酶聯(lián)免疫法原理及操作課件

ELISA知識簡介03/11/15ELISA知識簡介1理1.ELISA的原理2.ELSA的類型3.試劑準(zhǔn)備:免疫吸附劑結(jié)合物酶底物的準(zhǔn)備4.對照設(shè)定5.標(biāo)本的采取和保存6.結(jié)果判斷結(jié)理1.ELISA的原理21.ELISA的原理ELISA是一種免疫測定(Immunoassay,IA)?；A(chǔ):抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),由此進(jìn)行定性或定量分析。結(jié)1.ELISA的原理3酶免疫測定類型酶免疫組化酶免疫技均相酶免疫測定酶免疫測定相藤免疫測定非均相酶免疫測定液相酶免疫測定這種固相酶免疫測定方法在197年最初建立時稱為酶聯(lián)免疫吸附劑測定(EnzymeLinkedImmunoSorbentAssay),簡結(jié)稱ELISA酶免疫測定類型41.1抗原抗體反應(yīng)1.1.1可逆性抗原與抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物的過程是一種動態(tài)平衡,其反應(yīng)式為Ag+Ab→Ag.Ab抗體的親和力(affinity),可以用平衡常數(shù)表示K=[Ag"Ab]/[Ag][Ab],Ag.Ab的解離程度與K值有關(guān)。高親和力抗體的抗原結(jié)合點(diǎn)與抗原的決定簇在空間構(gòu)型上非常適合,兩者結(jié)合牢固,不易解離。解離后的抗原或抗體均結(jié)能保持原有的結(jié)構(gòu)和活性1.1抗原抗體反應(yīng)51.1.2特異性抗原抗體的結(jié)合發(fā)生在抗原的決定簇與抗體的結(jié)合位點(diǎn)試之間?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型互補(bǔ)關(guān)系,具有高度的特異性測定某一特定的物質(zhì),而不需先分離待檢物結(jié)1.1.2特異性61.1.3最適比例TheprecipitinreactionfreeantibodyfreeantigenImmuneprecipitatedantibodyequivalenceexcesszonezoneexcesszone結(jié)antigenadde1.1.3最適比例71.1.4敏感性化學(xué)比色法的敏感度為mg/m1水平酶反應(yīng)測定法的敏感度約為5-10μg/m1免疫測定中凝膠擴(kuò)散法和濁度法的敏感度與酶反應(yīng)法相仿標(biāo)記的免疫敏感度可提高數(shù)千倍,達(dá)ng/m1水平例如,HBSAg,其敏感度可達(dá)0.1ng/m1結(jié)1.1.4敏感性81.4免疫測定在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用由于各種抗原成份,包括小分子的半抗原,均可用以制備特異性的抗血清或單克隆抗體,利用此抗體作為試劑就可檢測標(biāo)本中相應(yīng)的抗原,因此免疫測定的應(yīng)用范圍極廣。結(jié)1.4免疫測定在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用9理2ELSA的類型ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。在這種測定方法中有三個必要的試劑(1)固相的抗原或抗體,即"免疫吸附劑"(immunosorbent)(2)酶標(biāo)記的抗原或抗體,稱為"結(jié)合物"(conjugate);(3)酶反應(yīng)的底物。可設(shè)計出各種不同類型的檢測方法結(jié)理2ELSA的類型10酶聯(lián)免疫法原理及操作課件11酶聯(lián)免疫法原理及操作課件12酶聯(lián)免疫法原理及操作課件13酶聯(lián)免疫法原理及操作課件14酶聯(lián)免疫法原理及操作課件15酶聯(lián)免疫法原理及操作課件16酶聯(lián)免疫法原理及操作課件17酶聯(lián)免疫法原理及操作課件18酶聯(lián)免疫法原理及操作課件19酶聯(lián)免疫法原理及操作課件20酶聯(lián)免疫法原理及操作課件21酶聯(lián)免疫法原理及操作課件22酶聯(lián)免疫法原理及操作課件23酶聯(lián)免疫法原理及操作課件24酶聯(lián)免疫法原理及操作課件25酶聯(lián)免疫法原理及操作課件26酶聯(lián)免疫法原理及操作課件27酶聯(lián)免疫法原理及操作課件28酶聯(lián)免疫法原理及操作課件29酶聯(lián)免疫法原理及操作課件30酶聯(lián)免疫法原理及操作課件31酶聯(lián)免疫法原理及操作課件32酶聯(lián)免疫法原理及操作課件33酶聯(lián)免疫法原理及操作課件34酶聯(lián)免疫法原理及操作課件35酶聯(lián)免疫法原理及操作課件36酶聯(lián)免疫法原理及操作課件37酶聯(lián)免疫法原理及操作課件38酶聯(lián)免疫法原理及操作課件39酶聯(lián)免疫法原理及操作課件40酶聯(lián)免疫法原理及操作課件41酶聯(lián)免疫法原理及操作課件42酶聯(lián)免疫法原理及操作課件43酶聯(lián)免疫法原理及操作課件44酶聯(lián)免疫法原理及操作課件45酶聯(lián)免疫法原理及操作課件46酶聯(lián)免疫法原理及操作課件47酶聯(lián)免疫法原理及操作課件48酶聯(lián)免疫法原理及操作課件49酶聯(lián)免疫法原理及操作課件50酶聯(lián)免疫法原理及操作課件51酶聯(lián)免疫法原理及操作課件52酶聯(lián)免疫法原理及操作課件53酶聯(lián)免疫法原理及操作課件54酶聯(lián)免疫法原理及操作課件55ELISA知識簡介03/11/15ELISA知識簡介56理1.ELISA的原理2.ELSA的類型3.