倍之速領(lǐng)跑糖型分析快速試劑盒

5倍之速，領(lǐng)跑糖型分析

——快速糖標(biāo)記及分析試劑盒2017.03Asn297處有一個(gè)N-糖基化位點(diǎn)其變化取決于宿主細(xì)胞和表達(dá)條件結(jié)構(gòu)多樣性:Fuc,Gal,Neu5AC,GlcNAc,Man糖基化會(huì)影素:生物活性理化特性ADCC和CDC效應(yīng)IgG糖基化分析對(duì)其重要的研究領(lǐng)域:克隆篩選產(chǎn)品表征批量釋放研究IgG糖基化的意義Scanlanetal,PNAS105(2008)4081重組蛋白藥的生產(chǎn)過(guò)程過(guò)程開(kāi)發(fā)表征研究及驗(yàn)證細(xì)胞轉(zhuǎn)染/克隆篩選細(xì)胞培養(yǎng)克隆生產(chǎn)/生物反應(yīng)器

純化糖在細(xì)胞功能中具有特殊作用:巖藻糖:ADCC效應(yīng)N乙酰葡萄糖:ADCC&CDC效應(yīng)唾液酸:炎癥,ADCC效應(yīng),半衰期甘露糖:ADCC效應(yīng)質(zhì)量源于設(shè)計(jì)(QbD)了解糖基與功能間的關(guān)系(例如核心巖藻糖基化vsADCC)選擇正確糖基化的細(xì)胞珠恰當(dāng)?shù)奶欠治龇椒纱_保產(chǎn)品具有正確的糖基化及活性

選擇合適的糖表征分析方法的重要性挑戰(zhàn):復(fù)雜性;結(jié)構(gòu)多樣性;無(wú)發(fā)光基團(tuán);大部分糖不帶電分析方法:HILIC色譜液質(zhì)聯(lián)用（LC-MS）毛細(xì)管電泳(CE)高壓液相色譜(HPLC)離子交換色譜正相色譜糖分析方法的選擇分離時(shí)間長(zhǎng)分析過(guò)程復(fù)雜數(shù)據(jù)分析&糖型鑒定糖基分析和鑒定時(shí)間太長(zhǎng)！生物制藥工業(yè)中糖分析面臨的挑戰(zhàn)貨號(hào):B94499PTO糖分離專用膠磁珠GU參照品IgG標(biāo)準(zhǔn)品麥芽糖糊精標(biāo)準(zhǔn)品糖基釋放所需試劑

單管磁力架（0.2mL離心管）還包括預(yù)裝有熔融石英毛細(xì)管的卡盒試劑盒包括：SCIEX快速糖標(biāo)記及分析試劑盒不含：氰基硼氫化鈉和糖苷酶AndrasGuttman博士世界頂級(jí)專家開(kāi)發(fā)的分析技術(shù)背景簡(jiǎn)介AndrasGuttman具有MTA-PELendulet糖組學(xué)方法轉(zhuǎn)移研究領(lǐng)域的教授職位，并領(lǐng)導(dǎo)著潘諾尼亞大學(xué)（匈牙利）生物分離學(xué)科的HorváthCsaba實(shí)驗(yàn)室。

他的工作重點(diǎn)是研究生物醫(yī)學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)及生物醫(yī)藥相關(guān)領(lǐng)域的基于毛細(xì)管電泳及CESI-MS技術(shù)的糖組學(xué)及糖蛋白組學(xué)分析。Guttman教授發(fā)表過(guò)290多篇SCI文章,寫過(guò)35本專業(yè)書的章節(jié),編輯過(guò)4本教材并持有23項(xiàng)專利。

