食物中毒的判別及檢驗

食物中毒的判別及檢驗案例回顧B市C鎮(zhèn)初級中學(xué)為政府公辦初級中學(xué)，共有學(xué)生1132名，22個班級，83名老師，7名食堂工作人員。其中寄宿生630名，走讀生502名，周一至周五上課，周六至周日放假。根據(jù)學(xué)校報告，6月5日下午17：20開始，有學(xué)生出現(xiàn)腹痛、腹瀉、嘔吐、惡心和頭痛、頭昏等癥狀，到6月6日晨檢發(fā)現(xiàn)有80余名左右出現(xiàn)同類癥狀，因這些學(xué)生在學(xué)校有共同就餐史，且發(fā)病時間非常集中，懷疑為食物中毒。6月6日上午7：30學(xué)校向C鎮(zhèn)衛(wèi)生院報告并組織患病學(xué)生就診。(其他的詳細(xì)信息見教案)食物中毒的判別及檢驗非細(xì)菌性食物中毒初步篩查（直接涂片，嘔吐物、糞便）分離培養(yǎng)平板分離快速檢驗（PCR）全面生化檢驗、血清學(xué)檢驗血常規(guī)糞常規(guī)以及糞便、嘔吐物病原學(xué)檢驗血清學(xué)鑒定檢驗流程圖增菌培養(yǎng)細(xì)菌性食物中毒判斷為什么類型的中毒事件食物中毒的判別及檢驗溯源食堂工作人員患者共同食用食物食堂用水咽拭子、肛拭子臨床檢驗蔬菜肉、雞蛋油衛(wèi)生學(xué)指標(biāo)（菌落總數(shù)、大腸菌群）購買地、種植地購買地、養(yǎng)殖地購買地、種植地（酸價、真菌毒素等）進(jìn)行整治食物中毒的判別及檢驗食物中毒相關(guān)概念食物中毒：攝入了含有生物性、化學(xué)性有毒有害物質(zhì)的食品或者把有害物質(zhì)當(dāng)作食品攝入后出現(xiàn)的非傳染性(不屬于傳染病)的急性、亞急性疾病。食物中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)主要以流行病學(xué)調(diào)查資料及病人的潛伏期和中毒的特有表現(xiàn)為依據(jù)，實驗室診斷是為了確定中毒的病因而進(jìn)行的食物中毒可分為細(xì)菌性和非細(xì)菌性食物中毒食物中毒的判別及檢驗細(xì)菌性食源性疾病細(xì)菌性食源性疾?。菏沁M(jìn)食被細(xì)菌或細(xì)菌毒素污染的食物而引起的感染性或中毒性疾病。細(xì)菌性腸道傳染?。ɑ魜y、痢疾、傷寒副傷寒等）短期內(nèi)集中發(fā)病常被診斷為細(xì)菌性食物中毒散發(fā)或潛伏期較長病例常被診斷為胃腸炎或其他疾病食物中毒的判別及檢驗細(xì)菌性與非細(xì)菌性食物中毒區(qū)別細(xì)菌性食物中毒非細(xì)菌性食物中毒病原體細(xì)菌動物性，化學(xué)物質(zhì)，原因不明中毒原因主要為動物性食品特殊食品或誤食有毒成分活菌或腸毒素特殊毒素或毒物潛伏期1-24h（肉毒1-5d）快速，甚至僅數(shù)分鐘臨床特點(diǎn)多伴有發(fā)熱，胃腸炎（除肉毒）胃腸炎癥狀，常伴神經(jīng)、血液系統(tǒng)癥狀預(yù)后良好不及時治療，預(yù)后差治療一般可用抗生素（除肉毒）促排，及時給予特效解毒劑預(yù)防防止污染，控制繁殖，徹底殺滅加強(qiáng)宣教，防止誤食食物中毒的判別及檢驗細(xì)菌性食物中毒的特點(diǎn)與飲食有密切關(guān)系，去除原因食品后，不再有新的患者。臨床癥狀以急性胃腸炎為主，基本相同。短時期內(nèi)多人發(fā)病，無人傳染人的現(xiàn)象。中毒發(fā)生與不同區(qū)域人群飲食習(xí)慣有密切關(guān)系。與季節(jié)相關(guān)。細(xì)菌繁殖條件及人體防御機(jī)能。發(fā)病率高，病死率較低、恢復(fù)快、多數(shù)預(yù)后良好

