艾滋病檢測原理和技術(shù)規(guī)范課件

艾滋病檢測原理和技術(shù)規(guī)范2022/12/161第一頁，共三十九頁。一、艾滋病與艾滋病病毒2022/12/162第二頁，共三十九頁。（有A～E多個亞型）與一種感染灰身白臉猴的猴免疫缺陷病毒（SIV）相似。HIV-1HIV-2Humanimmunodeficiencyvirus

HIV（有A～J，O1～O4多個亞型）與一種感染黑猩猩的猴免疫缺陷病毒（SIV）相似。2022/12/163第三頁，共三十九頁。艾滋病病毒感染后，可嚴(yán)重破壞人體的免疫系統(tǒng)，使人體喪失抵御各種疾病的能力，有利于各種病原體的侵入，從而導(dǎo)致各種嚴(yán)重的、難以治愈的機(jī)會性感染或腫瘤，最終導(dǎo)致死亡，病死率可達(dá)100％。2022/12/164第四頁，共三十九頁。HIV-1M組HIV-1O組HIV-2非洲中部和東部美國、歐洲、南美洲、非洲和亞洲南美洲、印度、贊比亞、中國非洲中部和東部泰國、中非、印度巴西、羅馬尼亞、喀麥隆加蓬、蘇聯(lián)、尼日利亞、烏干達(dá)、塞內(nèi)加爾、贊比亞喀麥隆、扎伊爾、中非塞浦路斯扎伊爾喀麥隆、加蓬HIV型別和亞型的分類進(jìn)化與地區(qū)分布：西非、印度HIVABCDEFGHIJO1O2O3O4ABCDE2022/12/165第五頁，共三十九頁。基因亞型與感染途徑的關(guān)系2022/12/166第六頁，共三十九頁。感染分期臨床分期維持時間感染標(biāo)志物傳染性原發(fā)感染潛伏期潛伏期2-4周抗體陰性(窗口期)傳染危險性高原發(fā)感染癥狀期急性HIV感染1-2周傳染危險性高慢性感染潛伏期無癥狀HIV感染2－15年(平均8-10年)抗體陽性有傳染性臨床發(fā)病期艾滋病0－3年(平均1-2年)抗體陽性抗原陽性傳染性強(qiáng)艾滋病從感染到發(fā)病的一般過程2022/12/167第七頁，共三十九頁。二、艾滋病檢測的原理及方法2022/12/168第八頁，共三十九頁。臨床診斷感染監(jiān)測耐藥監(jiān)測治療評價干預(yù)評估抗體檢測抗體檢測核酸定性CD4檢測新感染檢測CD4檢測核酸定量核酸定量病毒分離基因測序核酸定性核酸定量各種檢測技術(shù)為艾滋病防治工作提供廣泛的技術(shù)支持平臺2022/12/169第九頁，共三十九頁。檢驗標(biāo)志物檢驗?zāi)康臋z驗方法HIV(1+2)抗體篩查試驗金標(biāo)法、硒標(biāo)法快速診斷試驗明膠顆粒凝集試驗(PA)

微孔板法酶聯(lián)免疫試驗（ELISA）第三代：雙抗原夾心法第四代：增加檢測P24抗原確證試驗蛋白印跡法(WB)

手工/儀器病毒抗原早期診斷酶聯(lián)免疫試驗檢測P24抗原病毒核酸臨床診斷治療評價定性試驗

檢測DNA定量試驗

即病毒載量，檢測RNACD4流式細(xì)胞儀法檢測CD4+T淋巴細(xì)胞艾滋病實(shí)驗診斷方法2022/12/1610第十頁，共三十九頁。診斷試劑窗口期特點(diǎn)金標(biāo)法、硒標(biāo)法5周35天敏感性低，容易漏檢明膠顆粒凝集試驗(PA)5周35天特異性較好，敏感性不足ELISA（國產(chǎn)第三代）3周多20～25天普及，穩(wěn)定性欠佳ELISA（進(jìn)口第三代）3周18～22天較為成熟，穩(wěn)定性好ELISA（進(jìn)口第四代）2周多16～17天假陽性率偏高核酸檢測1周多10～12天不用于常規(guī)診斷各種診斷試劑特性2022/12/1611第十一頁，共三十九頁。硒標(biāo)法金標(biāo)法HIV抗體篩查試驗2022/12/1612第十二頁，共三十九頁。明膠顆粒凝集試驗（Particleagglutinationtest，PA）

2022/12/1613第十三頁，共三十九頁。PA的操作和結(jié)果判斷2022/12/1614第十四頁，共三十九頁。5

450/630nm下測定OD值混勻，加蓋，37℃溫育洗板3

加入底物第二次特異性結(jié)合4

加入終止液1

加入樣品洗板2

加入酶標(biāo)記物加蓋，37℃溫育加蓋，37℃溫育第一次特異性結(jié)合酶聯(lián)免疫分析ELISA

（雙抗原夾心、兩步法）2022/12/1615第十五頁，共三十九頁?？焖俜煞駟为?dú)使用？《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》（2004版）：將PA、dot-EIA、膠體硒法納入快速檢測規(guī)范方法，因此可以使用。有研究指出：任何一種快速試劑可以篩查出99%以上的陰性樣本；兩種快速試劑均為陽性時，可以篩查出98%以上的陽性樣本；兩種快速試劑結(jié)果不一致時，可用ELISA復(fù)檢；單獨(dú)使用或兩種同時使用時，特異性差別無顯著意義。2022/12/1616第十六頁，共三十九頁?！?/p>

