高效液相色譜儀使用注意事項

高效液相色譜儀使用注意事項主講：李國秀

—1—

食品營養(yǎng)與檢測專業(yè)教學(xué)資源庫

目錄頁儀器安裝條件一流動相使用注意事項二色譜柱使用注意事項三高壓輸液泵使用注意事項四手動進(jìn)樣閥使用注意事項五檢測器使用注意事項六

—1

—

食品營養(yǎng)與檢測專業(yè)教學(xué)資源庫

一、儀器安裝條件實驗臺應(yīng)水平、穩(wěn)固；避免在具有腐蝕性氣體、大量灰塵或能產(chǎn)生強(qiáng)磁場的地方安裝儀器；安裝設(shè)備的房間應(yīng)通風(fēng)良好，應(yīng)具有向外排風(fēng)的裝置；應(yīng)安裝三芯電源插座(220V，5～10A)，必須具有專門的接地線，并確保輸出電源的電壓穩(wěn)定；環(huán)境溫度要求在4～40℃之間，溫度波動小于±2℃／h，最好室內(nèi)有空調(diào)設(shè)施；房間內(nèi)相對濕度應(yīng)低于80%；由空調(diào)或其他設(shè)備產(chǎn)生的氣流不要直吹儀器；避免光線直射及冷、熱源對儀器產(chǎn)生直接影響。高效液相色譜儀的用注意事項

—1

—

食品營養(yǎng)與檢測專業(yè)教學(xué)資源庫

二、流動相使用注意事項1、必須使用HPLC級或相當(dāng)于該級別的流動相，并要先經(jīng)0.45μm濾膜過濾。過濾后的流動相必須經(jīng)過充分脫氣，以除去其中溶解的氣體。2、流動相不應(yīng)含有任何腐蝕性物質(zhì)。3、若用緩沖溶液作流動相，工作結(jié)束后應(yīng)用含量較高的超純水沖洗系統(tǒng)中的鹽，沖洗時間至少為1小時，然后用純甲醇或乙腈沖洗至少30分鐘。高效液相色譜儀的用注意事項

—1

—

食品營養(yǎng)與檢測專業(yè)教學(xué)資源庫

二、流動相使用注意事項4、流動相為純水或緩沖溶液時，最好當(dāng)日現(xiàn)配現(xiàn)用，低溫下密封保存，一般不超過3天，防止微生物生長。5、應(yīng)定期清洗儲液器和進(jìn)液處的砂芯過濾頭，尤其當(dāng)使用磷酸鹽緩沖溶液時，易產(chǎn)生絮狀沉積物，必須及時清除，否則易引起柱阻塞。6、進(jìn)行梯度洗脫時，要注意溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動相。

—1

—

食品營養(yǎng)與檢測專業(yè)教學(xué)資源庫

三、色譜柱使用注意事項1、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動，調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進(jìn)行。2、應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不能直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然?、一般來說色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效。高效液相色譜儀的用注意事項

—1

—

食品營養(yǎng)與檢測專業(yè)教學(xué)資源庫

三、色譜柱使用注意事項4、選擇使用適宜的流動相，在要求的pH范圍和柱溫下使用，以避免固定相被破壞。5、樣品量不應(yīng)過載，進(jìn)樣前應(yīng)對樣品進(jìn)行必要的凈化，以免對色譜柱造成損傷?？稍谶M(jìn)樣器和色譜柱之間連接保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以應(yīng)該經(jīng)常更換。

—1

—

食品營養(yǎng)與檢測專業(yè)教學(xué)資源庫

三、色譜柱使用注意事項6、每次工作完后，最好用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時，對流路系統(tǒng)中流動相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50mL～75mL。當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動相時，使用完后應(yīng)用無鹽流動相沖洗至少1小時，再逐步過渡到純甲醇或乙腈。

—1

—

食品營養(yǎng)與檢測專業(yè)教學(xué)資源庫

三、色譜柱使用注意事項7、保存色譜柱時應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。絕對禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時間。

—1

—

食品營養(yǎng)與檢測專業(yè)教學(xué)資源庫

四、高壓輸液泵使用注意事項１、使用的流動相必須經(jīng)過過濾和脫氣，防止任何固體微粒進(jìn)入泵體。2、使用中應(yīng)注意柱前壓是否穩(wěn)定，若壓力突然升高，表明管道過濾器或色譜柱柱頭堵塞，應(yīng)立即停用，待更換過濾片，清理色譜柱柱頭后方可重新開啟高壓輸液泵。高效液相色譜儀的用注意事項

—1

—

食品營養(yǎng)與檢測專業(yè)教學(xué)資源庫

四、高壓輸液泵使用注意事項3、當(dāng)使用酸或堿緩沖溶液后，應(yīng)及時清洗，防止無機(jī)鹽結(jié)垢，造成泵柱塞受到磨損或腐蝕。4、當(dāng)往復(fù)式泵泵頭的單向閥排液不暢通時，應(yīng)拆開通向混合器的接頭，用流動相沖洗出機(jī)械雜質(zhì)，而不要輕易拆開單向閥導(dǎo)致泵無法工作。

—1

—

食品營養(yǎng)與檢測專業(yè)教學(xué)資源庫

四、高壓輸液泵使用注意事項5、絕對不允許在沒有流動相或流動相還沒有進(jìn)入泵頭的情況下啟動泵而造成柱塞桿的干磨。6、長期不用也要定期開泵沖洗整個管路。7、壓力下限應(yīng)設(shè)置在0.5～1MPa，以防止儲液器中的流動相被抽干或嚴(yán)重滲漏而引起柱塞桿的干磨。

—1

—

食品營養(yǎng)與檢測專業(yè)教學(xué)資源庫

五、手動進(jìn)樣閥使用注意事項１、樣品溶液進(jìn)樣前必須用0.45μm濾膜過濾，以減少微粒對進(jìn)樣閥的磨損。2、要使用專用的液相注射器進(jìn)樣，絕對不可用氣相色譜注射器。高效液相色譜儀的用注意事項

—1

—

食品營養(yǎng)與檢測專業(yè)教學(xué)資源庫

五、手動進(jìn)樣閥使用注意事項3、進(jìn)樣量的多少要根據(jù)定量管的環(huán)體積決定，當(dāng)試樣量較少時，進(jìn)樣體積由注射器的進(jìn)樣體積決定，但最大體積要小于環(huán)體積的1/2。當(dāng)試樣量較多時，進(jìn)樣體積由定量管的體積決定，為保證試樣完全把定量管的流動相置換干凈，需注射5～6倍環(huán)體積的試樣。

—1

—

食品營養(yǎng)與檢測專業(yè)教學(xué)資源庫

五、手動進(jìn)樣閥使用注意事項4、轉(zhuǎn)動閥芯時不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動相受阻，使泵內(nèi)壓力劇增，甚至超過泵的最大壓力，再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位時，過高的壓力將使柱頭損壞。5、為防止緩沖鹽和樣品殘留在進(jìn)樣閥中，每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥。通常可用水沖洗，或先用能溶解樣品的溶劑沖洗，再用水沖洗。

—1

—

食品營養(yǎng)與檢測專業(yè)教學(xué)資源庫