食品安全課件

第十章維生素的測(cè)定海南大學(xué)食品學(xué)院第一節(jié)概述

維生素是維持人體正常生命活動(dòng)所必需的一類天然有機(jī)化合物。其種類很多，目前已確認(rèn)的有30余種，其中被認(rèn)為對(duì)維持人體健康和促進(jìn)發(fā)育至關(guān)重要的有20余種。人體如從膳食中攝入維生素的量不足或者機(jī)體由于某種原因吸收或合成發(fā)生障礙時(shí)，就會(huì)引起各種維生素缺乏癥。近幾年已經(jīng)查明僅有少數(shù)幾種維生素可以在體內(nèi)合成，大多數(shù)維生素都必須由食物供給。維生素的分類1、脂溶性維生素：能溶于脂肪或脂溶劑，在食物中與脂類共存的一類維生素，包括A、D、E、K，其共同特點(diǎn)是攝入后存在于脂肪組織中，不能從尿中排除，大劑量攝入時(shí)可能引起中毒。由于可儲(chǔ)藏在脂肪中，故不需每天供給。2、水溶性維生素：能溶于水，包括B族、C，其共同特點(diǎn)是一般只存在于植物性食品中，滿足組織需要后都能從機(jī)體排出，需要每天供給。測(cè)定食品中維生素的含量的意義評(píng)價(jià)食品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值；尋找富含維生素的食品資源；指導(dǎo)人們合理調(diào)整膳食結(jié)構(gòu)，防止維生素缺乏癥或維生素中毒；研究維生素在食品加工、貯存等過程中的穩(wěn)定性，指導(dǎo)人們制定合理的工藝及貯存條件；監(jiān)督維生素強(qiáng)化食品的強(qiáng)化劑量，防止因攝入過多而引起維生素中毒。第二節(jié)脂溶性維生素的測(cè)定VA、VD、VE、VK與類脂物一起存于食物中。脂溶性維生素具有以下理化性質(zhì)：

1、溶解性：不溶于水，易溶于脂肪、乙醇、丙酮、氯仿、乙醚、苯等有機(jī)溶劑。

2、耐酸堿性：VA、VD對(duì)酸不穩(wěn)定，對(duì)堿穩(wěn)定，VE對(duì)堿不穩(wěn)定，但在抗氧化劑存在下或惰性氣體保護(hù)下，也能經(jīng)受堿的煮沸。

3、耐熱性、耐氧化性：耐熱性好，VA易被氧化，光和熱促進(jìn)其氧化；VE易被氧化，對(duì)可見光穩(wěn)定但易被紫外光氧化；VK易被光、氧化劑及醇氧化。根據(jù)上述性質(zhì)．測(cè)定脂溶性維生素時(shí)，通常：皂化樣品水洗去除類脂物有機(jī)溶劑提取脂溶性維生素(不皂化物)濃縮溶于適當(dāng)?shù)娜軇y(cè)定。在皂化和濃縮時(shí)，為防止維生素的氧化分解，常加入抗氧化劑(如焦性沒食子酸、維生素C等)。

一、維生素A的測(cè)定

維生素A存在于動(dòng)物性脂肪中，主要來源于肝臟、魚干油、蛋類、乳類等動(dòng)物性食品中。植物性食品中不含VA，但在深色果蔬中含有胡蘿卜素，它在人體內(nèi)可轉(zhuǎn)變?yōu)閂A，故稱為VA原。GB/T5009.82—2003中第一法高效液相色譜法測(cè)定維生素A是近幾年發(fā)展起來的方法，此法能快速分離、同時(shí)測(cè)定維生素A和維生素E。最小檢出量分別為VA：0.8ng；α-E：91.8ng；γ-E：36.6ng；δ-E：20.6ng。（一）高效液相色譜法測(cè)定食物中VA、VE1、原理食物中的維生素A及維生素E經(jīng)皂化提取以后，將其從不可皂化的部分提取到有機(jī)溶劑中。用HPLC法測(cè)定維生素A及維生素E的含量。