食物中毒的判別及檢驗細(xì)菌性食源性疾病的流行病學(xué)傳染源：被病原菌感染的動物或人傳播途徑：通過進(jìn)食被細(xì)菌或其毒素污染的食物人群易感性：普遍，無病后免疫力，可重復(fù)感染流行特征：夏秋季高發(fā)；病例可散發(fā)或爆發(fā)流行；發(fā)病急，時間集中，潛伏期短；有共同進(jìn)餐史；癥狀輕重與進(jìn)食量有關(guān)。食物中毒的判別及檢驗細(xì)菌性食物中毒還是病毒性食物中毒？細(xì)菌性食物中毒：WBC增加，中性粒細(xì)胞增加；病毒性食物中毒：淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞增高食物中毒的判別及檢驗根據(jù)流病資料、病例的三間分布，與患者臨床表現(xiàn)、病患血常規(guī)檢查結(jié)果：1.病患有共同進(jìn)餐史；2.病例潛伏期最短為5小時，最長為47小時。中位數(shù)為13小時，具有明顯的時間聚集性；3.案例皆來自于學(xué)校，具有地點(diǎn)聚集性；24h內(nèi)腹瀉3次及以上，惡心、腹痛、（典型的胃腸炎臨床癥狀）發(fā)熱等臨床癥狀；5.病患血常規(guī)檢測共收集了140人的血常規(guī)結(jié)果，白細(xì)胞升高占28%，中性粒細(xì)胞升高占61%。部分病例堿性磷酸酶升高。判斷為細(xì)菌性食物中毒。食物中毒的判別及檢驗由于患者主要臨床表現(xiàn)為頭痛頭暈、腹痛、腹瀉（黃色水樣便）、嘔吐、惡心、乏力等癥狀，部分病例低熱等，初步懷疑為患者感染的可疑菌可能為以下幾種。食物中毒的判別及檢驗病原菌臨床癥狀特征食品標(biāo)本沙門菌多數(shù)起病急驟，畏寒發(fā)熱，體溫一般38～39℃，伴有惡心、嘔吐，腹痛，腹瀉，大便每日3～5次至數(shù)十次不等，大便常為水樣禽、蛋、肉（交叉污染的進(jìn)口物）食品：血清分型培養(yǎng)病例：血清分型培養(yǎng)食品加工者：糞便、血清培養(yǎng)副溶血弧菌腹痛、嘔吐、腹瀉及水樣便等癥狀。

海產(chǎn)品食品／病例埃希氏大腸菌⒈產(chǎn)毒大腸桿菌水樣腹瀉、腹痛、惡心、低熱。每天腹瀉可達(dá)8～12次。

生蔬菜食品：定性培養(yǎng)和血清分型病例：糞便培養(yǎng)、血清分型和腸毒素產(chǎn)生；侵襲性試驗

⒉。侵襲性大腸桿菌發(fā)熱、劇烈腹痛、水樣腹瀉、糞便中有少量粘液和血。

沙拉，水，奶酪⒊。腸出血性大腸桿菌（E.coliO157:H7和其它）不典型一般3～10天發(fā)病，常有突發(fā)性的腹部痙攣，有時類似于闌尾炎的疼痛。有的病人只有輕度腹瀉；有些病人由水樣便，轉(zhuǎn)為血性腹瀉，牛肉，生奶

志賀菌屬起病急，發(fā)熱、腹痛、膿血便、水樣便并有中度全身中毒癥狀。被感染的操作者污染食品，通常不是食物傳染的食品：糞培養(yǎng)和血清分型病例／操作者：糞便培養(yǎng)和血清分型食物中毒的判別及檢驗產(chǎn)氣莢膜梭菌腹痛、腹瀉，多為水樣便，一般無膿血便，可伴有頭痛、無力及發(fā)熱。肉、禽類食品：腸毒素檢測，定性培養(yǎng)和血清分型小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌發(fā)熱、腹痛、水樣腹瀉、嘔吐、關(guān)節(jié)炎、敗血癥、胃腸炎癥狀、發(fā)熱、亦可引起闌尾炎。

被感染的人或低等動物污染的食品冷藏食品食品：定性培養(yǎng)操作者：糞便培養(yǎng)動物：糞便，生病動物的尸檢材料培養(yǎng)霍亂弧菌（癥狀與）上吐下瀉，瀉出物呈“米泔水樣”并含大量弧菌

感染者污染的食物或從污染的環(huán)境獲得食品：血清分型病例：血清分型蠟樣芽孢桿菌驟起腹痛、腹瀉、水樣便，惡心，嘔吐較少，少數(shù)患者有發(fā)熱。調(diào)味醬、米粉、布丁、香腸、肉塊食品：定性培養(yǎng)病例：糞便培養(yǎng)金黃色葡萄球菌嘔吐、發(fā)熱、腹瀉、黃綠色糊狀便；重癥呈暗綠色水樣便海水樣便。粘液多，有腥臭味，有時可排出片狀偽膜?；鹜龋馄{(diào)味醬／奶油食品：腸毒素檢測食品加工者：培養(yǎng)鼻孔、皮膚病變病人：糞便、嘔吐物食物中毒的判別及檢驗細(xì)菌性食物中毒實驗室應(yīng)急檢測程序初步篩查直接涂片檢查分離培養(yǎng)檢驗1.增菌培養(yǎng)、平板分離培養(yǎng)2.快速檢驗（PCR）3.全面生化檢驗與血清學(xué)檢驗

