高中生物2022年高考生物一輪復(fù)習(xí) 第11單元 強化練23　微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用

強化練23微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用1．(2020·河北名校聯(lián)盟聯(lián)考)酸奶因營養(yǎng)豐富和口感美味而深受大眾喜愛，且含有活性乳酸菌，對身體大有益處。常見的乳酸菌主要為乳桿菌屬、雙歧桿菌屬和嗜熱鏈球菌屬?，F(xiàn)采用如下步驟對酸奶中的乳酸菌進行篩選、分離：酸奶→選擇適宜稀釋度→涂布MRS瓊脂培養(yǎng)基→適宜溫度培養(yǎng)→挑取單個菌落→接種于MRS瓊脂平板或MC瓊脂平板→菌種鑒定→接種MRS液體培養(yǎng)基→菌種保藏請回答下列有關(guān)問題：(1)制備MRS瓊脂培養(yǎng)基時，采用__________________法滅菌15～20min。(2)倒平板操作時，應(yīng)在____________旁進行。(3)制備稀釋液時，先將酸奶樣品充分搖勻，以無菌吸管吸取樣品________mL，放入裝有225mL無菌水的錐形瓶中，充分振蕩，制成1∶10的樣品液。(4)培養(yǎng)一段時間后，從MRS固體培養(yǎng)基上挑多個單菌落，使用________法接種于MC瓊脂平板或MRS瓊脂平板上，于36±1℃________(填“無氧”或“有氧”)條件下倒置培養(yǎng)48h后，再挑取單個菌落進行菌種鑒定。(5)菌種鑒定后將其接種至MRS液體培養(yǎng)基的目的是____________________。將得到的純菌株進行長期保藏，可采用____________的方法。答案(1)高壓蒸汽滅菌(2)酒精燈火焰(3)25(4)平板劃線無氧(5)擴大培養(yǎng)，增加菌種數(shù)目甘油管藏2．(2020·廣東四校聯(lián)考)研究發(fā)現(xiàn)一些嗜冷細菌產(chǎn)生的蛋白酶可使乳蛋白分解，導(dǎo)致牛奶變質(zhì)。為了篩選檢測變質(zhì)牛奶中的嗜冷細菌，某研究小組做了如圖所示實驗(注：培養(yǎng)皿旁的數(shù)字代表菌落數(shù)目)。請回答下列問題：(1)牛奶飲用前要經(jīng)過巴氏消毒，以殺死有害微生物，與煮沸消毒相比，巴氏消毒的牛奶在常溫(約28℃)下保存時間較短，原因是____________________________________________，導(dǎo)致牛奶中營養(yǎng)成分被分解而變質(zhì)。(2)若要篩選嗜冷細菌，應(yīng)將牛奶樣品稀釋液接種在以________為唯一氮源的固體培養(yǎng)基上，并且在________的環(huán)境條件下培養(yǎng)，以利于嗜冷細菌生長，抑制或阻止其他微生物的生長。(3)據(jù)圖分析，研究小組采用的是___________________________________________________法分離和計數(shù)嗜冷細菌的。(4)用上述方法統(tǒng)計樣本中菌落數(shù)時是否需要設(shè)置對照組？________(填“需要”或“不需要”)，原因是__________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(5)按照菌落計數(shù)的要求，據(jù)圖可得出1mL牛奶樣品中嗜冷細菌的活菌數(shù)為________個，與用血細胞計數(shù)板計數(shù)相比，此計數(shù)方法測得的細菌數(shù)目偏____________。答案(1)(經(jīng)巴氏消毒的)牛奶中含有未被殺死的微生物(或細菌)，在適宜溫度(或常溫)下會大量繁殖(2)乳蛋白低溫(或較低溫度)(3)稀釋涂布平板(4)需要需要證明(或判斷)培養(yǎng)基是否被雜菌污染(或培養(yǎng)基滅菌是否合格)(5)3.9×105少解析(1)由于巴氏消毒法并不能將所有微生物殺死，故在適宜溫度(或常溫)下，(經(jīng)巴氏消毒的)牛奶中含有未被殺死的微生物(或細菌)，會大量繁殖，導(dǎo)致牛奶中營養(yǎng)成分被分解而變質(zhì)，所以巴氏消毒的牛奶在常溫(約28℃)下保存時間較短。(2)由于嗜冷細菌產(chǎn)生的蛋白酶可使乳蛋白分解，故要篩選嗜冷細菌，應(yīng)將牛奶樣品稀釋液接種在以乳蛋白為唯一氮源的固體培養(yǎng)基上，并且在低溫(或較低溫度)的環(huán)境條件下培養(yǎng)，以利于嗜冷細菌生長，抑制或阻止其他微生物的生長。(5)菌落計數(shù)時應(yīng)選擇菌落數(shù)在30～300之間的平板進行計數(shù)，由圖中菌落數(shù)量可知，應(yīng)選擇稀釋倍數(shù)為103的平板進行計數(shù)，故1mL牛奶樣品中嗜冷細菌的活菌數(shù)為(36＋39＋42)÷3÷0.1×103＝3.9×105(個)。用該種方法計數(shù)的是活菌，當(dāng)兩個或多個菌體連在一起時，平板上觀察的只是一個菌落，故與用血細胞計數(shù)板計數(shù)相比，此計數(shù)方法測得的細菌數(shù)目偏少。3．營養(yǎng)缺陷型菌株在基本培養(yǎng)基(不添加特殊營養(yǎng)物)上不能正常生長，只能在完全培養(yǎng)基(滿足微生物的各種營養(yǎng)缺陷型生長的培養(yǎng)基)上才能正常生長。