2、分析步驟皂化→提取→洗滌→萃取→濃縮→溶解→離心→測(cè)定→結(jié)果計(jì)算（1）皂化

稱取1－10g樣品（含維生素A約3μg)于皂化瓶中，加30mL無(wú)水乙醇，進(jìn)行攪拌，直到顆粒物分散均勻?yàn)橹?。?0mL10％抗壞血酸，苯并[e]芘標(biāo)準(zhǔn)液2.00mL，混勻。加10mL(1+1)氫氧化鉀，混勻。于沸水浴上回餾30min使皂化完全。皂化后立即于水中冷卻。（2）提提取取將皂皂化化后后的的樣樣品品移移入入分分液液漏漏斗斗中中，，用用50mL水分分2－3次洗洗皂皂化化瓶瓶，，洗洗液液并并入入分分液液漏漏斗斗中中。。用用約約100mL乙醚醚分分兩兩次次洗洗皂皂化化瓶瓶及及其其殘殘?jiān)?，，乙乙醚醚液液并并入入分分液液漏漏斗斗中中。。如如有有殘殘?jiān)?，，可可將將此此液液通通過過有有少少許許脫脫脂脂棉棉的的漏漏斗斗濾濾入入分分液液漏漏斗斗。。輕輕輕輕振振搖搖分分液液漏漏斗斗2min，靜靜置置分分層層，，棄棄去去水水層層。。（3）洗洗滌滌用約約50mL水洗洗分分液液漏漏斗斗中中的的乙乙醚醚層層，，水水洗洗至至水水層層不不顯顯堿堿性性，，（（最最初初水水洗洗輕輕搖搖，，逐逐次次振振搖搖強(qiáng)強(qiáng)度度可可增增加加））。。（4）濃縮將乙醚提提取液經(jīng)經(jīng)過無(wú)水水硫酸鈉鈉（約5g）濾入與與球形蒸蒸發(fā)瓶?jī)?nèi)內(nèi)，用約約10mL乙醚沖洗洗分液漏漏斗及無(wú)無(wú)水硫酸酸鈉3次，入蒸蒸發(fā)瓶?jī)?nèi)內(nèi)，并將將其接至至旋轉(zhuǎn)蒸蒸發(fā)器上上，于55°C水浴中減減壓蒸餾餾并回收收乙醚，，待瓶中中剩下約約2mL乙醚時(shí)，，取下蒸蒸發(fā)瓶，，立即用用氮?dú)獯荡档粢颐衙?。加入?.00mL乙醇，充充分混合合，溶解解提取物物。將乙乙醇液移移入一小小塑料離離心管中中，離心心5min（5000rpm)。上清液液供色譜譜分析。。（5）標(biāo)準(zhǔn)曲曲線的制制備將維生素素A和維生素素E標(biāo)準(zhǔn)品配配置成標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液液（約1mg/mL），制備備標(biāo)準(zhǔn)曲曲線前用用紫外分分光光度度法標(biāo)定定其準(zhǔn)確確濃度。。標(biāo)準(zhǔn)濃度度的標(biāo)定定方法：：取維生生素A和維生素素E標(biāo)準(zhǔn)液若若干微升升，分別別稀釋至至10.00mL乙醇中，，并分別別按給定定波長(zhǎng)測(cè)測(cè)定各維維生素的的吸光值值。用比比吸光系系數(shù)計(jì)算算該維生生素的濃濃度。繪制標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)曲線：：標(biāo)準(zhǔn)和和內(nèi)標(biāo)物物進(jìn)行色色譜分析析，以維維生素A峰面積與與內(nèi)標(biāo)物物峰面積積之比為為縱坐標(biāo)標(biāo)，維生生素A濃度為橫橫坐標(biāo)繪繪制標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)曲線。。