常用病原學(xué)檢測(cè)

關(guān)于常用病原學(xué)檢測(cè)第一頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日各種不同病原體的實(shí)驗(yàn)診斷方法遵循以下基本原則1.正確、規(guī)范采集和運(yùn)送標(biāo)本。2.直接顯微鏡查見(jiàn)病原體或檢出病原體抗原，借助分子生物學(xué)的方法檢測(cè)病原體核酸，結(jié)合病人的病史、癥狀或體征，快速作出初步診斷。3.初步診斷同時(shí)，對(duì)病原體進(jìn)行分離與鑒定。4.檢測(cè)機(jī)體對(duì)病原體的免疫產(chǎn)物。5.參與臨床選擇抗菌藥物，指導(dǎo)和監(jiān)控微生物的治療方案，避免

耐藥菌株的產(chǎn)生。第二頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日3病原學(xué)診斷細(xì)菌學(xué)診斷病毒學(xué)診斷真菌學(xué)診斷

第三頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日致病菌的檢驗(yàn)程序和常用項(xiàng)目標(biāo)本直接涂片染色鏡檢分離培養(yǎng)形態(tài)特征生化試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)明確診斷初步診斷血清學(xué)診斷細(xì)菌的快速鑒定形態(tài)學(xué)檢查（常規(guī)培養(yǎng)或特殊培養(yǎng)）（凝集試驗(yàn)、沉淀反應(yīng)、免疫標(biāo)記技術(shù)等）(微生物數(shù)字編碼分類(lèi)鑒定法、血培養(yǎng)自動(dòng)化檢測(cè)系統(tǒng)、核酸雜交技術(shù)、PCR技術(shù)、DNA芯片技術(shù)等）藥物敏感試驗(yàn)第四頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日5細(xì)菌感染檢查檢驗(yàn)特點(diǎn)通過(guò)對(duì)標(biāo)本直接顯微鏡檢，病原菌的分離培養(yǎng)鑒定，病原菌的抗原檢測(cè)，核酸檢測(cè)和細(xì)菌感染后機(jī)體免疫應(yīng)答產(chǎn)物的測(cè)定及藥物的測(cè)定及藥物敏感性試驗(yàn)，對(duì)細(xì)菌感染性疾病可作出及時(shí)、準(zhǔn)確的病原學(xué)診斷。第五頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日DiagnosisStrategyforBacterialInfection第六頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日7

革蘭陽(yáng)性菌(Grampositivebacteria)

革蘭陰性菌(Gramnegativebacteria)涂片結(jié)晶紫

染色碘液媒染酒精脫色復(fù)紅復(fù)染革蘭染色法（GramStain）由丹麥醫(yī)生HansChristianGram于1884年創(chuàng)立。1.步驟第七頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日①直接涂片染色鏡檢適用于具有特征性形態(tài)和染色性的病原菌,如葡萄球菌、腦膜炎奈瑟菌、抗酸染色陽(yáng)性的結(jié)核分枝桿菌等。第八頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日大多數(shù)細(xì)菌的形態(tài)與染色并無(wú)顯著特異性，因此需要分離培養(yǎng)。如腸道桿菌均為G-桿菌，菌落形態(tài)亦相同。培養(yǎng)特征：化膿性鏈球菌---小而透明、溶血環(huán)。②分離培養(yǎng)第九頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日生化試驗(yàn)：如腸道桿菌進(jìn)行乳糖發(fā)酵試驗(yàn)。血清學(xué)試驗(yàn)：已知抗體測(cè)抗原或已知抗原測(cè)病人血清中相應(yīng)的抗體。如玻片凝集，鑒定菌種和型。動(dòng)物試驗(yàn)：測(cè)定細(xì)菌的毒力、病原菌的分離和鑒定。②分離培養(yǎng)第十頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日③血清學(xué)診斷原理：已知抗體測(cè)未知抗原進(jìn)行病原菌的鑒定或用已知抗原檢測(cè)患者體液中有無(wú)相應(yīng)特異性抗體和其效價(jià)的動(dòng)態(tài)變化，可作為某些傳染病的輔助診斷。標(biāo)本：雙份血清標(biāo)本，恢復(fù)期血清抗體效價(jià)比急性期升高≥4倍者方有意義。單份血清效價(jià)超過(guò)一定標(biāo)準(zhǔn)才有診斷意義。種類(lèi)：凝集試驗(yàn)、沉淀試驗(yàn)、中和試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)。第十一頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日常用的血清學(xué)診斷方法類(lèi)型診斷應(yīng)用舉例直接凝集試驗(yàn)傷寒和副傷寒（肥達(dá)試驗(yàn)）、立克次體（外斐試驗(yàn)）、鉤端螺旋體（顯微凝集試驗(yàn)）乳膠凝集試驗(yàn)檢測(cè)腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌等抗體沉淀試驗(yàn)梅毒（VDRL、RPR試驗(yàn)）補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)檢測(cè)Q熱柯克斯體等抗體中和試驗(yàn)風(fēng)濕熱（抗O試驗(yàn)）ELISA廣泛用于病原體的診斷和流行病學(xué)調(diào)查第十二頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日玻片凝集試驗(yàn)試管凝集試驗(yàn)第十三頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)第十四頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日④細(xì)菌的快速鑒定API細(xì)菌數(shù)值鑒定系統(tǒng)第十五頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日PCR技術(shù)第十六頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日17姬姆薩染色衣原體包涵體HSV病毒被支原體感染的精子梅毒螺旋體第十七頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日18