試劑準(zhǔn)備:免疫吸附劑結(jié)合物酶底物的準(zhǔn)備4.對照設(shè)定5.標(biāo)本的采取和保存6.結(jié)果判斷結(jié)理1.ELISA的原理571.ELISA的原理ELISA是一種免疫測定(Immunoassay,IA)?；A(chǔ):抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),由此進(jìn)行定性或定量分析。結(jié)1.ELISA的原理58酶免疫測定類型酶免疫組化酶免疫技均相酶免疫測定酶免疫測定相藤免疫測定非均相酶免疫測定液相酶免疫測定這種固相酶免疫測定方法在197年最初建立時稱為酶聯(lián)免疫吸附劑測定(EnzymeLinkedImmunoSorbentAssay),簡結(jié)稱ELISA酶免疫測定類型591.1抗原抗體反應(yīng)1.1.1可逆性抗原與抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物的過程是一種動態(tài)平衡,其反應(yīng)式為Ag+Ab→Ag.Ab抗體的親和力(affinity),可以用平衡常數(shù)表示K=[Ag"Ab]/[Ag][Ab],Ag.Ab的解離程度與K值有關(guān)。高親和力抗體的抗原結(jié)合點(diǎn)與抗原的決定簇在空間構(gòu)型上非常適合,兩者結(jié)合牢固,不易解離。解離后的抗原或抗體均結(jié)能保持原有的結(jié)構(gòu)和活性1.1抗原抗體反應(yīng)601.1.2特異性抗原抗體的結(jié)合發(fā)生在抗原的決定簇與抗體的結(jié)合位點(diǎn)試之間?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型互補(bǔ)關(guān)系,具有高度的特異性測定某一特定的物質(zhì),而不需先分離待檢物結(jié)1.1.2特異性611.1.3最適比例TheprecipitinreactionfreeantibodyfreeantigenImmuneprecipitatedantibodyequivalenceexcesszonezoneexcesszone結(jié)antigenadde1.1.3最適比例621.1.4敏感性化學(xué)比色法的敏感度為mg/m1水平酶反應(yīng)測定法的敏感度約為5-10μg/m1免疫測定中凝膠擴(kuò)散法和濁度法的敏感度與酶反應(yīng)法相仿標(biāo)記的免疫敏感度可提高數(shù)千倍,達(dá)ng/m1水平例如,HBSAg,其敏感度可達(dá)0.1ng/m1結(jié)1.1.4敏感性631.4免疫測定在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用由于各種抗原成份,包括小分子的半抗原,均可用以制備特異性的抗血清或單克隆抗體,利用此抗體作為試劑就可檢測標(biāo)本中相應(yīng)的抗原,因此免疫測定的應(yīng)用范圍極廣。結(jié)1.4免疫測定在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用64理2ELSA的類型ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。在這種測定方法中有三個必要的試劑(1)固相的抗原或抗體,即"免疫吸附劑"(immunosorbent)(2)酶標(biāo)記的抗原或抗體,稱為"結(jié)合物"(conjugate);(3)酶反應(yīng)的底物?？稍O(shè)計出各種不同類型的檢測方法結(jié)理2ELSA的類型65酶聯(lián)免疫法原理及操作課件66酶聯(lián)免疫法原理及操作課件67酶聯(lián)免疫法原理及操作課件68酶聯(lián)免疫法原理及操作課件69酶聯(lián)免疫法原理及操作課件70酶聯(lián)免疫法原理及操作課件71酶聯(lián)免疫法原理及操作課件72酶聯(lián)免疫法原理及操作課件73酶聯(lián)免疫法原理及操作課件74酶聯(lián)免疫法原理及操作課件75酶聯(lián)免疫法原理及操作課件76酶聯(lián)免疫法原理及操作課件77酶聯(lián)免疫法原理及操作課件78酶聯(lián)免疫法原理及操作課件79酶聯(lián)免疫法原理及操作課件80酶聯(lián)免疫法原理及操作課件81酶聯(lián)免疫法原理及操作課件82酶聯(lián)免疫法原理及操作課件83酶聯(lián)免疫法原理及操作課件84酶聯(lián)免疫法原理及操作課件85酶聯(lián)免疫法原理及操作課件86酶聯(lián)免疫法原理及操作課件87酶聯(lián)免疫法原理及操作課件88酶聯(lián)免疫法原理及操作課件89酶聯(lián)免疫法原理及操作課件90酶聯(lián)免疫法原理及操作課件91酶聯(lián)免疫法原理及操作課件92酶聯(lián)免疫法原理及操作課件93酶聯(lián)免疫法原理及操作課件94酶聯(lián)免疫法原理及操作課件95酶聯(lián)免疫法原理及操作課件96酶聯(lián)免疫法原理及操作課件97酶聯(lián)免疫法原理及操作課件98酶聯(lián)