（6）高效液液相色譜譜分析預(yù)柱:ultrasphereODS10μm,4mm××4.5cm分析柱:ultrasphereODS5μμm,4.6mm××25cm流動(dòng)相:甲醇:水＝98:2混勻,于臨用前前脫氣紫外檢測(cè)測(cè)器波長(zhǎng)長(zhǎng)：300nm進(jìn)樣量：：20μL流速：1.7mL/min（7）注意事事項(xiàng)維生素A極易被破破壞，實(shí)實(shí)驗(yàn)操作作應(yīng)在微微弱光線線下進(jìn)行行，或用用棕色玻玻璃儀器器。在皂化過過程中，，應(yīng)每5分鐘搖一一下皂化化瓶，使使樣品皂皂化完全全提取過程程中，振振搖不應(yīng)應(yīng)太劇烈烈，避免免溶液乳乳化而不不易分層層。洗滌時(shí)，，最初水水洗輕搖搖，逐次次振搖強(qiáng)強(qiáng)度可增增加。無(wú)水硫酸酸鈉如有有結(jié)塊，，應(yīng)烘干干后使用用。在旋轉(zhuǎn)蒸蒸發(fā)時(shí)乙乙醚溶液液不應(yīng)蒸蒸干，以以免被測(cè)測(cè)樣品含含量損失失。用高純氮氮吹干時(shí)時(shí)，氮?dú)鈿獠荒荛_開的太大大，避免免樣品吹吹出瓶外外結(jié)果偏偏低。GB/T5009.82——2003中第二法法原理：在在氯仿溶溶液中，，VA與三氯化化銻可生生成藍(lán)色色可溶性性絡(luò)合物物，在620nm波長(zhǎng)處有有最大吸吸收峰，，其吸光光度與VA的含量在在一定的的范圍內(nèi)內(nèi)成正比比，故可可比色測(cè)測(cè)定。適用范圍圍及特點(diǎn)點(diǎn)：本法法適用于于維生素素A含量較高的的各種樣品品(高于5—10μμg／g)，對(duì)低含量量樣品，因因受其他脂脂溶性物質(zhì)質(zhì)的干擾．．不易比色色測(cè)定：主要缺點(diǎn)：：生成的藍(lán)藍(lán)色絡(luò)合物物的穩(wěn)定性性差。比色色測(cè)定必須須在6秒鐘內(nèi)完成成，否則藍(lán)藍(lán)色會(huì)迅速速消退，將將造成極大大誤差。（二）比色色法測(cè)定VA的含量注意：維生素A見光易分解解，整個(gè)實(shí)實(shí)驗(yàn)應(yīng)在暗暗處進(jìn)行，，防止陽(yáng)光光照射，或或采用棕色色玻璃避光光。三氯化銻腐腐蝕性強(qiáng)，，不能沾在在手上，三三氯化銻遇遇水生成白白色沉淀．．因此用過過的儀器要要先用稀鹽鹽酸浸泡后后再清洗。。二、β—胡蘿卜素的的測(cè)定（GB/T5009.83——2003）第一方法法是HPLC；第二方法法為紙層析析法。胡蘿卜素是是一種廣泛泛存在于有有色蔬菜和和水果中的的天然色素素，有多種種異構(gòu)體和和衍生物，，總稱為類類胡蘿卜素素，其中在在分子結(jié)構(gòu)構(gòu)中含有β一紫羅寧殘殘基的類胡胡蘿卜素，，在人體內(nèi)內(nèi)可轉(zhuǎn)變?yōu)闉榫S生素A，故稱為維維生素A原。如α、β、γ胡蘿卜素，，其中以β—胡蘿卜素效效價(jià)最高。。胡蘿卜素原原只存在于于植物性食食品中，但但以胡蘿卜卜為食物的的家禽、獸獸類、水產(chǎn)產(chǎn)動(dòng)物及其其加工產(chǎn)品品，以及為為著色而添添加胡蘿卜卜素的食品品也含有胡胡蘿卜素。。