食物中毒的判別及檢驗直接涂片取新鮮病患的糞便標(biāo)本涂片，空氣自然干燥后火焰上加熱固定，革蘭氏染色鏡檢。若鏡檢有魚群狀排列弧菌，可懷疑為霍亂弧菌。食物中毒的判別及檢驗增菌培養(yǎng)

⑴需氧菌增菌培養(yǎng)基

7.5%NaCl肉湯金黃色葡萄球菌葡萄糖肉浸液肉湯溶血性鏈球菌

TTB、SC增菌液沙門氏菌志賀氏菌增菌液志賀氏菌3.5%NaClAPW副溶血性弧菌腸道菌增菌液EC病原性大腸埃希氏菌⑵厭氧菌增菌庖肉培養(yǎng)基產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌

食物中毒的判別及檢驗直接平板培養(yǎng)將處理后的檢樣直接接種于各種平板培養(yǎng)基上⑴需氧培養(yǎng)普通瓊脂平板蠟樣芽孢桿菌及其他未知菌血平板葡萄球菌、鏈球菌、蠟樣芽孢桿菌伊紅—美藍(lán)培養(yǎng)基大腸埃希氏菌、變形桿菌麥康凱培養(yǎng)基大腸埃希氏菌、變形桿菌HE、SS培養(yǎng)基沙門氏菌、志賀氏菌TCBS培養(yǎng)基副溶血性弧菌⑵厭氧培養(yǎng)葡萄糖血瓊脂平板產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌CCDA空腸彎曲菌