檢測(cè)程序第十八頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日病毒感染的微生物學(xué)檢查法

第十九頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日DiagnosisStrategyforViralInfection第二十頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日21病毒感染的微生物學(xué)檢查法

第二十一頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日ELISAforHIVantibody

MicroplateELISAforHIVantibody:colouredwellsindicatereactivity第二十二頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日病毒的數(shù)量與感染性測(cè)定蝕斑測(cè)定：準(zhǔn)確滴定病毒感染性的方法蝕斑（Plaque）每個(gè)蝕斑是由一個(gè)有感染性病毒顆粒形成，稱(chēng)為蝕斑形成單位（Plaqueformingunit，PFU）。病毒的感染量用PFU/ml表示50%感染量（ID50）或50%組織細(xì)胞感染量（TCID50）不能準(zhǔn)確地測(cè)定感染性病毒顆粒的數(shù)量第二十三頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日乙型肝炎的病原學(xué)診斷

第二十四頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日A病毒性肝炎HepatitisVirus腸道傳播腸道外傳播F,TTV?其他ENANBBDC病毒性肝炎-背景第二十五頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日

傳染源糞便血液/血源性物質(zhì)/體液血液/血源性物質(zhì)/體液血液/血源性物質(zhì)/體液糞便傳播途徑糞-口經(jīng)皮膚/經(jīng)粘膜經(jīng)皮膚/經(jīng)粘膜經(jīng)皮膚/經(jīng)粘膜糞-口慢性感染否是是是否病毒性肝炎類(lèi)型ABCDE基因組類(lèi)型ssRNAdsDNA

ssRNA

ssRNA

ssRNA第二十六頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日HepatitisBVirus乙型肝炎的病原體在全世界廣泛流行，估計(jì)全球半數(shù)以上人口已被HBV感染過(guò)，5%的人口為HBV慢性感染中國(guó)：乙肝高發(fā)區(qū)，人群HBsAg的檢出率達(dá)9.8%第二十七頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日HBVvirionTheinfectiousvirioniscalledtheDANEparticle.第二十八頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日HBVViralGenomeOrganizationHBsAgHBcAgHBeAg3200BasePairGenomeHepatocytereceptorbindngsiteHBVDNAPolymeraseProteinthattransactivatestranscriptionalpromotors第二十九頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日BothcomprisedofHBsAg第三十頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日HBVnomenclatureHBV:hepatitisB

virusHBsAg:hepatitisBvirussurfaceantigenHBsAb:hepatitisBvirussurfaceantibodyHBcAg:hepatitisBviruscoreantigenHBcAb:hepatitisBviruscoreantibodyHBeAg:hepatitisBviruse

