培養(yǎng)基的制備

4/4實驗二培養(yǎng)基的制備一、目的要求1.掌握一般培養(yǎng)基制備的原則和要求。２.熟悉一般培養(yǎng)基制備的過程。二、實驗器材１。藥品或試劑：１ｍoｌ/LＮａOH,1mol／LＨCl；蛋白胨0.２、牛肉膏0。６、瓊脂，氯化鈉1,蒸餾水20０。2。儀器或其他用具:

試管,三角瓶,燒杯，量筒，玻璃棒，培養(yǎng)基分裝器,天平，藥匙，高壓蒸氣滅菌鍋，pＨ測定儀或pH試紙（pH5.５～９.０)，棉花，濾紙，記號筆,麻繩,紗布等。實驗方法：1稱量：準確稱量所需藥品或試劑2溶解：將以上成分加溫溶于蒸餾水中3調(diào)節(jié)PH：用酸度計測定溶液ＰH并用1mｏｌ/LNaOH,1ｍol/LHCl調(diào)節(jié)ＰH7．４~7.６４過濾：用濾紙過濾后取出５0ML進行封裝，每支試管裝入5MＬ５加塞：塞好棉塞用紙包好，準備滅菌6滅菌:

培養(yǎng)基的滅菌，高壓蒸汽滅菌,一般采用15磅／平方（即1。05kg/ｃｍ2)壓力,此時的溫度是121．3℃.滅菌20~30分鐘后。７無菌檢驗：將滅菌的培養(yǎng)基放入３7℃的恒溫箱中培養(yǎng)24～4８h,以檢查滅菌是否徹底.二）普通瓊脂培養(yǎng)基1將以上過濾封裝后剩余的溶液加瓊脂溶解,補足水分2分裝于中三角瓶中。3加塞4高壓滅菌２0~3０分鐘后,制平板。5無菌檢驗將滅菌的培養(yǎng)基放入３7℃的恒溫箱中培養(yǎng)24～48h，以檢查滅菌是否徹底。保存?zhèn)溆?。思考題1.培養(yǎng)基配好后，為什么必須立即滅菌?如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是無菌的？2.在配制培養(yǎng)基的操作過程中應注意些什么問題？3.管口、瓶口為什么要用棉塞?能否用橡皮塞代替？為什么？實驗三理化因素對微生物的影響一、目的要求１．掌握對微生物影響的因素2．熟悉溫度、紫外線對微生物的影響二、實驗器材1。普通肉湯培養(yǎng)基、普通瓊脂培養(yǎng)基２．大腸桿菌、金黃色葡萄球菌3.儀器或其他用具：