β—胡蘿卜素的的結(jié)構(gòu)如下下：胡蘿卜素對(duì)對(duì)熱及酸、、堿比較穩(wěn)穩(wěn)定，但紫紫外線和空空氣中的氧氧可促進(jìn)其其氧化破壞壞。因系脂脂镕性維生生素，故可可用有機(jī)溶溶劑從食物物中提取。。胡蘿卜素本本身是一種種色素，在在450nm波長(zhǎng)處有最最大吸收，，故只要能能完全分離離，便可定定性和定量量。在植物體內(nèi)內(nèi)，胡蘿卜卜素經(jīng)常與與葉綠素、、葉黃素等等共存，在在提取β一胡蘿卜素素時(shí)，必須須將胡蘿卜卜素與其它它色素分開開。常用的的方法有紙紙層析、柱柱層析和薄薄層層析法法。凈化用層析析介質(zhì)采用用氧化鎂、、氧化鋁避光三、維生素素D的測(cè)定維生素D為固醇類衍生物，，具抗佝僂病作用，其中中最重要的的是D2和D3。植物不含含維生素D，但維生素素D原在動(dòng)、植植物體內(nèi)都都存在。植植物中的麥麥角醇為維維生素D2原，經(jīng)紫外外照射后可可轉(zhuǎn)變?yōu)榫S維生素D2，又名麥角角鈣化醇；；人和動(dòng)物物皮下含的的7-脫氫膽固醇醇為維生素素D3原，在紫外外照射后轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)變成維生生素D3，又名膽鈣鈣化醇。以D3為最重要。。維生素D2藥片吃多了了中毒。分析方法中中較好的是是比色法和和高效液相相色譜法。。是AOAC選定的正式式方法。維生素D的結(jié)構(gòu)原理在三氯甲烷溶溶液中，維生生素D與三氯化銻結(jié)結(jié)合生成一種種黃色化合物物，呈色強(qiáng)度度與維生素D含量呈正比。。食品中維生素素D含量較低，其其他維生素嚴(yán)嚴(yán)重干擾其測(cè)測(cè)定，因此測(cè)測(cè)定前必須經(jīng)經(jīng)柱層析除去去干擾成分。。層析介質(zhì)為為硅藻土、中中性氧化鋁此法測(cè)定的是是維生素D2和維生素D3的總量（一）三氯化化銻比色法（二）液相色色譜法靈敏度較比色色法高30倍以上，且操操作簡(jiǎn)便，精精度高，分析析速度快。是是目前分析維維生素D的最好方法。。試樣經(jīng)皂化后后，用苯提取取不皂化物，，蒸餾除苯，，先采用反相相C18柱分取維生素素D，除去大部分分雜質(zhì)。進(jìn)一一步采用正相相色譜分離，，紫外檢測(cè)定定量。反相色譜條件件色譜柱：NucleosilC18,7.5mm*300mm流動(dòng)相：乙腈腈＋甲醇（1＋1）流速：2.0mL/min紫外檢測(cè)波長(zhǎng)長(zhǎng)：254nm正相色譜條件件色譜柱：正相相柱ZorbaxSIL,4.5mm*250mm流動(dòng)相：0.4%異丙酮的己烷烷溶液流速：1.6mL/min紫外檢測(cè)波長(zhǎng)長(zhǎng)：254nm注意事項(xiàng)1、VD2與VD3分不開2、皂化時(shí)加入入焦性沒食子子酸作為抗氧氧化劑2、標(biāo)樣與試樣樣在同樣條件件下皂化，消消除了VD的熱異異性化損失。。3、也可用硅藻藻土及皂土柱柱層析，除去去甾醇、VA、胡蘿卜素的的干擾。第三三節(jié)節(jié)水水溶溶性性維維生生素素的的測(cè)測(cè)定定水溶溶性性維維生生素素B1、B2和C，廣廣泛泛存存在在于于動(dòng)動(dòng)植植物物組組織織中中，，飲飲食食來來源源充充足足。。