第四章色譜法(4學(xué)時(shí))

第四章色譜法Chromatography《現(xiàn)代表征技術(shù)》第四章色譜法4.1色譜分析法簡介4.2色譜圖及色譜常用術(shù)語4.3色譜法的基本理論4.4色譜定性和定量分析4.5氣相色譜法（了解）4.6高效液相色譜法（了解）4.1.1色譜法的產(chǎn)生和發(fā)展4.1.2

什么是色譜法4.1.3

色譜法分類4.1色譜分析法簡介1.色譜法的產(chǎn)生色譜法是一種分離技術(shù)俄國植物學(xué)家茨維特1906年創(chuàng)立4.1.1色譜法的產(chǎn)生和發(fā)展分離植物葉子中的色素時(shí)，將葉片的石油醚（飽和烴混合物）提取液倒入玻璃管中，柱中填充CaCO3粉末（有吸附能力)，用純石油醚洗脫（淋洗）。色素受兩種作用力影響一種是CaCO3吸附，使色素在柱中停滯下來一種是被石油醚溶解，使色素向下移動(dòng)各種色素結(jié)構(gòu)不同，受兩種作用力大小不同，經(jīng)一段時(shí)間洗脫后，色素在柱子上分開，形成了各種顏色的譜帶，這種分離方法稱為色譜法。Tsweet的實(shí)驗(yàn)2.色譜法的發(fā)展1930年代初：R.Kuhn把M.Tswett的方法用于類胡蘿卜素的分離，從此色譜法得以廣泛應(yīng)用。1935年：Adams和Holmes第一次用苯酚和甲醛合成了人工有機(jī)離子交換劑，能交換陽離子和有機(jī)氫離子。后來又合成了陰離子交換劑，既可用于離子交換，又用于色譜分離——即現(xiàn)時(shí)流行的離子交換色譜法。至1950年此方法已成型。4.1.1色譜法的產(chǎn)生和發(fā)展1938年：Izmailov等人將糊狀A(yù)l2O3漿液在玻璃板上鋪成均勻薄層，用于分離植物中的藥用成分，即今日用的薄層色譜。（用于薄層的材料已發(fā)展至多種：如硅酸、聚酰胺等）。1941年：Martin和Synge設(shè)計(jì)了兩套萃取儀器，將蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物的乙酰化氨基酸由水溶液中提取到有機(jī)相而進(jìn)行色譜分離。不久又研究了顆粒硅膠柱中三種衍生化氨基酸混合物在水相和有機(jī)相(氯仿)之間的不等分配，獲得成功，使三個(gè)組分得到良好的分離,為液－液分配色譜奠定了基礎(chǔ)。1944年：Consden，Gordon和Martin將纖維（濾紙）作固定載體，以水吸附在濾紙上作溶劑，根據(jù)組分在兩相中溶解度不同，即滲透率（速率）不同而使各組分彼此分離，稱之為紙色譜法。1952年：Martin和Synge又研究成功了在惰性載體表面涂漬一層均勻的有機(jī)化合物膜作為固定相，并以氣體為流動(dòng)相，用來分離脂肪酸混合物——即今日的氣－液色譜。1954年：Ray提出以熱導(dǎo)池作為氣相色譜的檢測(cè)器，使氣相色譜應(yīng)用更加廣泛。1957年：Golay首先應(yīng)用小口徑毛細(xì)管柱進(jìn)行色譜分離實(shí)驗(yàn)，結(jié)果證明了它具有高分辨率和高效能——即為今日的高效氣相色譜法。1959年：Porath和Flodin提出了使用具有化學(xué)惰性的多孔凝膠作固定相的空間排阻色譜法，根據(jù)固定相孔隙尺寸不同而具有不同的選擇性滲透能力，從而對(duì)分子量分布不同的樣品實(shí)現(xiàn)了分離?？捎糜跍y(cè)定聚合物的相對(duì)分子質(zhì)量的的分布。我國情況我國在色譜分析領(lǐng)域的研究起于1954年中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所首先開發(fā)經(jīng)過幾十年的努力，我國色譜基礎(chǔ)理論研究和應(yīng)用技術(shù)研究方面具有特色，居世界領(lǐng)先行列。隨著被分離樣品種類的增多，該方法廣泛地用于無色物質(zhì)的分離，“色譜”名稱中的“色”失去了原有的意義，但“色譜”這一名稱沿用至今。1.色譜法混合物在流動(dòng)相的攜帶下通過色譜柱分離出幾種組分的方法。4.1.2什么是色譜法2.色譜法中共使用兩相固定相—固定不動(dòng)的相（如：CaCO3）固體吸附劑：CaCO3、Al2O3等液體固定相（載體+固定液——高沸點(diǎn)有機(jī)化合物，涂在載體上）流動(dòng)相—推動(dòng)混合物流動(dòng)的相（如：石油醚）氣體1952年產(chǎn)生GC，是色譜法一項(xiàng)革命性進(jìn)展液體流的速度慢，加壓，使其流快，1969年HPLC4.1.2什么是色譜法3.色譜分離法特征一定是先分離、后分析一定具有兩相：固定相和流動(dòng)相分離：利用組分在兩相中分配系數(shù)或吸附能力的差異進(jìn)行分離4.1.2什么是色譜法4.色譜法特點(diǎn)：（1）分離效能高（2）靈敏度高（3）分析速度快（4）應(yīng)用范圍廣4.1.2什么是色譜法1、按兩相狀態(tài)分類2、按操作形式分類3、按分離原理分類4.1.3色譜法分類（1）氣相色譜（2）液相色譜（3）超臨界液體色譜（1）柱色（2）紙色譜（3）薄層色譜（1）吸附色譜（2）分配色譜（3）離子交換色譜（4）凝膠色譜第四章色譜法4.1色譜分析法簡介4.2色譜圖及色譜常用術(shù)語4.3色譜法的基本理論4.4色譜定性和定量分析4.5氣相色譜法4.6高效液相色譜法4.2.1