現(xiàn)將誘變處理后的菌液稀釋后接種于某培養(yǎng)基上培養(yǎng)，用滅菌牙簽逐個挑取待測菌，先后點接于A、B培養(yǎng)基上，前后位置及號碼相對應(yīng)，培養(yǎng)后菌落生長情況如圖，請回答：(1)過程①的接種方法為______________，A、B培養(yǎng)基應(yīng)分別為________(填“基本”或“完全”，下同)培養(yǎng)基、________培養(yǎng)基。(2)為進一步確定缺陷型菌株屬于何種氨基酸缺陷型，實驗人員進行了如下操作：①用接種針挑取培養(yǎng)基________(填“A”或“B”)中的________號菌落分別接種于盛有完全培養(yǎng)液的離心管中，28℃振蕩培養(yǎng)1～2天后，離心，取沉淀用________洗滌菌體3次并制備成菌懸液。②吸取1mL菌懸液加入無菌培養(yǎng)皿中，傾注約15mL融化并冷卻至________℃左右的基本瓊脂培養(yǎng)基，冷凝后用記號筆在培養(yǎng)皿的皿底劃分五個區(qū)域，做好標(biāo)記。③在劃分的五個區(qū)域上放入少量不同的氨基酸結(jié)晶或粉末，制作________(填“選擇”或“鑒別”)培養(yǎng)基。經(jīng)培養(yǎng)后，觀察生長圈出現(xiàn)的區(qū)域，從而確定屬于何種氨基酸缺陷型。答案(1)稀釋涂布平板法基本完全(2)①B6、8無菌水(無菌生理鹽水)②50③選擇解析(1)由圖可知，培養(yǎng)基上的菌落分散開來，表明過程①的接種方法為稀釋涂布平板法；A培養(yǎng)基上僅是部分菌株正常生長，表明A培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基；B培養(yǎng)基上所有的菌株均能正常生長，表明B培養(yǎng)基為完全培養(yǎng)基。(2)①由A、B培養(yǎng)基上菌落的生長狀況可知，B培養(yǎng)基上的6、8號菌落為缺陷型菌株，因此為進一步確定缺陷型菌株屬于何種氨基酸缺陷型，可用接種針挑取B培養(yǎng)基中的6、8號菌落分別接種于盛有完全培養(yǎng)液的離心管中進行振蕩培養(yǎng)；為了防止雜菌污染，對沉淀用無菌水洗滌菌體。②瓊脂在44℃以下凝固，因此在用基本瓊脂培養(yǎng)基倒平板時，應(yīng)待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時進行。③在劃分的五個區(qū)域上放入少量不同的氨基酸結(jié)晶或粉末，制作選擇培養(yǎng)基，根據(jù)添加不同氨基酸的區(qū)域生長圈出現(xiàn)的情況，從而確定營養(yǎng)缺陷型菌株屬于何種氨基酸缺陷。4．(2020·四省名校聯(lián)考)目前，有網(wǎng)文稱單位面積手機表面的細菌比馬桶按鈕上的多。某校甲、乙兩研究性學(xué)習(xí)小組展示實驗調(diào)查結(jié)果如圖所示?；卮鹣铝杏嘘P(guān)問題：(1)實驗使用的培養(yǎng)基，含有營養(yǎng)物質(zhì)和________。制備培養(yǎng)基時，應(yīng)將pH調(diào)至____________________。圖中繼續(xù)實驗中可能包含的實驗操作有_____________(答出三點)。(2)通過觀察菌落的特征可知，手機屏幕和馬桶按鈕上都存在多種微生物。兩研究性學(xué)習(xí)小組實驗操作均正確且完全一致，但結(jié)果截然不同。你認為可能原因是______________________________________________________________________________________________________。(3)實驗中，兩研究性學(xué)習(xí)小組采用的接種方法是________________________。按圖示操作取樣固定面積，實驗員欲測定某手機屏幕的細菌數(shù)量，將10mL細菌懸液進行梯度稀釋，分別取0.1mL稀釋倍數(shù)為102的樣品液接種到三個培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時間后，統(tǒng)計菌落數(shù)分別為38、40、42，則該手機屏幕的細菌數(shù)為________個/cm2。(4)在此實驗的基礎(chǔ)上，欲了解手機表面大腸桿菌的數(shù)量，則應(yīng)怎樣操作和判斷？________________________________________________________________________。答案(1)凝固劑(或瓊脂)中性或微堿性系列稀釋操作、涂布平板操作、微生物培養(yǎng)(2)手機的取樣和馬桶按鈕的取樣不同(3)稀釋涂布平板法1.6×104(4)在上述實驗的培養(yǎng)基中加入伊紅美藍，取樣接種培養(yǎng)后，培養(yǎng)基中黑色菌落的數(shù)量即代表大腸桿菌的大致數(shù)量解析(1)因為實驗中使用固體培養(yǎng)基培養(yǎng)細菌，所以培養(yǎng)基中除了含有細菌需要的營養(yǎng)物質(zhì)外，還要加入凝固劑瓊脂。由于培養(yǎng)基需要滿足微生物生長對pH的要求，因此培養(yǎng)該實驗中細菌的培養(yǎng)基pH須調(diào)節(jié)至中性或微堿性。得到細菌懸液后，進行系列稀釋操作，然后進行涂布平板操作，最后對涂布的平板進行培養(yǎng)和觀察記錄。(3)實驗中，將10mL細菌懸液進行梯度稀釋，分別取0.1mL稀釋倍數(shù)為102的樣品稀釋液接種到三個培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時間后，統(tǒng)計菌落數(shù)分別為38、40、42，可計算出10mL細菌懸液中的細菌數(shù)目為