但但是是由由于于它它們們本本身身的的水水溶溶性性質(zhì)質(zhì)，，除除滿滿足足人人體體生生理理、、生生化化作作用用外外，，任任何何多多余余量量都都會(huì)會(huì)從從小小便便中中排排出出。。為為避避免免耗耗盡盡，，需需要要經(jīng)經(jīng)常常由由飲飲食食來來提提供供。。水溶性維維生素都都易溶于于水，而而不溶于于苯、乙乙醚、氯氯仿等大大多數(shù)有有機(jī)溶劑劑。在酸酸性介質(zhì)質(zhì)中很穩(wěn)穩(wěn)定，既既使加熱熱也不破破壞；但但在堿性性介質(zhì)中中不穩(wěn)定定，易于于分解，，特別在在堿性條條件下加加熱，可可大部分分或全部部破壞。。它們易易受空氣氣、光、、熱、酶酶、金屬屬離子等等的影響響；維生素B2對(duì)光，特特別是紫紫外線敏敏感，易易被光線線破壞壞；維生生素C對(duì)氧、銅銅離子敏敏感，易易被氧化化。根據(jù)上述述性質(zhì)，，測(cè)定水水溶性維維生素時(shí)時(shí)，一般般都在酸酸性溶液液中進(jìn)行行前處理理。維生素Bl、B2鹽酸水解解酶酶解解提取純純化化維生素C通常采用用草酸、、草酸—醋酸、偏偏磷酸—醋酸溶液液直接提提取。在在一定濃濃度的酸酸性介質(zhì)質(zhì)中，可可以消除除某些還還原性雜雜質(zhì)對(duì)維維生素C的破壞作作用。草草酸價(jià)廉廉，使用用方便，，對(duì)維生生素C有很好淀粉酶木瓜蛋白酶活性人造浮石硅鎂吸附劑一、維生生素B1的測(cè)定維生素B1又名硫胺胺素、抗抗神經(jīng)炎炎素，通通常以游游離態(tài)，，或以焦焦磷酸酯酯形式存存在于自自然界。。在酵母母、米糠糠、麥胚胚、花生生、黃豆豆以及綠綠色蔬菜菜和牛乳乳、蛋黃黃中含量量較為豐豐富。分析方法法：GB/T5009.84——2003中唯一的的方法是是熒光計(jì)計(jì)法此法檢出出限0.05μg1、原理硫胺素在在堿性鐵鐵氰化鉀鉀溶液中中被氧化化成硫色色素（噻噻嘧色素素），在在紫外線線下，硫硫色素發(fā)發(fā)出熒光光。在給給定的條條件下，，以及沒沒有其他他物質(zhì)干干擾時(shí)，，此熒光光強(qiáng)度與與硫色素素量成正正比，即即與溶液液中硫胺胺素量成成正比。。從而測(cè)測(cè)定其含含量。2、分析步步驟制樣→水水解→凈凈化→氧氧化→干干燥→測(cè)測(cè)定→結(jié)結(jié)果計(jì)算算（1）提取精確稱取取一定量量試樣5－20g（硫胺素素含量約約為10－30ug）置于100mL三角瓶中中，加入入50－75mL0.1mol/L或0.3mol/L鹽酸使其其溶解，，瓶口加加蓋小燒燒杯后放放入高壓壓鍋中加加熱水解解10.3×104Pa30min,涼后取出出。用2mol/L乙酸鈉調(diào)調(diào)其pH值為4.5（以0.04%溴甲酚綠綠為指示示劑）按每克試試樣加入入20mg淀粉酶的的比例加加入淀粉粉酶。于于45－50℃℃溫箱過過夜保保溫（（約16h）。冷至室室溫，，定容容至100mL，然后后混勻勻過濾濾，即即為提提取液液（2）凈化化用少許許脫脂脂棉鋪鋪于層層析柱柱的底底部，，加水水將棉棉纖維維中氣氣泡排排出，，再加加約1g活性人人造沸沸石使使之達(dá)達(dá)到交交換柱柱的三三分之之一高高度。。