DNA的純化與回收

會(huì)計(jì)學(xué)1DNA的純化與回收實(shí)驗(yàn)原理

首先利用瓊脂糖凝膠電泳DNA片段，分離目的條帶DNA，然后紫外光下切割含目的DNA條帶的膠塊，利用膠回收試劑盒回收純化DNA片段。

試劑盒的膠回收柱采用特殊硅基質(zhì)材料，具有在高鹽、低pH下吸附DNA，低鹽、高pH下釋放DNA的性質(zhì)。配備設(shè)計(jì)獨(dú)特的離心吸附柱式結(jié)構(gòu)，使用常規(guī)臺(tái)式高速離心機(jī)，可以高效回收核酸片段。第1頁/共8頁實(shí)驗(yàn)原理第2頁/共8頁實(shí)驗(yàn)試劑、材料、儀器溶液A（

Buffer）：溶解膠塊、增加洗脫柱對(duì)核酸的結(jié)合活性1溶液B（異丙醇）：增強(qiáng)DNA和柱子的吸附力2溶液C（

Washsolution）:洗掉柱子里除核酸以外的雜質(zhì)3溶液D（TE）:溶解DNA，把DNA從柱子上洗脫下來45自備材料：待分離的DNA、水浴鍋、小型高速離心機(jī)、電泳儀、電泳槽第3頁/共8頁實(shí)驗(yàn)步驟在紫外燈下切分含DNA的瓊脂糖塊，盡可能除去多余的瓊脂糖．放入1.5ml離心管中，稱重。1根據(jù)膠塊的質(zhì)量和濃度，按每100mg瓊脂糖膠加入300μl

的比例加入溶液A（本實(shí)驗(yàn)加400ul）。2將離心管置55℃-60℃水浴10分鐘，使瓊脂糖塊完全溶化，期間振蕩助溶2-3次。3加入50ul的溶液B，振蕩混勻。（若混勻后溶液變成粉紅色，則需加大溶液B的量至變到橙黃色或無色）4將全部溶液置于離心柱中，靜置2分鐘，12000rmp離心30s，若一次加不完可分兩次離心。5第4頁/共8頁實(shí)驗(yàn)步驟倒掉收集管中的液體．加入500ul溶液C于離心柱中，12000rmp離心30s。倒掉收集管中的液體，將吸附柱放入同一個(gè)收集管中。6重復(fù)步驟6一次。712000rmp再離心1min，甩干剩余液體以除去殘余酒精。將離心柱置于新的離心管中，室溫靜置5min，使乙醇揮發(fā)殆盡。8在吸附膜中加入20ul，50℃預(yù)熱的溶液D,室溫靜置2min。12000rmp離心2min，將所得的DNA溶液置于-20℃保存或用于后續(xù)試驗(yàn)。9瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)回收產(chǎn)物。10第5頁/共8頁注意事項(xiàng)切膠時(shí)應(yīng)快速操作，在紫外燈下時(shí)間長(zhǎng)容易傷害到眼睛；溴化乙錠染色后的DNA易受紫外光破壞，故盡量放置于暗室，切帶時(shí)應(yīng)使用長(zhǎng)波長(zhǎng)紫外燈，切膠時(shí)間盡量短。膠塊一定要充分融化，否則將會(huì)嚴(yán)重影響