遺傳學(xué)大實驗課件

遺傳學(xué)綜合大實驗主要內(nèi)容蠶豆多倍體誘導(dǎo)與細(xì)胞遺傳學(xué)鑒定蠶豆組型分析（材料預(yù)處理、根尖壓片）DNA的孚爾根染色鑒定染色體結(jié)構(gòu)與數(shù)目變異的觀察與分析第一天安排上午：組型分析材料預(yù)處理當(dāng)蠶豆根尖長至1cm時，切下置于0.1%秋水仙堿溶液25℃處理3hr,水洗,卡諾液(3乙醇：1冰乙酸)固定,用于根尖壓片。多倍體誘導(dǎo)處理取剛萌動的蠶豆根尖經(jīng)0.1%秋水仙堿溶液25℃處理24hr。多倍體材料的固定：上一個班的材料普通根尖壓片（洋紅染色法）下午：染色體結(jié)構(gòu)變異觀察（60Coγ射線處理的蠶豆種子根尖）根尖臨時片和永久片制作第二天安排上午：多倍體蠶豆沖洗培養(yǎng)：水洗后插入砂盤發(fā)芽DNA測定：蠶豆根尖處理，脫色堿性品紅染色3～5hr。多倍體蠶豆根尖壓片（洋紅染色法）及觀察永久片制作下午：DNA測定蠶豆根尖壓片多倍體、結(jié)構(gòu)變異永久片制作脫氧核糖核酸（DNA）的測定一、實驗?zāi)康模簩W(xué)習(xí)掌握細(xì)胞核內(nèi)DNA的鑒定方法-孚爾根(Feulgen)染色法。二、實驗材料：蠶豆根尖。三、實驗原理：DNA經(jīng)溫鹽酸水解處理后，其嘌呤堿與脫氧核糖間的糖苷鍵被打斷，形成醛基（-CHO），醛基與脫色堿性品紅（席夫試劑）作用顯紫紅色，根據(jù)紫紅色的出現(xiàn)而鑒定DNA的存在。

席夫(Schiff)試劑：堿性品紅+NaHSO3+HCl四、實驗步驟取固定后的蠶豆根尖放入小藥瓶中，水洗后在60℃1NHCl中水解5～12min，再放入冷1NHCl處理1min。（以不處理作對照）將1NHCl倒掉水洗3次后吸干，放入脫色堿性品紅，用黑紙包住藥瓶，放在暗處(防氧化)染色反應(yīng)3～5hr。倒掉染液，用SO2溶液沖洗3次，每次1min。倒掉SO2液，加H2O。取根尖頂端（紫紅色部分）,放在載玻片上，再用另一載玻片呈十字形壓片，分開后滴上45%醋酸液1滴。加蓋片，用吸水紙吸掉多余溶液。顯微鏡下觀察，選染色較深，細(xì)胞呈薄層分散的臨時片，鑒定染色反應(yīng)的效果與部位。臨時片的制作取固定好的根尖水洗3次，把根尖放入洗凈的小藥瓶中，加入約半瓶1N的HCl，置入60℃水浴鍋中水解8～12min，蒸餾水漂洗2～3次，取少量根尖分生組織置于載玻片的中央，用鑷子和解剖針將組織輕輕搗碎、分散并去掉殘渣。用另一載玻片呈“十”字型壓片（不要移動）后，用鉛筆橡皮頭（或解剖針）垂直輕敲，分開后加1滴醋酸洋紅染色5～10min。蓋上蓋玻片，用吸水紙吸干多余的染液。鏡檢后，若有好的臨時片再做永久制片。如果染色不深，可以復(fù)染?？酒侵破幸粋€極重要的過程，方法是將載玻片在酒精燈火焰上來回移動，一邊用手摸載玻片的底下，如燙手即可。在減數(shù)分裂涂抹制片中，烤片更為重要，但必須染色較深，這樣才能使細(xì)胞核變深，細(xì)胞質(zhì)變淺。理想制片標(biāo)準(zhǔn)：背景干凈、染色到位、細(xì)胞分散、分裂相豐富永久片制作方法脫蓋玻片：把臨時片翻轉(zhuǎn)，蓋玻片朝下，放入盛有脫蓋玻片液（1份45%乙酸+1份95%乙醇）的培養(yǎng)皿（編號①）中，將載玻片的一端擱在短粗玻璃棒上，呈傾斜狀，讓蓋玻片自然滑落。蓋玻片脫落后2～3min，分別取出蓋玻片和載玻片，用吸水紙吸干，注意不要觸動載玻片上的材料。封片：從④號培養(yǎng)皿中取出載玻片和蓋玻片置于濾紙上吸去多余的溶劑，在載玻片中央載有材料處滴上1小滴中性樹膠，將蓋玻片蓋回原來位置進(jìn)行封片。覆蓋蓋玻片時，要注意用鴨嘴鑷子夾住蓋玻片，輕輕地傾斜覆蓋，使之隨著樹膠的擴展自然下滑，切不可施加壓力或移動蓋玻片。如發(fā)現(xiàn)封片中樹膠有氣泡，應(yīng)讓其自行逸出或用針尖燒熱后燙一下，使氣泡逸出。如果樹膠滴得過多溢出玻片