保持持層析析柱中中液面面始終終高于于活性性人造造沸石石。用移液管加加入提取液液20－80mL（使通過活活性人造沸沸石的硫胺胺素總量約約為2－5μg）加入約10mL熱水沖洗交交換柱，棄棄去洗液。。如此重重復(fù)三次。。加入25％酸性氯化化鉀（溫度度為90℃左右）20mL，收集此液液于25mL刻度試管內(nèi)內(nèi)，冷至室室溫，用25％酸性氯化化鉀定容至至25mL,即為試樣凈凈化液。將20mL硫胺素標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)使用液加加入交換柱柱以代替樣樣品提取液液，即得到到標(biāo)準(zhǔn)凈化化液。（3）氧化將5mL試樣凈化液液分別加入入A、B兩個(gè)反應(yīng)瓶瓶。在避光暗環(huán)環(huán)境中將3mL15%氫氧化鈉加加入反應(yīng)瓶瓶A，振搖約15s，然后加入入10mL正丁醇；將將3mL堿性鐵氰化化鉀溶液加加入反應(yīng)瓶瓶B,振搖約15s，然后加入入10mL正丁醇；將將A、B兩個(gè)反應(yīng)瓶瓶同時(shí)用力力振搖，準(zhǔn)準(zhǔn)確計(jì)時(shí)1.5min。重復(fù)1－2，用標(biāo)準(zhǔn)凈凈化液代替替試樣凈化化液。用黑布遮蓋蓋A、B反應(yīng)應(yīng)瓶瓶，，靜靜置置分分層層后后下下層層堿堿性性溶溶液液，，加加入入2－3g無(wú)水水硫硫酸酸鈉鈉使使溶溶液液脫脫水水。。（4）熒熒光光強(qiáng)強(qiáng)度度的的測(cè)測(cè)定定熒光光測(cè)測(cè)定定條條件件：：激發(fā)發(fā)波波長(zhǎng)長(zhǎng)365nm；狹狹縫縫5nm.發(fā)射射波波長(zhǎng)長(zhǎng)435nm；狹縫5nm.依次測(cè)定下列列熒光強(qiáng)度：：試樣空白熒光光強(qiáng)度（試樣樣反應(yīng)瓶A）；標(biāo)準(zhǔn)空白熒光光強(qiáng)度（標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)反應(yīng)瓶A）；試樣熒光強(qiáng)度度（試樣反應(yīng)應(yīng)瓶B）；標(biāo)準(zhǔn)熒光強(qiáng)度度（標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)應(yīng)瓶B）。二、維生素B2的測(cè)定維生素B2即核核黃黃素素，，在在食食品品中中以以游游離離形形式式或或磷磷酸酸酯酯等等結(jié)結(jié)合合形形式式存存在在。。膳膳食食中中的的主主要要來來源源是是各各種種動(dòng)動(dòng)物物性性食食品品，，其其中中以以肝肝、、腎腎、、心心、、蛋蛋、、奶奶含含量量最最多多，，其其次次是是植植物物性性食食品品的的豆豆類類和和新新鮮鮮綠綠葉葉蔬蔬菜菜。。分析方法法：GB/T5009.85——2003中第一法法為熒光光法；第第二法為為微生物物法。1、原理核黃素在在440-500nm波長(zhǎng)光照照射下發(fā)發(fā)生黃綠綠色熒光光，在稀稀溶液中中，熒光光強(qiáng)度與與核黃素素濃度成成正比。。在波長(zhǎng)長(zhǎng)525nm下測(cè)定其其熒光強(qiáng)強(qiáng)度。