針對各種病毒蛋白的特異抗體■

區(qū)分ELISA真陽性與假陽性■

檢測HIV-1和HIV-2HIV抗體確證試驗WesternBlot免疫印跡法2022/12/1617第十七頁，共三十九頁。基因名稱代號功能基因產(chǎn)物片段HIV-1HIV-2結(jié)構(gòu)基因外膜蛋白基因env合成外膜蛋白gp160gp120gp41gp140gp105

gp36

核蛋白基因gag合成核蛋白p55p24p18

p56p26p16

逆轉(zhuǎn)錄酶基因pol合成逆轉(zhuǎn)錄酶p65p51p31

p68p53p34調(diào)節(jié)基因反式激活因子tat加速病毒蛋白合成毒力蛋白表達(dá)調(diào)節(jié)基因rev促進(jìn)整合的病毒選擇性地產(chǎn)生調(diào)節(jié)蛋白或毒粒成份負(fù)調(diào)節(jié)因子nef減緩基因轉(zhuǎn)錄，使停止繁殖而處于潛伏狀態(tài)毒粒感染性因子vif促進(jìn)病毒感染另一個細(xì)胞HIV的主要基因及其產(chǎn)物

（HIV標(biāo)志物）2022/12/1618第十八頁，共三十九頁。ss-RNA2022/12/1619第十九頁，共三十九頁。全自動免疫印跡儀2022/12/1620第二十頁，共三十九頁。HIV抗體陽性診斷標(biāo)準(zhǔn)：■2條env（gp160/gp120+gp41）■1條env+p24p55p66p31p51gp120gp160gp41p17p24膜蛋白（env）核蛋白（gag）逆轉(zhuǎn)錄酶（pol）2022/12/1621第二十一頁，共三十九頁。篩查試驗：診斷出陰性樣本，并為陽性/可疑樣本排除非特異條帶。復(fù)檢1（試劑A）：對陽性/可疑樣本排除操作誤差。復(fù)檢2（試劑B）：對陽性/可疑樣本排除試劑誤差。確證試驗：診斷出陽性樣本。篩查試驗和確證試驗的作用2022/12/1622第二十二頁，共三十九頁。臨床分期流行病學(xué)臨床表現(xiàn)實(shí)驗室診斷潛伏期有明確感染史HIV進(jìn)入血液未能檢出任何標(biāo)記物急性HIV感染有明確感染史上呼吸道感染癥狀頸、腋等淋巴結(jié)腫大頭疼、皮疹、肝脾腫大后期抗-HIV陽轉(zhuǎn)少數(shù)病例P24陽性CD4/CD8>1外周血WBC及淋巴細(xì)胞總數(shù)先降后回?zé)o癥狀HIV感染有明確感染史呈潛伏感染狀態(tài)無任何癥狀及體征但免疫系統(tǒng)逐漸被破壞抗-HIV陽性，P24陰性CD4/CD8>1，CD4總數(shù)正常艾滋病有明確感染史全身淋巴結(jié)腫大持續(xù)低熱>1個月慢性腹瀉>4-5次/日3個月內(nèi)體重下降>10%免疫功能低下多種機(jī)會性感染、腫瘤抗-HIV陽性，P24陽性CD4/CD8<1CD4總數(shù)正常<200/mm3（或200-500）外周血WBC、Hb下降有相關(guān)感染的病原學(xué)、腫瘤病理學(xué)依據(jù)HIV/AIDS

診斷標(biāo)準(zhǔn)

（GB16000-1995）2022/12/1623第二十三頁，共三十九頁。AIDS指征性疾病

（美國CDC,1993,抗-HIV陽性及其中一種疾病即可診斷）氣管、支氣管、肺、食道的念珠菌病除肝、脾、淋巴結(jié)以外的CMV感染彌漫性或肺外的鳥外分支桿菌病并發(fā)失明的CMV性視網(wǎng)膜炎彌漫性或肺外的其它分支桿菌感染HSV所致的慢性口腔、呼吸道、食道炎癥彌漫性或肺外的組織胞漿菌病侵潤性宮頸癌彌漫性或肺外的球孢子菌病卡波濟(jì)肉瘤肺外隱球菌病伯基特淋巴瘤肺部或肺外的結(jié)核病免疫母細(xì)胞型淋巴瘤原發(fā)性肺炎原發(fā)性腦淋巴瘤卡氏肺囊蟲肺炎進(jìn)行性多發(fā)性腦白質(zhì)病慢性腸道隱孢子?。ú〕?gt;1個月）腦弓形體病慢性腸道孢子球蟲?。ú〕?gt;1個月）HIV相關(guān)腦病反復(fù)發(fā)生的沙門氏菌敗血癥HIV相關(guān)的消瘦綜合征2022/12/1624第二十四頁，共三十九頁。HIV！HIV？HIV感染母親所生嬰兒：分別于12個月、18個月追蹤檢測陰性者為陰性，18個月仍陽性者為陽性。2022/12/1625第二十五頁，共三十九頁。三、艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范2022/12/1626第二十六頁，共三十九頁。主要內(nèi)容：

