免疫學(xué)技術(shù)原理

關(guān)于免疫學(xué)技術(shù)原理第一頁，共三十八頁，2022年，8月28日（一）抗原抗體反應(yīng)的原理

抗原抗體反應(yīng):指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。

抗原表位與抗體高變區(qū)間的互補結(jié)合抗原表位與抗體高變區(qū)的溝槽分子表面的結(jié)合抗原抗體之間的結(jié)合力

親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體

物質(zhì)基礎(chǔ):第二頁，共三十八頁，2022年，8月28日體內(nèi)：表現(xiàn)為溶菌、殺菌、促進吞噬或中和毒素或引起免疫病理的損傷體外：凝集、沉淀、細胞溶解和補體結(jié)合等反應(yīng)第三頁，共三十八頁，2022年，8月28日（二）抗原抗體反應(yīng)的特點特異性可逆性比例性階段性第四頁，共三十八頁，2022年，8月28日特異性：抗原與抗體結(jié)合反應(yīng)的專一性抗原抗體反應(yīng)特異性示意圖分子基礎(chǔ):抗原表位與抗體分子高變區(qū)之間空間構(gòu)型的互補性（1）特異性第五頁，共三十八頁，2022年，8月28日兩種不同的抗原分子具有部分相同或類似結(jié)構(gòu)的抗原表位，可與彼此相應(yīng)的抗血清發(fā)生反應(yīng)交叉反應(yīng)（crossreactions）抗原抗體交叉反應(yīng)示意圖AgB第六頁，共三十八頁，2022年，8月28日(2)可逆性可逆性：抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合成復(fù)合物后，在一定條件下又可解離為游離抗原與抗體的特性影響因素：

抗體對相應(yīng)抗原的親合力－親合力越高，結(jié)合越牢固，越不易解離環(huán)境因素對復(fù)合物的影響－pH、離子強度

第七頁，共三十八頁，2022年，8月28日前帶(prezone)：抗體過量后帶(postzone)：抗原過量等價帶(equivalencezone)：

抗原抗體比例合適

抗原抗體反應(yīng)比例性示意圖比例性：抗原與抗體發(fā)生可見反應(yīng)需遵循一定的量比關(guān)系(3)比例性第八頁，共三十八頁，2022年，8月28日第一階段：特異性結(jié)合階段，反應(yīng)快，不可見第二階段：反應(yīng)可見階段，反應(yīng)慢，出現(xiàn)凝集、沉淀和細胞溶解等現(xiàn)象(4)階段性第九頁，共三十八頁，2022年，8月28日A.抗原、抗體反應(yīng)物的自身因素環(huán)境因素（三）影響抗原抗體反應(yīng)的因素抗原:理化性狀、表位種類和數(shù)目抗體:來源、特異性、親和性、效價第十頁，共三十八頁，2022年，8月28日B.環(huán)境因素電解質(zhì):生理鹽水或緩沖液酸堿度:pH6～pH9溫度:15℃～40℃，37℃最適第十一頁，共三十八頁，2022年，8月28日反應(yīng)類型實驗技術(shù)結(jié)果判斷凝集反應(yīng)直接凝集試驗觀察凝集現(xiàn)象間接凝集試驗同上抗球蛋白試驗同上沉淀反應(yīng)液相沉淀試驗觀察沉淀，檢測濁度免疫電泳技術(shù)觀察掃描沉淀峰、沉淀弧補體參與的反應(yīng)補體溶血試驗觀察測定溶血現(xiàn)象補體結(jié)合試驗同上(四）免疫學(xué)檢測技術(shù)的類型第十二頁，共三十八頁，2022年，8月28日反應(yīng)類型實驗技術(shù)結(jié)果判斷中和反應(yīng)病毒中和試驗檢測病毒感染性毒素中和試驗檢測外毒素毒性標記免疫反應(yīng)熒光免疫技術(shù)檢測熒光現(xiàn)象放射免疫技術(shù)檢測放射性強度酶免疫技術(shù)檢測酶底物顯色發(fā)光免疫技術(shù)檢測發(fā)光強度金免疫技術(shù)檢測金顆粒沉淀第十三頁，共三十八頁，2022年，8月28日按實際用途分為:e①免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistrytechniqu,IHCT)②免疫測定(immunoassay)標記免疫技術(shù)：用熒光物質(zhì)、放射性核素、酶或化學(xué)發(fā)光物質(zhì)等標記抗原或抗體，進行抗原抗體反應(yīng)后，通過檢測標記物對抗原或抗體進行定性、定位或定量分析第十四頁，共三十八頁，2022年，8月28日按測定反應(yīng)體系的物理狀態(tài)分為:①均相免疫測定(homogenousimmunoassay）②非均相免疫測定(heterogenousimmunoassay)

按檢測現(xiàn)象分為:

①放射免疫技術(shù)②熒光免疫技術(shù)③酶免疫技術(shù)④化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)⑤金免疫技術(shù)第十五頁，共三十八頁，2022年，8月28日1．什么是抗原抗體反應(yīng)？抗原抗體反應(yīng)的原理是什么？2.抗原抗體反應(yīng)有哪些特點？3.如何理解抗原抗體反應(yīng)的特異性？4．什么是抗原抗體反應(yīng)的可逆性？有何應(yīng)用？5．抗原抗體反應(yīng)體系中為何要確定抗原、抗體的最適比例？6．抗原抗體反應(yīng)有哪些影響因素？7．基于抗原抗體反應(yīng)的免疫學(xué)檢測技術(shù)有哪些？思考題第十六頁，共三十八頁，2022年，8月28日小結(jié)

抗原抗體反應(yīng)是指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。

抗原抗體反應(yīng)的特點是特異性、可逆性、比例性和階段性。

第十七頁，共三十八頁，2022年，8月28日

影響抗原抗體反應(yīng)的因素包括反應(yīng)物的自身因素和環(huán)境因素。免疫學(xué)檢測技術(shù)的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)，免疫學(xué)技術(shù)有凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、補體參與的反應(yīng)、中和反應(yīng)和標記免疫反應(yīng)五種類型。

第十八頁，共三十八頁，2022年，8月28日抗原抗原排斥抗原抗體Y抗原抗原抗原YYYYYYYYYYYYYYYYY

顆粒性抗原（細菌、紅細胞等）與相應(yīng)抗體結(jié)合，在電解質(zhì)參與下所形成的肉眼可見的凝集現(xiàn)象，稱為凝集反應(yīng)。第二節(jié)凝集反應(yīng)第十九頁，共三十八頁，2022年，8月28日分類直接凝集反應(yīng)--

顆粒性抗原直接與抗體結(jié)合，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。細胞性抗原：細菌和紅細胞第二十頁，共三十八頁，2022年，8月28日凝集原(agglutinogen)：凝集反應(yīng)中的抗原。凝集素(agglutinin)：凝集參與反應(yīng)的抗體第二十一頁，共三十八頁，2022年，8月28日顆粒性抗原凝集素

直接凝集反應(yīng)第二十二頁，共三十八頁，2022年，8月28日1、玻片凝集反應(yīng):

已知抗原+未知抗體凝集團塊混濁?2、試管凝集反應(yīng)：定量抗原+系列稀釋抗體不同程度的凝集反應(yīng)YESNO確定抗體的滴度第二十三頁，共三十八頁，2022年，8月28日

在試管內(nèi)顆粒性抗原直接與抗體結(jié)合，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。試管凝集試驗第二十四頁，共三十八頁，2022年，8月28日第二十五頁，共三十八頁，2022年，8月28日鮮血者紅細胞受血者血清O型(抗A、抗B)A型(抗B)B型(抗A)AB型(無)O型----A型+-+-B型++--AB型+++-注:“+”表示有凝集反應(yīng),“-”表示無凝集反應(yīng)第二十六頁，共三十八頁，2022年，8月28日間接凝集反應(yīng)(indirectagglutination):

將可溶性抗原或抗體吸附于顆粒性載體表面，然后與相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng)，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象.第二十七頁，共三十八頁，2022年，8月28日載體可溶性抗原致敏致敏顆粒NS凝集顆粒

間接凝集試驗示意圖第二十八頁，共三十八頁，2022年，8月28日

載體種類及其處理方法紅細胞：

新鮮紅細胞吸附蛋白質(zhì)的能力差。一般先醛化后應(yīng)用。聚苯乙烯膠乳顆粒：

可物理吸附蛋白質(zhì)；常制備帶有化學(xué)活性基團的顆粒第二十九頁，共三十八頁，2022年，8月28日1.正向間接凝集試驗2.反向間接凝集試驗3.間接凝集抑制試驗間接凝集反應(yīng)的類型第三十頁，共三十八頁，2022年，8月28日用抗原致敏載體--檢測抗體正向間接凝集試驗第三十一頁，共三十八頁，2022年，8月28日反向間接凝集試驗用抗體致敏載體----檢測抗原第三十二頁，共三十八頁，2022年，8月28日間接凝集抑制試驗用抗原致敏載體--檢測抗原第三十三頁，共三十八頁，2022年，8月28日間接血凝試驗第三十四頁，共三十八頁，2022年，8月28日間接乳膠凝集試驗概念金黃色葡萄球菌協(xié)同凝集試驗第三十五頁，共三十八頁，2022年，8月28日間接凝集反應(yīng)的應(yīng)用抗原的檢測

反向間接凝集試驗可用于檢測病原體的可溶性抗原，也可用于檢測各種蛋白質(zhì)成分。抗體的檢測

檢測細菌、病毒、寄生蟲等感染后產(chǎn)生的