試試液再加加入低亞亞硫酸鈉鈉(Na2S2O4),將核黃素素還原成成無(wú)熒光光的物質(zhì)質(zhì)，然后后再測(cè)定定試液中中殘余熒熒光雜質(zhì)質(zhì)的熒光光強(qiáng)度，，兩者之之差即為為食品中中核黃素素所產(chǎn)生生的熒光光強(qiáng)度。。2、操作步步驟樣品均制制→水解解→過濾濾定容→→氧化去去雜質(zhì)→→凈化→→測(cè)定→→結(jié)果計(jì)計(jì)算（1）水解:稱取2-10g樣品（約約含10-200ug核黃素））于100ml三角瓶中中，加入入50mL0.1mol/L鹽酸，攪攪拌直至至顆粒分分散均勻勻。用40mL瓷坩堝為為蓋扣住住瓶口,置于高壓壓鍋內(nèi)高高壓水解解，10.3X104Pa(15lb/in2)30min。水解液液冷卻后后，滴加加1mol/L氫氧化鈉鈉，取少少許水解解液，用用0.04%溴甲酚綠綠檢驗(yàn)呈呈草綠（（pH為4.5）（2）酶解:含有淀粉粉的水解解液：加加入3ml10%淀粉酶溶溶液,于37-40℃保溫16h。含高蛋蛋白的水水解液：：加入3ml10%木瓜蛋白白酶溶液液,于37-40℃保溫16h。過濾上上述酶解解液定容容至100mL,用干濾紙紙過濾。。此提取取液在4°C冰箱中保保存一周周。（3）氧化去去雜質(zhì)視樣品中中核黃素素的含量量取一定定體積的的樣品提提取液及及核黃素素標(biāo)準(zhǔn)使使用液（（約含1-10ug核黃素））分別于于20mL的帶刻度度試管中中，加水水至15mL。各管加加0.5mL冰乙酸，，混勻。。加3%高錳酸鉀鉀溶液5mL，混勻，，放置2min，使氧化化去雜質(zhì)質(zhì)。滴加加3%雙氧水溶溶液數(shù)滴滴，直到到高錳酸酸鉀顏色色褪掉。。劇烈震震搖此管管，使多多余的氧氧氣逸出出。（4）核黃素素的吸附附與洗脫脫核黃素吸吸附柱：：硅鎂吸附附劑約1g用濕法裝裝入柱，，占柱長(zhǎng)長(zhǎng)1/2-2/3（約5cm）為宜（（吸附柱柱下端用用一團(tuán)脫脫脂棉墊墊上），，勿使柱柱內(nèi)產(chǎn)生生氣泡，，調(diào)節(jié)流流速為60滴/min。過柱與洗洗脫：將全部氧氧化后的的央液及及標(biāo)準(zhǔn)液液通過吸吸附柱后后，用約約20mL的熱水洗洗去樣液液中的雜雜質(zhì)，然然后用5.0mL洗脫液（（丙酮：：冰乙酸酸：水＝＝5：2：9）將樣品品中核黃黃素洗脫脫并收集集于一帶帶蓋10mL刻度試管管中，再再用水洗洗吸附柱柱，收集集洗出液液并定容容至10mL，混勻后后待測(cè)熒熒光。（5）測(cè)定于激發(fā)波波長(zhǎng)440nm，發(fā)射波波長(zhǎng)525nm，測(cè)量樣樣品管及及標(biāo)準(zhǔn)管管的熒光光值。待測(cè)品及及標(biāo)準(zhǔn)的的熒光值值測(cè)定后后，在各各管的剩剩余液（（約5-7mL）中加0.1mL20%次亞硫酸酸鈉溶液液，立即即混勻，，在20s內(nèi)測(cè)出各各管的熒熒光值，，作為各各自的空空白值（6）計(jì)算X=(A-B/C-D)××S/m×f××100/1000式中：X———樣品中含含核黃素素的量,mg/100gA———樣品管熒熒光值B———樣品管空空白熒光光值C———標(biāo)準(zhǔn)管熒熒光值D———標(biāo)準(zhǔn)管空空白管熒熒光值f———稀釋倍數(shù)數(shù)m———樣品的質(zhì)質(zhì)量，gS———標(biāo)準(zhǔn)管中中核黃素素的含量量,μg100/1000———將樣品中中核黃素素量由μg/g折算mg/100g的折算系系數(shù)三、維生生素C的測(cè)定維生素C是一種己己糖醛基基酸，有有抗壞血血病的作作用，所所以又稱稱作抗壞壞血酸。。