超凈工作臺，培養(yǎng)箱、接種環(huán),鑷子,酒精燈、吸管、試管，記號筆等。三、方法１。紫外線殺菌試驗用接種環(huán)沾取大腸桿菌在瓊脂平板培養(yǎng)基表面來回密密涂滿整個平板。打開平板蓋，蓋上中空紙片，使其半暴露于紫外線燈下20—30ｃm處，照射３0分鐘,取出紙片,蓋上蓋，置37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)２４h,觀察平板表面細菌生長的情況.２.溫度試驗用接種環(huán)沾取大腸桿菌分別接種于４支裝有普通肉湯培養(yǎng)基的試管中，1支作為對照,1支不接入任何菌也作為對照，其余3支置于80℃水浴鍋中，分別放置５分、10分、2０分鐘,取出后，置３７℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2４小時,觀察細菌生長的情況。實驗四自然界中微生物的分布一、實驗目的1.認識微生物在自然界存在的普遍性2.了解細菌在自然界和人體的分布情況二、實驗器材１。普通瓊脂培養(yǎng)基,2．培養(yǎng)箱,接種環(huán)，鑷子，酒精燈、吸管、試管,記號筆等.三、方法1、空氣中細菌的檢查（采用沉降法)取無菌普通平板１只，置一處,啟蓋10分，再蓋上蓋,37℃培養(yǎng)24h，取出觀察有無細菌生長。2、咽喉部細菌檢查用無菌方法，向普通平板里吹氣2—3次，３7℃培養(yǎng)2４h后觀察結(jié)果。觀察有無細菌生長。３、皮膚表面細菌的檢查（采用涂抹法）在普通培養(yǎng)基上分區(qū)后,直接用手指在無菌平板表面輕輕涂按1處，之后用自來水洗手指在平板表面2處輕輕涂按，37℃培養(yǎng)2４h后,取出觀察有無細菌生長.實驗五細菌分離技術(shù)一、實驗目的1。掌握微生物的分離與接種技術(shù)2．學會用平板劃線法分離微生物二、實驗器材樣品；MRS分離培養(yǎng)基；乳酸菌,大腸桿菌培養(yǎng)箱,搖床０.9％，接種環(huán)，記號筆,酒精燈,試管架，無菌生理鹽水等五、實驗步驟１。采樣:無菌采集樣品，要有針對性2。分離:用乳酸菌分離培養(yǎng)基(MRＳ）采用劃線法進行3．培養(yǎng)：平板倒置于３７℃培養(yǎng)箱24ｈ～４8h，觀察菌落特征4．制備純培養(yǎng)：將培養(yǎng)后單個菌落釣出，劃線與平板上,37℃培養(yǎng)4８小時檢查菌落是否單純，也可用顯微鏡檢查是否是純的微生物2）釋液傾注平皿稱取樣1。0g，放入盛99mL無菌水并帶有玻璃珠的三角瓶中,振蕩使樣品均勻分散成為懸液（10-2）。用1mＬ的無菌吸頭從中吸取0.５ml樣品懸液，注入分裝有４。５mｌ無菌水的試管中,吹吸３次，振蕩均勻（10－3）。同樣方法，配置成稀釋度為1０—4，1０－5，１0-6的樣品溶液,各樣?。眒L加在平皿中,傾注培養(yǎng)基．（3)涂布用一支新的無菌吸頭，分別由各濃度樣品稀釋液中各吸取10０ul，對號較均勻地放入已寫好稀釋度的牛肉蛋白胨培養(yǎng)基平板上，用無菌玻璃涂棒涂勻。每個濃度做２個平板4．制備純培養(yǎng)：將培養(yǎng)后單個菌落釣出，劃線與平板上，37℃培養(yǎng)4８小時檢查菌落是否單純，也可用顯微鏡檢查是否是純的微生物細菌的生理生化反應一、實驗目的1。了解細菌生理生化反應原理２.掌握細菌鑒定中常用的生理生化反應的測定方法二、實驗器材３7℃恒溫培養(yǎng)箱、接種環(huán)、酒精燈、試管架、記號筆等待測菌甲基紅試劑、V.P試劑、吲哚試劑.培養(yǎng)基：糖發(fā)酵培養(yǎng)基，用于糖類發(fā)酵試驗葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基，用于甲基紅和V．Ｐ試驗蛋白胨水培養(yǎng)基，用于吲哚試驗檸檬酸鐵銨或醋酸鉛的半固體培養(yǎng)基,用于硫化氫試驗檸檬酸鈉培養(yǎng)基,用于檸檬酸鹽利用試驗三、實驗方法方法（1)編號在各試管上分別標明各種糖名稱，所接種的菌名和組號，下同.（2）接種（３)培養(yǎng)將已接種好的培養(yǎng)基置37℃溫箱中培養(yǎng)２4h。（4）觀察結(jié)果2甲基紅(Methｙlrｅd）試驗(簡稱MR試驗）某些細菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸,丙酮酸再被分解，產(chǎn)生甲酸、乙酸、乳酸等，使培養(yǎng)基的pH降低到４．2以下，這時若加甲基紅指示劑呈現(xiàn)紅色。因甲基紅指示劑變色范圍是pＨ４．4（紅色）~pＨ6．２（黃色)方法將待檢菌分別接種到葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，３７℃培養(yǎng)４8h，加甲基紅指示劑數(shù)滴，觀察結(jié)果,呈現(xiàn)紅色者為陽性,呈現(xiàn)黃色者為陰性3伏一普二氏試驗（V.P．試驗某些細菌分解葡萄糖為丙酮酸，丙酮酸再被分解,變?yōu)橐阴＜谆状?乙酰甲基甲醇,其在堿性條件下氧化成為二乙酰，二乙酰和蛋白胨中精氨酸胍基起作用產(chǎn)生粉紅色的化合物，此為VＰ試驗4靛基質(zhì)(吲哚）試驗某些細菌能分解蛋白質(zhì)中的色氨酸，產(chǎn)生靛基質(zhì)(吲哚）,靛基質(zhì)與對二甲基氨基苯甲醛結(jié)合,形成玫瑰色靛基質(zhì)(紅色化合物)方法:將被檢菌接種到胰蛋白胨水培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24h～４８h后，沿試管壁滴加數(shù)滴吲哚試劑于培養(yǎng)物液面，觀察結(jié)果結(jié)果：出現(xiàn)紅色者為陽性出現(xiàn)黃色者為陰性.５。硫化氫試驗某些細菌能分解含硫的氨基酸（胱氨酸、半胱氨酸等)，產(chǎn)生硫化氫，硫化氫與培養(yǎng)基中的鉛鹽或鐵鹽，形成黑色沉淀硫化鉛或硫化鐵，為硫化氫試驗陽性,可借以鑒別細菌方法將待檢菌以接種針穿刺接種