中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色

中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色檢查的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）實(shí)驗(yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期細(xì)胞室中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色********年**月**日【目的】指導(dǎo)中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色檢查?！驹揝OP變動(dòng)程序】本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動(dòng)可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、質(zhì)控主管、科主任。【用途】1） 鑒別白血?。ǖ停┖桶籽樱ǜ撸┓磻?yīng)。2） 鑒別淋巴瘤（高）和何杰金病。3） 鑒別細(xì)菌性感染（高）與病毒性感染?！救旧怼炕|(zhì)中奸甘油磷酸鈉在堿性磷酸酶與觸媒劑鎂離子的存在下，水解成磷酸鈉與甘油，磷酸鈉再與氯化鈣結(jié)合成不溶解的磷酸鈣，再與硝酸鉆形成磷酸鉆，最后與硫化銨成為黑色的硫化鉆沉淀?！痉植肌垦?xì)胞的堿性磷酸酶（簡稱“堿酶”）活性，主要見于成熟的中性粒細(xì)胞（故稱NAP），定位于胞漿中。但當(dāng)堿酶的活性極強(qiáng)時(shí)，由于擴(kuò)散作用?？墒购谏恋碚谏w于胞核上。其他細(xì)胞系均為陰性反應(yīng)?！驹噭┡渲谩?.作用液3%甘油磷酸鈉10ml2%巴比妥鈉水溶液10ml蒸餾水20ml2%氯化鈣20ml2%硫酸鎂2mlPH9.2-9.5為適當(dāng)。2%硝酸鉆（冰箱保存可用1—2個(gè)月）。1%硫化銨（用時(shí)新配，每50ml分裝1瓶，冰箱保存）。0.5%伊紅、1%藏紅或2%甲綠溶液?！救旧襟E】a） 新鮮干燥的涂片固定于95%酒精中10分鐘。b） 水洗數(shù)次，晾干。c） 加入37°C作用液中，孵育4—6小時(shí)（作用液事先預(yù)溫30分鐘）。d） 自來水緩緩沖洗數(shù)次，待干。e） 2%硝酸鉆5分鐘。f） 水洗，待干。g） 1%硫化銨5分鐘（此液只能用4小時(shí)）。h） 自來水沖洗，再用蒸餾水涮洗，待干。i） 0.5%伊紅復(fù)染3分鐘或2%甲綠復(fù)染10分鐘。j） 水洗，晾干，鏡檢?！緦φ諛颖尽窟x擇已知酶活性強(qiáng)的標(biāo)本與被檢標(biāo)本同時(shí)染色，如所染陽性樣本未呈現(xiàn)應(yīng)有的陽性反應(yīng)，說明染色技術(shù)有問題?！窘Y(jié)果判斷】陽性顆粒呈棕黑色（與過氧化酶陽性顆粒相似，但粒小色淡），定位于成熟中性粒細(xì)胞胞漿內(nèi)。計(jì)數(shù)方法，按堿酶活性強(qiáng)弱，分為5級(jí)。0級(jí) 胞漿呈原色，無顆粒。I級(jí) 胞漿呈淺棕色和淺灰色，小顆粒占胞漿面積25—50%II級(jí) 胞漿呈棕色片狀沉淀，小到中等顆粒約占胞漿面積的50—75%。III級(jí) 胞漿充滿棕黑色沉淀，分布均勻，中到大顆粒占胞漿面積的75—100%。W級(jí) 胞漿充滿深黑色致密的團(tuán)塊狀沉淀，甚至遮蓋胞核，中到大顆粒占胞漿面積的100%每例的血片，均計(jì)數(shù)100個(gè)中性粒細(xì)胞，求出堿性磷酸酶陽性細(xì)胞的百分比（陽性率），并按堿酶活性的強(qiáng)弱不同，求得陽性指數(shù)（積分）。【臨床意義】正常人：中性粒細(xì)胞的堿性磷酸酶活性較弱，陽性率為50%左右（20—80%），陽性強(qiáng)度多為+?++，積分為80左右（60—100）。炎癥感染：各種化膿性感染，中性粒細(xì)胞的堿性磷酸酶活性顯著增加。病毒感染，則變化較小。白血病樣反應(yīng)：堿酶活性增高最顯著，陽性率為50—100%。陽性強(qiáng)度全部為+++或++++，積分為200左右（80—380）。白血病1） 粒細(xì)胞性：急性、亞急性、慢性白血病和綠色瘤皆劇減，慢性之積分可降為0。接受治療緩解時(shí)可恢復(fù)正常，復(fù)發(fā)時(shí)可再度降低。2） 單核細(xì)胞：血涂片的中性粒細(xì)胞的堿性磷酸酶活性降低（積分多為0）。3） 淋巴細(xì)胞性：急性白血病、淋巴肉瘤、中性粒細(xì)胞的堿性磷酸酶活性增強(qiáng)。貧血：各種貧血，其中性粒細(xì)胞的堿性磷酸酶的活性皆增高，尤以再生障礙性貧血最顯著。其他疾患：如多發(fā)性骨髓瘤、原神經(jīng)細(xì)胞瘤、風(fēng)濕熱、糖尿病、真性紅細(xì)胞增多癥，以及外科手術(shù)后，中性粒細(xì)胞的堿性磷酸酶活性都有所增高?！咀⒁馐马?xiàng)】含有奸甘油磷酸鈉的基質(zhì)作用液必須新鮮配置，置冰箱中待用，兩天內(nèi)有效。作用液的PH值，必須在9.4左右（以1N或0.2mol/LNaOH糾正）。每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)同時(shí)作陽性標(biāo)本為對照。中性粒細(xì)胞的堿性磷酸酶活性在不同狀態(tài)下的改變：年齡：1歲以下的幼兒較高，60歲以上的老人較低。性別：女性較高。時(shí)間：清晨到中午逐漸增高，到下午6時(shí)以后又開始降低。當(dāng)垂體、腎上腺皮質(zhì)