食物中毒的判別及檢驗快速檢測：PCR食物中毒的判別及檢驗用上述方法培養(yǎng)的增菌液1mL8000r/min離心5min50μLDNA提取液無菌離心管12000r/min離心5min吸棄上清液沸水浴5min取上清液保存于-20℃?zhèn)溆靡源龣z測，-70℃可長期保存PCR擴(kuò)增細(xì)菌模板DNA提取食物中毒的判別及檢驗PCR擴(kuò)增1.設(shè)置對照空白對照陰性對照陽性對照蒸餾水非目標(biāo)菌的DNA含有檢測序列的DNA或質(zhì)粒食物中毒的判別及檢驗PCR擴(kuò)增2.反應(yīng)體系根據(jù)不同待測菌選擇相對應(yīng)引物與反應(yīng)參數(shù)食物中毒的判別及檢驗PCR擴(kuò)增擴(kuò)增產(chǎn)物電泳檢測1.用電泳緩沖液制備1.8%-2%瓊脂糖凝膠，55℃-60℃時加入溴化乙錠至終濃度為2.取8-15μLPCR擴(kuò)增產(chǎn)物，分別與2μL上樣緩沖液混合進(jìn)行點(diǎn)樣，用DNA分子量標(biāo)記物做參照。恒壓電泳20-40min后用凝膠成像分析系統(tǒng)記錄保存。食物中毒的判別及檢驗PCR結(jié)果判定若陰性對照與空白對照未出現(xiàn)條帶，陽性對照出現(xiàn)預(yù)期大小的擴(kuò)增條帶，待測樣品未出現(xiàn)相應(yīng)大小擴(kuò)增條帶，則報告為檢驗結(jié)果陰性。若待測樣品出現(xiàn)相應(yīng)大小擴(kuò)增條帶可判定結(jié)果為假定陽性，此時用傳統(tǒng)檢測步驟進(jìn)行確認(rèn)，最終結(jié)果以后者檢測結(jié)果為準(zhǔn)。食物中毒的判別及檢驗傳統(tǒng)手工鑒定1.分離分別用接種環(huán)取上述沙門菌增菌液1環(huán)，劃線接種于一個BS瓊脂平板和一個XLD瓊脂平板（或HE瓊脂平板或沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板）。XLD瓊脂平板、HE瓊脂平板、沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板于36℃±1℃分別培養(yǎng)18h～24，BS瓊脂平板培養(yǎng)40h～48h。觀察平板上的菌落特征。食物中毒的判別及檢驗傳統(tǒng)手工鑒定2.生化反應(yīng)自選擇性瓊脂平板上分別挑取2個以上典型或可疑菌落，接種三糖鐵瓊脂，先在斜面劃線，再于底層穿刺；接種針不要滅菌,直接接種賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基和營養(yǎng)瓊脂平板，于36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h，必要時可延長至48h。觀察菌落特征。食物中毒的判別及檢驗初步生化:三糖鐵（TSI）現(xiàn)象說明底層黃色葡萄糖陽性紅色或不變色葡萄糖陰性黑色產(chǎn)H2S氣泡產(chǎn)氣斜面黃色乳糖和（或）蔗糖陽性紅色或不變色乳糖和（或）蔗糖陰性食物中毒的判別及檢驗傳統(tǒng)手工鑒定、接種三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基的同時,可直接接種蛋白胨水（供做靛基質(zhì)試驗）、尿素瓊脂（）、氰化鉀（KCN）培養(yǎng)基，也可在初步判斷結(jié)果后從營養(yǎng)瓊脂平板上挑取可疑菌落接種。于36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h，必要時可延長至48h，按下表判定結(jié)果。將已挑菌落的平板儲存于2℃～5℃或室溫至少保留24h，以備必要時復(fù)查。食物中毒的判別及檢驗傳統(tǒng)手工鑒定2.3初步生化結(jié)果判定反應(yīng)序號A1：典型反應(yīng)判定為沙門氏菌屬。如尿素、KCN和賴氨酸脫羧酶3項中有1項異常，按表4可判定為沙門氏菌。如有2項異常為非沙門氏菌。食物中毒的判別及檢驗傳統(tǒng)手工鑒定初步生化結(jié)果判定反應(yīng)序號A2：補(bǔ)做甘露醇和山梨醇試驗，沙門氏菌靛基質(zhì)陽性變體兩項試驗結(jié)果均為陽性，但需要結(jié)合血清學(xué)鑒定結(jié)果進(jìn)行判定。反應(yīng)序號A3：補(bǔ)做ONPG*。ONPG陰性為沙門氏菌，同時賴氨酸脫羧酶陽性,甲型副傷寒沙門氏菌為賴氨酸脫羧酶陰性。（*：鄰硝基酚-β-D-半乳糖苷溶液試驗：將待檢培養(yǎng)物接種3%氯化鈉三糖鐵瓊脂，36℃±1℃培養(yǎng)18h。挑取1滿環(huán)新鮮培養(yǎng)物接種于0.25mL3%氯化鈉溶液，在通風(fēng)櫥中，滴加1滴甲苯，搖勻后置37℃水浴5min。加0.25mLONPG溶液，36℃±1℃培養(yǎng)觀察24h。陽性結(jié)果呈黃色。陰性結(jié)果則24h不變色。）食物中毒的判別及檢驗傳統(tǒng)手工鑒定3.血清學(xué)鑒定多價菌體抗原（O）與多價鞭毛抗原（H）鑒定在玻片上劃出2個約1cm×2cm的區(qū)域，挑取1環(huán)待測菌，各放1/2環(huán)于玻片上的每一區(qū)域上部，在其中一個區(qū)域下部加1滴多價菌體（O）抗血清或多價鞭毛（H）抗血清，在另一區(qū)域下部加入1滴生理鹽水，作為對照。再用無菌的接種環(huán)或針分別將兩個區(qū)域內(nèi)的菌落研成乳狀液。將玻片傾斜搖動混合1min，并對著黑暗背景進(jìn)行觀察，任何程度的凝集現(xiàn)象皆為陽性反應(yīng)。食物中毒的判別及檢驗傳統(tǒng)手工鑒定血清學(xué)分型用抗血清對所分離菌種的菌體O抗原、表面Vi抗原、第I相和第II相H抗原進(jìn)行凝集試驗用A～F多價O血清做玻片凝集試驗，同時用生理鹽水做對照。在生理鹽水中自凝者為粗糙形菌株，不能分型。多價抗血清凝集后再用分別代表每個O血清群的單價因子血清定群。再按照確定的O群，分別用H因子血清檢測第I相和第II相H抗原，綜合O、H以及Vi因子血清檢查結(jié)果，判斷沙門氏菌的血清型。食物中毒的判別及檢驗關(guān)于收集到的病患的檢驗一：糞便糞便常規(guī)：病患糞便標(biāo)本：在接收到的病患糞便標(biāo)本之后，進(jìn)行糞便常規(guī)檢查，并且對其增菌培養(yǎng)后進(jìn)行病原學(xué)檢查目的：糞便常規(guī)檢查是為了查看WBC、RBC,有無隱血，是否為侵襲性的。在顯微檢查的時候也可看有無可疑蟲卵或可疑菌（若為霍亂弧菌則可在圖片上看到逗號狀魚群樣排列的菌群）；做增菌分離