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微量法試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體55mL×1瓶2-8℃保存試劑一A粉劑×4瓶常溫保存試劑一B液體40mL×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品粉劑×1支2-8℃保存溶液的配制:1A10mL試劑一B2-8℃2、標(biāo)準(zhǔn)品:10mg木糖。臨用前加入1mL蒸餾水配制成10mg/mL木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。木糖是一種\h戊糖。天然D-木糖是以多糖的形態(tài)存在于植物中。木糖可以活化人體腸道內(nèi)的雙岐桿菌并促其生長,雙歧桿菌是益菌,該菌越多越有益人體健康,食用木糖能改善人體的微生物環(huán)境,提高機體的免疫能力;同時木糖在小腸上段吸收后不參與體內(nèi)的代謝,經(jīng)腎臟排出。因此,D-木糖的吸收一直作為小腸吸收不良的重要功能指標(biāo)。D-木糖在強酸條件下水解產(chǎn)生糠醛,糠醛可與間苯三酚反應(yīng)生成粉紅色化合物,在554nm處有特殊吸收峰,據(jù)此可由吸光值計算出樣本中木糖的含量。D-Xylose H+
FurfuralFurfural+Phloroglucinol PinkCompound(554nm)最低檢出限:0.0007mg/mL線性范圍:0.0078-0.9mg/mL注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測??梢姺止夤舛扔?酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋、鼓風(fēng)烘箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、30-50目篩、EP管、冰和蒸餾水。一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)165℃30-50(g)(mL)1:50~100(10mg0.5mL)100℃2h10000rpm15min2:5~100.05g0.5mL100℃2h10000rpm15min3、血清(漿)等液體樣本:直接測定。二、測定步驟1、分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至554nm,分光光度計用蒸餾水調(diào)零。2、標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋:將標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水稀釋至0.8、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。3、標(biāo)準(zhǔn)液稀釋可參考下表:序號稀釋前濃度(mg/mL)標(biāo)準(zhǔn)液體積(μL)蒸餾水體積(μL)稀釋后濃度(mg/mL)110100900121160400.8312002000.540.52002000.2550.252002000.12560.1252002000.062570.06252002000.0312580.031252002000.015625實驗中每個標(biāo)準(zhǔn)管需50μL標(biāo)準(zhǔn)溶液。4、操作表(在0.6mLEP管中操作):試劑名稱(μL)測定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管樣本50--標(biāo)準(zhǔn)溶液-50-蒸餾水--50試劑一2502502508min(EP)554nm下的吸光度,分別記為AAAΔA=A-A測定=A-A1-2次。三、D-木糖含量的計算1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度(x,mg/mL)和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)(y,ΔA標(biāo)準(zhǔn)),建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,將ΔA測定(y,ΔA測定)帶入公式計算樣本濃度(x,mg/mL)。2、D-木糖含量的計算:提取提?。ǎ╩g/mL)=樣樣=xV樣:加入樣本體積,0.05mL;V提?。杭尤胩崛∫旱捏w積,0.5mL;W1:植物樣本的質(zhì)量,g;W2:組織樣本的質(zhì)
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