他是多個(gè)國(guó)際研究組織的成員，十多個(gè)科學(xué)期刊的編委，個(gè)人獲得過(guò)眾多獎(jiǎng)項(xiàng)并被匈牙利科學(xué)院的成員所認(rèn)可。這種快速糖分析技術(shù)由于創(chuàng)新性地結(jié)合了磁珠法，加快了樣品前處理速度而榮獲2016生物工藝國(guó)際大會(huì)（BPI）“最佳技術(shù)應(yīng)用—分析”獎(jiǎng)。使用創(chuàng)新的磁珠輔助的樣品處理方法，用96孔板1小時(shí)內(nèi)最多可標(biāo)記96個(gè)樣品，而且不需要任何離心操作。超速糖分析：使用配有激光檢測(cè)器的PA800Plus生物制藥分析系統(tǒng)，對(duì)熒光標(biāo)記的糖進(jìn)行分離，每個(gè)樣品只需數(shù)分鐘。如待分析樣品數(shù)量少，可使用試劑盒中配備的單管磁力架手動(dòng)完成前處理。同時(shí)開(kāi)發(fā)了整合BiomekFXP自動(dòng)化工作站對(duì)大量IgG樣品進(jìn)行前處理的方案。該方案也適用于其他品牌的自動(dòng)化產(chǎn)品?？焖偬菢?biāo)記及分離試劑盒的特點(diǎn)APTS=8-AminoPyrene-1,3,6-TriSulfonicAcid使樣品帶上電荷&熒光簡(jiǎn)單&高效一步還原-胺化熒光標(biāo)記效率可達(dá)90%以上不選擇性標(biāo)記均一定量分析只標(biāo)記在還原末端(每個(gè)糖基連接一個(gè)APTS)高靈敏度激光檢測(cè)器(激發(fā)光波長(zhǎng)488nm/發(fā)射光波長(zhǎng)520nm)CE-LIF分析的帶電荷及熒光情況APTS標(biāo)記N-糖基0.002.004.006.008.00Time(min)1.02.0RFUC)GluNAc(β1→4)nB)Glu(β1→4)nA)Glu(α1→4)n1234567891011234561123456APTS基于電荷/體積的毛細(xì)管電泳分離（CZE）

實(shí)驗(yàn)步驟時(shí)間(分鐘)平行步驟準(zhǔn)備磁珠&加入樣品2準(zhǔn)備蛋白變性的溶液樣品的變性9準(zhǔn)備蛋白變性的溶液PNGase酶切(A)20準(zhǔn)備標(biāo)記試劑糖的捕獲(B)2APTS標(biāo)記(C)20清洗過(guò)量的APTS(D)6水洗(E)160MinsN-糖標(biāo)記前處理只需60分鐘!CE-LIF糖基分析的快速樣品前處理IgG的N-糖經(jīng)糖苷酶釋放后用APTS標(biāo)記

CE-LIF超快速、超高分辨率的糖分析快速分離后實(shí)時(shí)進(jìn)行糖型鑒定...只有SCIEX毛細(xì)管電泳儀可提供精準(zhǔn)的溫控系統(tǒng)可使GU值的重復(fù)性得到嚴(yán)格控制預(yù)裝好毛細(xì)管的卡盒（具有液體溫控系統(tǒng)）世界頂級(jí)儀器上開(kāi)發(fā)的分析技術(shù)CESI8000Plus高效毛細(xì)管電泳和電噴霧離子化系統(tǒng)(w/LIF)全配置的PA800Plus

生物制藥分析系統(tǒng)?DB7.7110.0188.789.13FA2BG2S2基于GU數(shù)據(jù)庫(kù)的糖結(jié)構(gòu)解析IgG糖基結(jié)構(gòu)及對(duì)應(yīng)的GU值糖基結(jié)構(gòu)及名稱縮寫不同溫度下相同結(jié)構(gòu)的糖遷移行為分離溫度的重要性20oC50oCA.Guttman,M.Kerekgyarto,G.Jarvas,Anal.Chem87(2015)11630-11634.溫度梯度下毛細(xì)管電泳對(duì)糖的分離圖M.SzigetiandA.Guttman,Anal.Chem89(2017)InPress實(shí)時(shí)糖型鑒定與32karat10.0版本軟件兼容（win7）可從SCIEX網(wǎng)站下載安裝軟件及使用說(shuō)明用戶可自行安裝具有編輯功能，可添加新的糖基結(jié)構(gòu)糖型數(shù)據(jù)庫(kù)專為32Karat軟件開(kāi)發(fā)的GU數(shù)據(jù)庫(kù)

快速糖型鑒定報(bào)告：糖基分離和鑒定信息

快速糖型鑒定報(bào)告：序列中多個(gè)樣品糖基鑒定總結(jié)