色譜圖4.2.2

色譜常用術(shù)語4.2.3

根據(jù)色譜圖可得到的重要信息4.2色譜圖及色譜常用術(shù)語4.2.1

色譜圖混合物樣品（A+B）→色譜柱中分離→檢測(cè)器→記錄下來。組分從色譜柱流出時(shí)，各個(gè)組分在檢測(cè)器上所產(chǎn)生的信號(hào)隨時(shí)間變化，所形成的曲線叫色譜圖。記錄了各個(gè)組分流出色譜柱的情況，又叫色譜流出曲線1.基線在實(shí)驗(yàn)操作條件下，色譜柱后沒有組分流出的曲線叫基線。穩(wěn)定情況下是一條直線基線上下波動(dòng)稱為噪音4.2.1

色譜常用術(shù)語2.色譜峰的高度（峰高，h

）色譜峰最高點(diǎn)與基線之間的距離可用mm、mV、mA表示峰高低與組分濃度有關(guān)，峰越高越窄越好

h3.色譜峰的寬度(區(qū)域?qū)挾?標(biāo)準(zhǔn)偏差—σ峰高0.607倍處的色譜峰寬的一半。峰底寬Wb—色譜峰兩側(cè)拐點(diǎn)所作切線在基線上的距離Wb

=4σ半峰寬W1/2—峰高一半處色譜峰的寬度

W1/2

=2.354σWb=4σW1/2

=0.589Wb

WbσW1/2

4.色譜峰面積（A）色譜峰與峰底所圍的面積。對(duì)于對(duì)稱的色譜峰A=1.065hW1/2對(duì)于非對(duì)稱的色譜峰A=1.065h(W0.15+W0.85)/2

5.死時(shí)間t0不被固定相吸附或溶解的組分流經(jīng)色譜柱所需時(shí)間從進(jìn)樣開始到柱后出現(xiàn)峰最大值所需時(shí)間氣相色譜—惰性氣體（空氣、甲烷等）流出色譜柱所需時(shí)間t06.保留時(shí)間tR

