、設(shè)備超凈工作臺、電熱干燥箱、恒溫培養(yǎng)箱、壓力蒸汽滅菌器、集菌儀、電子天平、PH計(jì)、冰箱、恒溫水浴鍋、酒精燈、三角燒瓶，接種環(huán)、鑷子，試管架，大試管若干等。.培養(yǎng)基需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基（硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基）霉菌培養(yǎng)基（胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基）培養(yǎng)基的無菌性檢查每批配制的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行無菌性檢查（可與產(chǎn)品無菌檢驗(yàn)同步進(jìn)行）。檢查時(shí)，每批培養(yǎng)基隨機(jī)取不少于5支（瓶）培養(yǎng)14天，應(yīng)無菌生長。.無菌檢驗(yàn)室的環(huán)境要求無菌檢驗(yàn)應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000級下的局部百級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。緩沖區(qū)與外界環(huán)境、無菌檢驗(yàn)室與緩沖區(qū)之間空氣應(yīng)保持正壓，陽性對照室與緩沖區(qū)之間空氣應(yīng)保持負(fù)壓。無菌檢驗(yàn)室與室外大氣之間靜壓差應(yīng)大于10Pa。無菌檢驗(yàn)室的室溫應(yīng)保持18～26℃，相對濕度：45～65%。無菌檢驗(yàn)室的單向流空氣區(qū)、工作臺面及環(huán)境應(yīng)定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子》和《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測試方法》的現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行懸浮粒子每月檢測一次，沉降菌的監(jiān)測每周檢測一次。無菌檢驗(yàn)過程中應(yīng)同時(shí)檢查超凈工作臺單向流空氣中的菌落數(shù)：每次操作時(shí)在層流空氣所及臺面的左中右置3個(gè)營養(yǎng)瓊脂平板，暴露30min，于30～35℃培養(yǎng)48小時(shí)，菌落數(shù)平均應(yīng)不超過1CFU/平板。.無菌檢驗(yàn)前的準(zhǔn)備器具滅菌、消毒：壓力蒸汽滅菌器內(nèi)121℃蒸汽滅菌30分鐘后使用。人員、物料進(jìn)入無菌檢驗(yàn)室開啟紫外線燈或臭氧發(fā)生器進(jìn)行空間滅菌處理，消毒時(shí)間不得少于30min。物料進(jìn)入無菌檢驗(yàn)室流程消毒：進(jìn)入無菌操作室的所有培養(yǎng)基、供試品等的外表都應(yīng)采用適用的方法進(jìn)行消毒處理，以避免將外包裝污染的微生物帶入無菌檢驗(yàn)室。人員進(jìn)入無菌檢驗(yàn)室流程更鞋脫衣：在一更區(qū)脫去一般區(qū)工作鞋，穿上無菌檢驗(yàn)室工作鞋；脫去一般區(qū)工作服。洗手：首先用洗手液在手上揉擦出泡沫，再用流水連續(xù)沖洗20秒，洗凈泡沫。更衣：在二更區(qū)按照要求穿衣，要求鞋子套在褲子外面，口罩掩住口鼻，帽子包裹所有頭發(fā)。手消毒：用75%酒精消毒液的棉球擦拭雙手。消毒液可用、新潔爾滅、碘伏、75%酒精等。人員進(jìn)入：經(jīng)緩沖間進(jìn)入無菌檢驗(yàn)室。人員進(jìn)入無菌檢驗(yàn)室后，進(jìn)一步用消毒液擦拭工作臺面，戴無菌手套。無菌檢驗(yàn)操作要求全過程必須嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作，防止微生物污染。使用玻璃器皿應(yīng)輕取輕放，避免破損，以防培養(yǎng)物擴(kuò)散。所有操作不得有大幅度或快速動(dòng)作，以免攪動(dòng)空氣中的塵埃微粒。使用金屬接種器具時(shí)，用前、用后均需灼燒滅菌。在接種培養(yǎng)物時(shí)，動(dòng)作應(yīng)輕、準(zhǔn)，防止培養(yǎng)物濺出，產(chǎn)生汽溶膠，造成污染。操作過程中所有的帶菌物品，用后均應(yīng)作消毒、滅菌處理?？稍跈z驗(yàn)過程中隨用隨時(shí)放入消毒液缸內(nèi)浸泡或消毒桶內(nèi)，或在檢驗(yàn)完成后經(jīng)傳遞窗傳至一般區(qū)，立即用壓力蒸汽滅菌鍋121℃滅菌30分鐘。.稀釋液、沖洗液的制備氯化鈉-蛋白胨緩沖液微溫溶解，分裝后置入壓力蒸汽滅菌器內(nèi)，121℃滅菌30分鐘后，于4℃保存?zhèn)溆谩_洗液：%無菌氯化鈉溶液.對照菌液制備無菌檢驗(yàn)所用的菌株傳代次數(shù)不得超過5代。取金黃色葡萄球的普通瓊脂斜面培養(yǎng)物，接種金黃色葡萄球至營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)，在30～35℃培養(yǎng)18～24h后備用，同時(shí)制備%氯化鈉溶液加入在6支小試管內(nèi)，每支試管內(nèi)加的%氯化鈉溶液，在壓力鍋內(nèi)經(jīng)121℃滅菌30min備用。將已配好的金黃色葡萄球菌培養(yǎng)菌液取加入第一支小試管內(nèi)，稀釋成濃度1:10的菌液；取第一支試管內(nèi)l菌液加入第二支小試管內(nèi)，稀釋成濃度1:100的菌液，同法稀釋成濃度1:106（每ml含菌量≤100CFU）即可。采用平皿計(jì)數(shù)法測定活菌數(shù)。無菌檢驗(yàn)培養(yǎng)溫度硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，置30～35℃培養(yǎng)。胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基，置23～28℃培養(yǎng)。12.無菌檢驗(yàn)抽樣根據(jù)抽樣的規(guī)定，隨機(jī)抽取同一個(gè)滅菌批產(chǎn)品檢驗(yàn)3套產(chǎn)品。檢驗(yàn)方法直接接種法每個(gè)包裝以無菌操作拆開把各導(dǎo)管中的帽子，直接投入含100ml硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基的容器中，接種于各管足以浸沒供試品的適量培養(yǎng)基中。培養(yǎng)、觀察薄膜過濾法每個(gè)包裝以無菌操作拆開包裝注入500ML的無菌氯化鈉溶液啟動(dòng)循環(huán)泵沖洗循環(huán)管壁并收集沖洗液，用集菌儀濾過，加入100ML適宜的培養(yǎng)基培養(yǎng)。其中一份作陽性對照，一份做陰性對照。上述含培養(yǎng)基的容器分別置規(guī)定溫度的恒溫培養(yǎng)箱中，除陽性對照管培養(yǎng)48～72小時(shí)外，其余管培養(yǎng)14天。培養(yǎng)期間應(yīng)逐日觀察并記錄是否有菌生長。如在加入供試品后、或在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14天后，不能從外觀上判斷有無微生物生產(chǎn)，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中或劃線接種于斜面培養(yǎng)基上，細(xì)菌培養(yǎng)2天，真菌培養(yǎng)3天，觀察是否再出現(xiàn)渾濁或斜面有無菌生長；或取培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌。結(jié)果判斷培養(yǎng)結(jié)束后，陽性對照管應(yīng)有菌生長，陰性對管應(yīng)澄清。