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目的和要求掌握ELISA的原理、操作過程及注意事項(xiàng)了解ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果的讀取和分析實(shí)驗(yàn)原理借助酶標(biāo)記抗體（或抗原）在體外與抗原（或抗體）結(jié)合，通過相應(yīng)底物被酶解后出現(xiàn)顯色反應(yīng)。反應(yīng)顏色深淺與抗原（或抗體）量的多少有關(guān)。特點(diǎn)：靈敏、特異類型：雙抗體夾心法、競(jìng)爭(zhēng)法、間接法等

雙抗夾心法ELISA

競(jìng)爭(zhēng)法

ELISA實(shí)驗(yàn)材料BSA包被的測(cè)定板酶標(biāo)抗鼠IgG抗體待檢血清，陽性血清，陰性血清洗滌液：PBS＋吐溫-20底物液：鄰苯二胺（OPD）終止液：10%H2S04實(shí)驗(yàn)步驟加入稀釋好的待測(cè)血清每孔100ul，

37℃孵育40min加入100ul酶標(biāo)抗體,37℃孵育30min洗板3次,每次1min洗板3次,每次1min實(shí)驗(yàn)步驟加入100ulTMB底物液避光室溫孵育15min終止反應(yīng):每孔加1滴10％硫酸結(jié)果觀察注意事項(xiàng)加樣：應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。洗板：每次洗液加入后，應(yīng)靜置1分鐘使清洗更加徹底。末次洗板盡量將水甩干。液體全部加完后，可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒，混勻液體。底物有毒性，終止液對(duì)皮膚有腐蝕性，盡量避免接觸。將待測(cè)血清1:100稀釋后，再做倍比稀釋到各孔，每孔100μl，見表。注意混勻。1:1001:2001:4001:8001:16001:32001:64001:12800陰性血清陰性血清100ul血清稀釋及加樣1:1001:2001:4001:8001:160

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