組分流經(jīng)色譜柱時(shí)所需時(shí)間。進(jìn)樣開始到柱后出現(xiàn)最大值時(shí)所需的時(shí)間操作條件不變時(shí)，一種組分有一個(gè)tR定值定性參數(shù)7.調(diào)整保留時(shí)間t’R扣除了死時(shí)間的保留時(shí)間，又稱校正保留時(shí)間，實(shí)際保留時(shí)間。t’R=tR-t0體現(xiàn)的是組分在柱中被吸附或溶解的時(shí)間。t’R8.死體積V0不被固定相滯留的組分流經(jīng)色譜柱所消耗的流動(dòng)相體積稱死體積，色譜柱中載氣所占的體積。V0=t0F0F0---柱后出口處流動(dòng)相的體積流速mL/min9.保留體積VR

組分從進(jìn)樣開始到色譜柱后出現(xiàn)最大值時(shí)所需流動(dòng)相體積，組分通過色譜柱時(shí)所需流動(dòng)相體積VR=tRF010.調(diào)整保留體積V’R扣除了死體積的保留體積，真實(shí)的將待測(cè)組分從固定相中攜帶出柱子所需的流動(dòng)相體積。V’R=t’RF

011.相對(duì)保留值γi,s

在相同操作條件下，組分i對(duì)參比組分s調(diào)整保留值之比色譜保留值——定性的依據(jù)6.保留時(shí)間tR7.調(diào)整保留時(shí)間t’R

9.保留體積VR10.調(diào)整保留體積V’R

11.相對(duì)保留值γi

,s組分在色譜柱中停留的數(shù)值，可用時(shí)間t和所消耗流動(dòng)相的體積來表示。組分在固定相中溶解性能越好，或固定相的吸附性越強(qiáng)，在柱中滯留的時(shí)間越長，消耗的流動(dòng)相體積越大固定相、流動(dòng)相固定，條件一定時(shí)，組分的保留值是個(gè)定值。V0、t0與被測(cè)組分無關(guān)，因而V’R.t’R更合理地反映了物質(zhì)在柱中的保留情況。4.2.3根據(jù)色譜圖可得到的重要信息（1）色譜峰個(gè)數(shù)—判斷樣品中所含組分的最少個(gè)數(shù)（2）色譜峰的位置即保留值—進(jìn)行定性分析（3）色譜峰的h、A

—進(jìn)行定量分析（4）色譜峰的位置及峰的寬度—可評(píng)價(jià)色譜柱效（分離效能）（5）色譜峰兩峰間的距離—可評(píng)價(jià)固定相或流動(dòng)相選擇是否合適第四章色譜法4.1色譜分析法簡介4.2色譜圖及色譜常用術(shù)語4.3色譜法的基本理論4.4色譜定性和定量分析4.5氣相色譜法4.6高效液相色譜法色譜分析目的是將樣品中各組分彼此分離對(duì)樣品中的組分進(jìn)行定性、定量分析組分達(dá)到完全分離，兩峰間的距離須足夠遠(yuǎn)兩峰間的距離是由組分在兩相間的分配系數(shù)K決定，即與色譜過程的熱力學(xué)性質(zhì)有關(guān)。兩峰間雖有一定距離，但若每個(gè)峰都很寬，彼此重疊，則峰不能分開峰的寬或窄是由組分在色譜柱中傳質(zhì)和擴(kuò)散行為決定，即與色譜過程的動(dòng)力學(xué)性質(zhì)有關(guān)4.3色譜法的基本理論4.3.1

分配系數(shù)和分配比4.3.2

塔板理論4.3.3

速率理論—范第姆特方程4.3.4

分離度4.3.5

基本色譜分離方程4.3色譜法的基本理論在一定溫度下，組分在流動(dòng)相和固定相之間所達(dá)到的平衡叫分配平衡，組分在兩相中的分配行為常采用分配系數(shù)K和分配比k來表示。

4.3.1分配系數(shù)和分配比K僅與兩個(gè)變量相關(guān)：固定相、溫度TK與兩相體積、管柱特性、使用儀器無關(guān)=cs/cm組分在固定相中的濃度組分在流動(dòng)相中的濃度K=1.分配系數(shù)K(濃度分配系數(shù))4.3.1分配系數(shù)和分配比Cs和cm----組分在固定相和流動(dòng)相中的濃度2.分配比k(容量因子，容量比)組分在固定相中的質(zhì)量組分在流動(dòng)相中的質(zhì)量=KVs/Vm