維生素素C廣泛存在在于植物物組織中中，新鮮鮮的水果果、蔬菜菜，特別別是棗、、辣椒、、苦瓜、、柿子葉葉、獼猴猴桃、柑柑桔等食食品中含含量尤豐豐富。維生素C具有較強(qiáng)強(qiáng)的還原原性，對(duì)對(duì)光敏感感，氧化化后的產(chǎn)產(chǎn)物稱為為脫氫抗抗壞血酸酸，仍然然具有生生理活性性。進(jìn)一一步水解解則生成成2，3-二酮古樂樂糖酸，，失去生生理作用用。根據(jù)它具具有的還還原性質(zhì)質(zhì)可以測(cè)測(cè)定維生生素C的含量。。常用的的測(cè)定方方法有：：（1）2，6-二氯靛酚酚法（（還原原型VC）（2）2，4-二硝基苯苯肼法（（總總VC）（3）碘酸法法（4）碘量法（5）熒光分光光光度法（一）2，6—二氯靛酚滴定定法1、原理還原型抗壞血血酸可以還原原染料2，6-二氯靛酚。該該染料在酸性性溶液中呈粉粉紅色(在中性或堿性性溶液中呈藍(lán)藍(lán)色)，被還原后顏顏色消失。還原型抗壞血血酸還原染料料后，本身被被氧化成脫氫氫抗壞血酸。。在沒有雜質(zhì)質(zhì)干擾時(shí)，一一定量的樣品品提取液還原原標(biāo)準(zhǔn)染料液液的量，與樣樣品中抗壞血血酸含量成正正比。2、試劑1%草酸酸溶溶液液：：稱稱取取10g草酸酸，，加加水水至至1000mL；2%草酸酸溶溶液液：：稱稱20g草酸酸，，加加水水至至1000mL；維生生素素C標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)液液：：準(zhǔn)準(zhǔn)確確稱稱20mgVC溶于于1%草酸酸中中，，并并稀稀釋釋至至100mL，吸吸5mL于50mL容量量瓶瓶中中，，加加入入1%草酸酸至至刻刻度度，，此此溶溶液液每每毫毫升升含含有有0.02mgVC；0.02%2，6-二氯氯靛靛酚酚溶溶液液：：稱稱取取2，6-二氯氯靛靛酚酚50mg，溶溶于于200mL含有有52mg碳酸酸氫氫鈉鈉的的熱熱水水中中，，冷冷卻卻后后，，稀稀釋釋至至250mL，過過濾濾于于棕棕色色瓶瓶中中，，貯貯存存于于冰冰箱箱內(nèi)內(nèi)，，應(yīng)應(yīng)用用過過程程中中每每星星期期標(biāo)標(biāo)定定一一次次。。3、樣樣品品測(cè)測(cè)定定提取?。海悍Q稱樣樣50g→→加2%草酸酸100mL→→入搗搗碎碎機(jī)機(jī)中中處處理理→→過過濾濾→→顏顏色色若若深深可可加加白白陶陶土土滴定定：：吸吸5mL樣液液→→于于三三角角瓶瓶→→用用染染料料滴滴定定至至粉粉紅紅色色→→15秒內(nèi)內(nèi)不不褪褪色色計(jì)算算：：VC（mg/100g）=（V××T）/W××100V-消耗耗染染料料體體積積（（mL）T-1mL染料料所所能能氧氧化化維維生生素素C的毫毫克克數(shù)數(shù)W-滴定定時(shí)時(shí)所所有有濾濾液液中中含含有有樣樣品品的的克克數(shù)數(shù)4、注意意事項(xiàng)項(xiàng)所有試試劑的的配制