樣品采集和處理

檢測方法（HIV抗體、病毒核酸、病毒載量、CD4、HIV抗原檢測）

安全防護(hù)、職業(yè)暴露質(zhì)量管理（質(zhì)量保證、質(zhì)量控制、質(zhì)量評價）實(shí)驗室質(zhì)量考評

HIV診斷試劑質(zhì)量評估2022/12/1627第二十七頁，共三十九頁。篩查試驗（試劑A）陽性／可疑均陰性均陽性陰性重復(fù)檢測（試劑A+B）陰性陽性確證試驗篩查實(shí)驗室一陰一陽確證實(shí)驗室復(fù)核檢測（試劑A/B/C）陽性／可疑陰性篩查報告（陰性）確認(rèn)報告（陰性）確認(rèn)報告（陽性）2022/12/1628第二十八頁，共三十九頁。檢測方法檢測結(jié)果檢驗報告處理篩查試驗陰性HIV抗體陰性陰性告知陽性HIV抗體待復(fù)查上送確證確證試驗陰性HIV抗體陰性（-）陰性告知陽性HIV抗體陽性（+）陽性告知，個案調(diào)查不確定HIV抗體不確定（±）告知，3個月后復(fù)查共2次HIV抗體檢測結(jié)果處理規(guī)范2022/12/1629第二十九頁，共三十九頁。HIV待確證樣品HIV陽性確證報告原件感染者確認(rèn)報告原件確認(rèn)報告復(fù)印件備案篩查實(shí)驗室所在單位篩查實(shí)驗室所在單位確證實(shí)驗室篩查實(shí)驗室艾滋病樣本確證、報告流程：2022/12/1630第三十頁，共三十九頁。認(rèn)真填寫各類表格（最好能打?。?，及時上報。2022/12/1631第三十一頁，共三十九頁。各篩查實(shí)驗室每月5日前上報上月檢測數(shù)據(jù)：2022/12/1632第三十二頁，共三十九頁。四、艾滋病檢測的質(zhì)量控制2022/12/1633第三十三頁，共三十九頁。

行政支持

重視、投入、理解

實(shí)驗室規(guī)范化建設(shè)

規(guī)范、制度、程序

人員要求

資質(zhì)條件、培訓(xùn)和輪訓(xùn)質(zhì)量保證（QA）質(zhì)量控制（QC）

室內(nèi)質(zhì)控

質(zhì)控圖的建立和應(yīng)用

檢驗期間核查

試劑對照、外部質(zhì)控品對照、平行雙樣結(jié)果關(guān)聯(lián)性（不同方法、不同實(shí)驗室結(jié)果、人群特征等）可實(shí)時校驗：樣品、試劑、儀器、操作等環(huán)節(jié)。質(zhì)量評價（EQA）

實(shí)驗室室間質(zhì)量考評2022/12/1634第三十四頁，共三十九頁。■

建立各項規(guī)章制度和操作程序，定期檢查；■人員定期接受培訓(xùn)和復(fù)訓(xùn)，培養(yǎng)良好的業(yè)務(wù)素質(zhì)；對HIV實(shí)驗室的10項基本要求2022/12/1635第三十五頁，共三十九頁。■儀器設(shè)備運(yùn)作正常，定期檢定和校準(zhǔn)，妥善維護(hù)；■樣品流轉(zhuǎn)有序，記錄詳細(xì)，保存規(guī)范；■采用合格試劑，經(jīng)常核查試劑質(zhì)量，正確保存和使用；■環(huán)境條件符合要求，有監(jiān)控有記錄；■嚴(yán)格按照規(guī)范和試劑說明書操作；■建立各類質(zhì)量記錄表格，資料保存完整，溯源性強(qiáng)；■堅持開展室內(nèi)質(zhì)控，參加室間比對和能力驗證；■安全防護(hù)、廢物處理措施落實(shí)，建立人員健康監(jiān)護(hù)檔案。2022/12/1636第三十六頁，共三十九頁。■每個實(shí)驗室必須配備至少2種不同原理/不同廠家的試劑，其中一種必須是ELISA（第三代、雙抗原夾心、兩步法）?！龅谝淮魏Y查試驗推薦使用高敏感性的ELISA法，快速法可用于應(yīng)急試驗或復(fù)核試驗。■按政府招標(biāo)目錄采購，保存供應(yīng)商的資質(zhì)證明文件，試劑批批檢報告。■登記試劑采購和使用情況，注意保存條件并實(shí)行監(jiān)控?！鲈噭┖?/p>