k=

=ms/mm

k隨T、固定相、流動(dòng)相的體積變化而變化k越大，組分在固定相中質(zhì)量越多，tR越長K、k越大，組分在固定相中tR就越長4.3.1分配系數(shù)和分配比ms和mm----組分在固定相和流動(dòng)相中的質(zhì)量Vs和Vm----柱中固定相和流動(dòng)相中的體積3.k與tR之間的關(guān)系k=t’R/t0=(tR-t0)/t0

k=V’R/V0=(VR-V0)/V04.3.1分配系數(shù)和分配比4.K及k與選擇因子α之間的關(guān)系4.3.1分配系數(shù)和分配比實(shí)際意義：α=1→K（B）=K（A）,t’R(B)=t’R(A)→A、B兩組分色譜峰重合→K或k相差越大，分離越好，→色譜分離先決條件：兩組分具有不同的K或k

α≠1（α>>1或α<<1）在50年代，色譜技術(shù)發(fā)展的初期，Martin等人把色譜分離過程比作分餾過程，并把分餾中的半經(jīng)驗(yàn)理論－塔板理論用于色譜分析法用精餾塔中塔板的概念來描述組分在兩相間的分配行為理論塔板數(shù)作為衡量柱效率的指標(biāo)4.3.2塔板理論（1）在柱內(nèi)一小段長度H內(nèi)，組分可在兩相間迅速達(dá)到平衡，H稱為理論塔板高度，n=L/H

（2）以GC為例，載氣進(jìn)入色譜柱不是連續(xù)進(jìn)行而是脈動(dòng)式，每次進(jìn)氣為一個(gè)塔板體積△V。（3）所有組分開始時(shí)存在于第0號(hào)塔板上，而且試樣沿軸（縱）向擴(kuò)散可忽略。（4）K在所有塔板上是常數(shù)，與組分在某一塔板上的量無關(guān)。1.基本假設(shè)4.3.2塔板理論（1）流出曲線及其方程設(shè)n=5,k=1,m=1（=ms+mm）2.塔板理論方程式4.3.2塔板理論（2）柱效評(píng)價(jià)（H,n）n與Wb

，W1/2

的關(guān)系n=L/H或H=L/n

L---色譜柱長度H---塔板高度n---塔板數(shù)目

H有效＝Ｌ／n有效

H理＝Ｌ／n理L固定，H越小，n越大，分離效果越好

H、n評(píng)價(jià)柱效

2.塔板理論方程式4.3.2塔板理論n有效=5.54(t’R/W1/2)2=16(t’R/Wb)2

n理=5.54(tR/W1/2)2

=16(tR/Wb)2

塔板理論的優(yōu)勢(shì)用熱力學(xué)觀點(diǎn)形象地描述了溶質(zhì)在色譜柱中的分配平衡和分離過程，導(dǎo)出流出曲線的數(shù)學(xué)模型，并成功解釋了流出曲線的形狀及濃度極大值的位置提出了計(jì)算理論塔板高度、塔板數(shù)的公式及評(píng)價(jià)柱效的方法，具有開創(chuàng)性塔板理論的缺點(diǎn)基本假設(shè)不完全符合柱內(nèi)實(shí)際發(fā)生的分離過程，未考慮各種動(dòng)力學(xué)因素對(duì)色譜柱內(nèi)傳質(zhì)過程的影響同一試樣進(jìn)入同一色譜柱，當(dāng)流動(dòng)相速度變化時(shí)，得到不同色譜圖；測(cè)得的n和H也不同。1956年，荷蘭學(xué)者范第姆特(VanDeomter)提出吸收了塔板理論中的H概念。并充分考慮了組分在兩相同的擴(kuò)散和傳質(zhì)過程，從而在動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)上較好地解釋了影響H的各種因素方程:u為流動(dòng)相線速度cm.s-1，線速度=L(柱長)/t01.理論模型---范第姆特方程