antigenHBeAb:hepatitisBviruse

antibody第三十一頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日抗原組成--HBsAg位于病毒表面，是一種糖蛋白4種亞型(adr,adw,ayr,ayw)歐美國(guó)家:adw我國(guó)漢族:adr我國(guó)少數(shù)民族:ayw判斷HBV感染的指標(biāo)之一刺激機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性抗體即抗-HBs第三十二頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日抗原組成--HBcAg位于Dane顆粒核心部分和肝細(xì)胞核內(nèi)，在血清中不易檢出游離的HBcAg主要成分是蛋白質(zhì)刺激機(jī)體產(chǎn)生抗-HBc(非保護(hù)性抗體)在乙肝急性期、恢復(fù)期和HBsAg攜帶者中?？蓹z出抗-HBc抗-HBcIgM常提示病毒處于復(fù)制狀態(tài)第三十三頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日抗原組成--HBeAg位于HBV的核心,是一種可溶性蛋白抗原HBeAg和Dane顆粒出現(xiàn)相平行，且與DNA多聚酶在血中的消長(zhǎng)動(dòng)態(tài)相符合血中HBeAg的出現(xiàn)可作為HBV復(fù)制及血清有感染性的指標(biāo)刺激機(jī)體產(chǎn)生抗-HBe抗-HBe能與受染肝細(xì)胞表面的e抗原結(jié)合,通過(guò)補(bǔ)體介導(dǎo)破壞受染的肝細(xì)胞,抗-HBe的出現(xiàn)是預(yù)后良好的征象第三十四頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日抗原組成--Pre-S抗原位于HBV的外衣殼上，有兩種刺激機(jī)體產(chǎn)生抗Pre-S1和抗Pre-S2，能阻斷HBV與肝細(xì)胞受體結(jié)合，從而起到抵抗病毒的作用抗Pre-S1和抗Pre-S2的出現(xiàn)，表示病情好轉(zhuǎn)，趨向痊愈第三十五頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日傳染源患者潛伏期急性期慢性期無(wú)癥狀HBsAg攜帶者第三十六頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日

各種體液中HBV的濃度高中等低/不能檢出血液精液尿血清陰道分泌物糞便傷口滲出物唾液汗液淚液乳汁第三十七頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日血源性傳播輸血、注射、外科和牙科手術(shù)、針刺等剃刀、牙刷和蚊蟲(chóng)叮咬等母嬰垂直傳播宮內(nèi)傳播分娩時(shí)微小皮損處傳播產(chǎn)后母嬰密切接觸性傳播HBV傳播途徑第三十八頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日高(>8%):占45%一生感染的危險(xiǎn)>60%嬰幼兒感染常見(jiàn)中等(2%～7%):占43%一生感染的危險(xiǎn)是20%～60%感染存在于所有年齡組低(<2%):占12%一生感染的危險(xiǎn)<20%許多感染發(fā)生在成人危險(xiǎn)組GlobalPatternsofChronicHBVInfection第三十九頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日第四十頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日病原學(xué)診斷---抗原抗體檢測(cè)項(xiàng)目：HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc以及抗-HBcIgM方法ELISA(enzyme-linkedimmunosorbentassay，最常用，定性)發(fā)光免疫分析(定量)反相間接血凝試驗(yàn)(少用)第四十一頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日ELISA的基本原理利用抗原和抗體特異性結(jié)合主要的試劑固相抗原或抗體酶標(biāo)記的抗原或抗體酶的底物第四十二頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日ELISA的主要方法間接法:測(cè)定抗-HBs夾心法：測(cè)定HBsAg和HBeAg競(jìng)爭(zhēng)法：測(cè)定抗-HBc中和法：測(cè)定抗-HBe捕捉法：測(cè)定抗-HBcIgM第四十三頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日病原學(xué)診斷(二)---核酸檢測(cè)核酸雜交探針PCR引物第四十四頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日HBsAg–感染的標(biāo)志Anti-HBs–既往感染/接種疫苗Anti-HBcIgM–急性感染標(biāo)志Anti-HBcIgG–既往或慢性感染HBeAg–急性病毒復(fù)制，有傳染性

Anti-HBe–病毒不再?gòu)?fù)制HBV-DNA–急性病毒復(fù)制，比HBeAg更準(zhǔn)確；主要用于監(jiān)測(cè)治療反應(yīng)第四十五頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日血清學(xué)檢測(cè)的臨床意義HBsAg抗-HBsHBeAg抗-HBe抗-HBc臨床意義急性或慢性感染(大三陽(yáng))+-+-++++乙肝后期或慢性感染(小三陽(yáng))--++---潛伏期或急性乙肝早期--+++痊愈或恢復(fù)期,有免疫力-----+++--痊愈,有免疫力疫苗接種或曾經(jīng)感染過(guò),有免疫力第四十六頁(yè)，共五十二頁(yè)，2022年，8月28日SymptomsHBeAganti-HBeTot