主要糖基分析的RSD小于3%快速糖分析的重現(xiàn)性–校準(zhǔn)峰面積（CorrectedArea）5分鐘完成糖基鑒定HILIC：親水作用色譜基于液-液分配的色譜，分析物按照極性增大的順序依次洗脫大多數(shù)液相柱生產(chǎn)商都生產(chǎn)HILIC柱HILIC與RPLC洗脫順相反HILIC分析的關(guān)鍵是保持固定相表面的薄水層來(lái)提供分配色譜。樣品基質(zhì)會(huì)干擾薄水層的分配而引起:洗脫時(shí)間變化峰型變差，損失分辨率破壞相穩(wěn)定:需要長(zhǎng)平衡時(shí)間，柱子壽命變短推薦使用固相萃?。⊿PE）對(duì)樣品進(jìn)行前處理清洗，可以減少這些影響。HILIC色譜分析法進(jìn)行糖基分析樣品前處理只需1小時(shí)快速分離只需數(shù)分鐘高分辨分離&自動(dòng)糖型鑒定

傳統(tǒng)方法獲得高分辨的糖分離數(shù)據(jù)需要較長(zhǎng)的時(shí)間和極大的耐心SCIEX快速糖分析：速度是HILIC的5倍HILIC高效液相

傳統(tǒng)毛細(xì)管電泳SCIEX快速糖分析樣品前處理30分鐘到24小時(shí)4小時(shí)1小時(shí)分離時(shí)間17到45分鐘15到20分鐘5分鐘實(shí)時(shí)糖型鑒定——快速糖標(biāo)記及分析0hrs24hrs12hrsHILIC5個(gè)樣品的分析時(shí)間Rapifluor45–70mingradient-UPLC2-AA;2-AB2DaySampleprep樣品前處理分離分析Timetodootherthings100mingradient-LCSCIEX快速糖分析：速度是HILIC的5倍各種糖基分析方法的比較FastGlycanProzymeGlyQ?ThermoGlycanAssureUPLCHILICLC-HILIC分辨率速度成本效益自動(dòng)糖型鑒定沒(méi)有溫控沒(méi)有溫控系統(tǒng)實(shí)用性SCIEX公司N-CHO和FastGlycan兩種糖分析試劑盒的區(qū)別分辨率毛細(xì)管速度糖型鑒定N-CHO試劑盒需手動(dòng)安裝中性涂層毛細(xì)管的卡盒手動(dòng)鑒定快速糖分析試劑盒預(yù)裝好裸管的卡盒自動(dòng)鑒定M.Szigeti,C.Lew,K.Roby,A.Guttman,FullyautomatedsamplepreparationwithultrafastN-glycosylationanalysisoftherapeuticantibodies,JALA21(2016)281-286槍頭盒蓋:減少乙腈蒸發(fā)96孔板:用于懸浮的96孔板疊加處樣品盤:PA800Plus樣品瓶96孔板振蕩器:孵育及混勻槍頭盒:加少量試劑試劑槽:乙腈和磁珠置于磁力架上的樣品盤:樣品前處理槍頭盒(P1000):加大量試劑樣品盤(24孔):單抗樣品試劑盤(24孔):糖苷酶和標(biāo)記試劑全自動(dòng)化工作站

12341234CE-LIF超快速IgG糖基分析

RawData

Shown.分離時(shí)間長(zhǎng)快速的分離，單針循環(huán)時(shí)間短分析過(guò)程復(fù)雜快速樣品前處理預(yù)編輯的分離程序數(shù)據(jù)分析&糖型鑒定糖數(shù)據(jù)庫(kù)提供自動(dòng)化糖型鑒定糖基分析和鑒定時(shí)間太長(zhǎng)！生物制藥工業(yè)中糖分析面臨的挑戰(zhàn)價(jià)值定位：與HILIC相比,SCIEX的快速糖分析速度是其5倍，而且可以自動(dòng)進(jìn)行糖結(jié)構(gòu)鑒定，成本也只需HILIC的25%。更短的時(shí)間更優(yōu)的數(shù)據(jù)分辨率更高：分離和鑒