藥物分析-03藥物分析方法課件

3.5藥物分析方法藥物分析方法化學分析法容量分析法重量分析法儀器分析法色譜分析法光譜分析法電化學分析核磁、質譜等技術一、常規(guī)的化學分析法1.容量（滴定）分析法

將一種標準溶液滴加到待測物質的溶液中，直到與待測物質按化學計量關系定量反應為止，然后根據(jù)標準溶液的濃度和所消耗的體積，計算待測物質含量的方法。2、滴定分析法的分類A）按化學反應類型分類酸堿滴定法：質子轉移絡合滴定法：生成絡合物氧化還原滴定法：電子轉移沉淀滴定法：生成沉淀滴定操作2、滴定分析法的分類B）按滴定方式分類直接滴定：標液滴定待測物，直到所滴加的試劑與待測物質按化學計量關系定量反應為止。返滴定法：先用過量標準溶液A與待測物反應后，再用另一種標準溶液B滴定剩余的A溶液。置換滴定：先用適當試劑與待測物質反應，定量置換出另一種物質，再用標準溶液去滴定該物質的方法。Na2S2O3+K2Cr2O7S4O62-+SO42-

無定量關系K2Cr2O7+過量KI定量生成I2

Na2S2O3標液淀粉指示劑深藍色消失滴定分析對化學反應的要求：

a.反應定量、完全 b.反應迅速 c.具有合適的確定終點的方法特點：簡便、快速；適于常量分析；準確度高；應用廣泛。Ch.P（2005）中采用的滴定分析法：酸堿滴定、銀量法、碘量法、亞硝酸鈉滴定法、配位滴定法、雙相滴定法、高錳酸鉀滴定法、溴酸鉀滴定法、碘酸鉀滴定法、高碘酸鉀滴定法等。應用例如：氯化鋇中結晶水含量的測定水分在試樣中存在的形式：吸附水，結晶吸附水：在105~110℃烘干結晶水：根據(jù)具體的物質決定，例如BaCl2·2H2O可以在120~125℃烘干。

沉淀重量法利用沉淀反應，將待測物轉化為沉淀，分離并稱定其重量。被測組分微溶化合物↓（沉淀形式）稱量形式稱重計算被測組分的含量沉淀劑過濾、洗滌烘干(灼燒)儀器分析法色譜分析色譜法溯源俄國科學加1903年發(fā)現(xiàn)色譜的吸附原理，開創(chuàng)了應用吸附原理分離植物色素的新方法并見諸于俄文的文獻1906年正式命名（見諸文獻）色譜法；Chromatography50年代開始廣泛研究和應用主要是氣相色譜及薄層色譜高效液相色譜法的廣泛應用始于70年代色譜的分類氣相色譜：流動相是氣相液相色譜：流動相是液相色譜液相色譜柱色譜紙色譜薄層色譜高效液相色譜HPLC氣相色譜高效液相色譜HighPerformanceLiquidChromatography高效液相色譜法，簡稱：HPLC是一種區(qū)別于經(jīng)典液相色譜；基于儀器方法的高效能分離手段：高性能的色譜柱，高精度、耐高壓的輸液泵以及高靈敏度的檢測器……廣泛應用于各個領域：醫(yī)藥/環(huán)保/石化/生命科學/食品及農(nóng)業(yè)……液相色譜的基本流程圖流動相

泵色譜柱檢測器AEGBCDF進樣閥

泵輸液分離

檢測

記錄進樣HPLC的儀器配置高壓輸液泵自動進樣器色譜柱及柱溫箱檢測器數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)流動相液相色譜應用：分析型液相色譜定量分析主要基于與標準品的比較是其最大應用領域定性分析：基于樣品的保留時間比較借助于和其聯(lián)用的紫外、質譜或其他檢測器對定量及定性分析的要求靈敏度、精度及準確度的要求樣品量的要求；復雜樣品的分析能力容易使用HPLC在藥物分析中的應用常用藥物研究中的應用：解熱鎮(zhèn)痛藥、鎮(zhèn)靜藥、安定藥、心血管藥、磺胺類消炎藥等?？咕仡愃幬镅芯恐械膽茫呵嗝顾亍㈩^孢菌素、慶大毒素、四環(huán)素、氯霉素、諾氟沙星等。中草藥研究中的應用：生物堿、甙類(皂甙、強心甙、黃酮甙等)、萜類手性藥物研究中的應用：光學異構體的拆分(如解毒劑D-青霉胺毒性小，L-異構體毒性很強)藥物的檢測、新藥研究、藥物代謝、藥代動力學研究。HPLC應用示例P55氣相色譜儀氣相色譜結構流程1-載氣鋼瓶；2-減壓閥；3-凈化干燥管；4-針形閥；5-流量計;6-壓力表；7-進樣器；8-色譜柱；9-熱導檢測器；10-放大器；11-溫度控制器；12-記錄儀；載氣系統(tǒng)進樣系統(tǒng)色譜柱檢測系統(tǒng)溫控系統(tǒng)應用舉例定量分析：a.色譜峰的測量:以峰的起點和終點的聯(lián)線作為峰底。從峰高極大值對時間鈾作垂線，對應的時即為保留時間。從峰頂至峰底間的線段即為峰高。b.計算:由色譜峰量出各組分的峰高，然后在各自的校準曲線上查出相應的待測物濃度。定性結果：根據(jù)標準譜圖各組分的保留時間確定被測試樣中出現(xiàn)的組分數(shù)目和組分名稱。苯系物氣相色譜圖平面色譜在平面上進行分離的一種色譜方法，主要包括薄層色譜法和紙色譜法。分類薄層色譜法：吸附薄層色譜法 分配薄層色譜法 分子排阻薄層色譜法紙色譜法：分配薄層電泳法定性參數(shù)比移值(Rf值)溶質移動距離與流動相移動距離之比。Rf=L/L0

L為原點（origin）至斑點中心的距離，L0為原點至溶劑前沿（solventfront）的距離

與組分及色譜條件有關

定性和定量分析定性分析

比較Rf值、斑點顏色或熒光常采用已知標準物質對照（同一板上展開）多種展開系統(tǒng)的Rf值與對照品一致。定量分析

洗脫法直接定量法1.目視比較法（如雜質限度檢查方法）2.薄層掃描法應用示例中藥中化學成分的分析例1，如右上圖，不同產(chǎn)地的甘草的TLC圖譜。例2，某中藥的TLC圖譜與HPLC圖譜對照。光譜分析法是指在光（或其它能量）的作用下，通過測量物質產(chǎn)生的發(fā)射光、吸收光或散射光的波長和強度來進行分析的方法。

吸收光譜分析發(fā)射光譜分析分子光譜分析原子光譜分析光譜分析

在光譜分析中，依據(jù)物質對光的選擇性吸收而建立起來的分析方法稱為吸光光度法,主要有:

紅外吸收光譜：分子振動光譜，吸收光波長范圍2.51000m,主要用于有機化合物結構鑒定。

紫外吸收光譜：電子躍遷光譜，吸收光波長范圍200400nm（近紫外區(qū)），可用于結構鑒定和定量分析。

可見吸收光譜：電子躍遷光譜，吸收光波長范圍400750nm，主要用于有色物質的定量分析。紫外-可見分光光度法(ultraviolet-visiblespectrophotometry,UV-VIS)它是利用物質的分子或離子對紫外-可見光的吸收作用，對物質進行定性分析、定量分析及結構分析,所依據(jù)的光譜是分子或離子吸收入射光中特定波長的光而產(chǎn)生的吸收光譜，即為紫外光譜。紫外光譜的表示法紫外光譜圖是由橫坐標、縱坐標和吸收曲線組成的。

橫坐標表示吸收光的波長，用nm（納米）為單位?？v坐標表示吸收光的吸收強度，可以用A(吸光度)、T(透光率)、1-T(吸收率)中的任何一個來表示。吸收曲線表示化合物的紫外吸收情況。曲線最大吸收峰的橫坐標為最大吸收波長。對甲苯乙酮的紫外光譜圖在藥物分析中的應用UV-Vis分光光度法主要用于藥物的鑒別、雜質檢查和含量測定中。應用一：藥品的鑒別測定最大吸收波長例如三唑侖，用無水乙醇制成每1ml中含5μg的溶液，照分光光度法測定，在221nm處有最大吸收。測定最大吸收波長和最小吸收波長如五氟利多測定最大波長和不同波長的吸收值比值測定吸收系數(shù)例:在頭孢類抗生素中，常在性狀項下規(guī)定吸收系數(shù)，以控制藥品的質量。藥品溶劑λmax/nm頭孢他啶磷酸緩沖液pH6.0257400~430頭孢曲松鈉水241495~545頭孢克洛水264230~255頭孢呋辛酯甲醇271390~292頭孢氨芐水262220~245應用二：藥品的雜質檢查用分光光度法對藥品中的特殊雜質進行檢查，可將雜質用適當?shù)娜軇┨崛?，與主成分分離后測定，還可用雜質的顯色反應進行測定。如維生素B2中感光黃素的檢查取本品25mg，加無乙醇氯仿10ml，振搖5min，濾過，濾液照分光光度法，在440nm處測定，吸收度不得過0.016。應用三：藥品的含量測定UV-Vis分光光度法簡便，快速，在藥物的含量測定中應用廣泛。含量測定時通常選擇最大吸收波長處測定供試品的吸收度，用對照品或百分吸收系數(shù)（）計算藥品的含量。如藥典中乙胺嘧啶片的含量測定P70紅外光譜法藥物受到紅外區(qū)電磁波的輻射，激發(fā)分子的振動和轉動能級的變化，產(chǎn)生紅外吸收光譜。有機分子中的許多官能團具有特征的振動能級，相應于IR光譜一定區(qū)域的特征吸收帶，可用于鑒別這些官能團。此外，有大量的標準光譜和數(shù)據(jù)庫可資比較，常常可以對藥物結果作出確切的鑒定。紅外光譜分析的應用在藥物分析中，紅外光譜主要用于定性鑒別。定性鑒別時，主要著眼于供試品光譜與對照光譜全譜譜形的比較，即首先是譜帶的有與無，然后是各譜帶的相對強弱。若供試品的光譜圖與對照光譜圖一致，通常可判定兩化合物為同一物質（除光學異構體）。若兩光譜不同，則可判定兩化合物不同。示例1：紅外光譜鑒別青霉素類藥物P78

示例2：芐醇的紅外光譜質譜分析質譜法是一種按照離子的質核比（m/z）大小對離子進行分離和測定的方法。分析時，首先將分子離子化，然后利用離子在電場或磁場中運動的性質，把離子按質核比大小排列成譜，此即為質譜。 質譜法的主要作用是：（1）準確測定物質的分子量（2）根據(jù)碎片特征進行化合物的結構分析質譜分析過程和原理質譜法分類按用途分有機質譜無機質譜同位素質譜按原理分單聚焦質譜雙聚焦質譜四極質譜飛行時間質譜回旋共振質譜按聯(lián)用方式分氣質聯(lián)用液質聯(lián)用質質聯(lián)用 進樣系統(tǒng)(inletsystem)

離子源(ionsource)

質量分析器（massanalyzer）

檢測器（detecter） 真空系統(tǒng)（Vacuumsystem）質譜儀的組成1.氣體擴散2.直接進樣3.氣相色譜1.電子轟擊2.化學電離3.場致電離4.激光

1.單聚焦2.雙聚焦3.飛行時間4.四極桿

進樣系統(tǒng)離子源質量分析器檢測器

離子源的真空度應達到10-3-10-5Pa，質量分析器應達到10-6Pa。有機質譜譜圖及信息表達分子離子(CH2Cl2+)同位素離子(Cl)碎片離子(CH2Cl+)二氯甲烷的電子轟擊質譜色譜-質譜聯(lián)用技術色譜質譜聯(lián)用技術已經(jīng)成為一種高效的定性定量分析工具。中藥未知成分的鑒定，LC-MS測定雷公藤的化學組分揮發(fā)油化學成分的GC-MS分析藥物代謝研究，液相色譜-電噴霧離子阱質譜法檢測體液中士的寧、馬錢子堿及其主要代謝物。質譜在藥物分析結構鑒定中起著重要的作用，主要用于判定藥物的分子量和分子式。24113410677電化學分析法電化學分析是根據(jù)電化學原理建立起來的一類分析方法。電化學分析法主要是應用電化學的基本原理和技術，研究在化學電池內發(fā)生的特定現(xiàn)象，利用物質的組成及含量與它的電化學性質的關系而建立起來的一類分析方法。定性和定量分析依據(jù)分析方法：設計電池，使得試樣溶液成為電化學電池的組成部分，然后測量電池的某些參數(shù)（電壓、電流、電阻、電量等），或根據(jù)這些參數(shù)的變化來進行待測組分的定量或定性分析。基本原理利用電池電動勢與試液中離子活度之間一定的數(shù)量關系，從而測得離子的活度。電化學分析法分類

電位分析法庫侖分析法極譜分析法電導分析法電解