4.3.3速率理論提出了影響Ｈ的三項(xiàng)因素渦流擴(kuò)散項(xiàng)A,分子擴(kuò)散項(xiàng)B/u,傳質(zhì)阻力項(xiàng)Cu流動(dòng)相流速一定，當(dāng)Ａ、Ｂ、Ｃ最小時(shí)，Ｈ小，n最高，柱效高當(dāng)Ａ、Ｂ、Ｃ最大時(shí)，Ｈ大，n最小，柱效低氣相色譜

uDskkdDdkkuDdHfgpgp])1(32)1(01.0[2222222+++++=gl液相色譜HuGC（a）LC（b）GC（a）——u有一最低點(diǎn)u最佳；u小或u大，H都大LC（b）——u沒有最低點(diǎn)；u大，H增大不多，因此可用較高的流速，提高分析速度（4）流動(dòng)相線速度u對(duì)H的影響可測(cè)三種流速對(duì)應(yīng)的板高H，解三元一次方程，求出A、B、C即可求出u最佳和H最小。實(shí)際工作中，為縮小分析時(shí)間，可選略高u最佳的流速，常用２u最佳。BCACBCCBBACu最佳u最佳BAH2//+=++=++=最小CBu=最佳GC中最佳流速可通過實(shí)驗(yàn)和計(jì)算方法求得1.為什么提出分離度概念？柱效能色譜柱在分離過程中的分離效能，常用n，Ｈ來描述,

對(duì)單個(gè)組分,n越大，Ｈ越小，柱效越高對(duì)多個(gè)組分，n大，Ｈ小，幾個(gè)峰未必分開選擇性描述兩個(gè)相鄰組分在同一固定相中熱力學(xué)分布行為用r2,1相對(duì)保留值表示.r2,1越大，保留時(shí)間相差大，分離越好（但未考慮峰寬因素）4.3.4分離度4.3.4分離度R1.為什么提出分離度概念？兩峰距離近，峰形寬，嚴(yán)重重疊表示選擇性和柱效都很差兩峰距離拉開，但峰形寬表示選擇性好，但柱效低兩峰距離拉開，且峰形窄而對(duì)稱表示選擇性好且柱效高單獨(dú)用選擇性或柱效不能真實(shí)反映組分在色譜柱中分離情況，需引入一個(gè)綜合性指標(biāo)，其既能反映選擇性又能反映柱效4.3.4分離度R2.分離度（R）定義相鄰兩個(gè)峰的保留值之差與兩峰寬度平均值之比色譜柱的總分離效能指標(biāo)分子反映溶質(zhì)在兩相中分配行為對(duì)分離的影響是色譜分離的熱力學(xué)因素。分母反映動(dòng)態(tài)過程溶質(zhì)區(qū)帶的擴(kuò)寬對(duì)分離的影響是色譜分離的動(dòng)力學(xué)因素。兩溶質(zhì)保留時(shí)間相差越大，色譜峰越窄，分離越好Ｒ＜１.0兩峰有部分重疊Ｒ＝１.0分離程度達(dá)98%，能滿足分析要求Ｒ≥１.5兩個(gè)組分能完全分開1.基本色譜分離方程4.3.5基本色譜分離方程αα2.分離度與柱效能的關(guān)系4.3.5基本色譜分離方程柱效項(xiàng)塔板數(shù)決定，n越大，柱效越高分離越好２、分離度與選擇性的關(guān)系選擇性項(xiàng)r2,1越大，tR’２與t’R1

相差越大，分的越好4.3.5基本色譜分離方程3.分離度與柱容量的關(guān)系柱容量項(xiàng)k’大一些對(duì)分析有利太大，tR長柱容量合適，分的才好,一般1＜k’＜104.3.5基本色譜分離方程例題：在一定條件下，兩個(gè)組分的調(diào)整保留時(shí)間分別為85s和100s，要達(dá)到完全分離，即R=1.5。計(jì)算需要多少塊有效塔板。若填充柱的塔板高度為0.1cm，柱長是多少？解：r2,1=100/85=1.18

n有效=16R2[r2,1/(r2,1—1)]2

=16×1.52×(1.18/0.18)2

=1547（塊）

L有效=n有效·H有效=1547×0.1=155cm

即柱長為1.55米時(shí)，兩組分可以得到完全分離第四章色譜法4.1色譜分析法簡介4.2色譜圖及色譜常用術(shù)語4.3色譜法的基本理論4.4色譜定性和定量分析4.5氣相色譜法4.6高效液相色譜法4.4.1定性分析4.4.2定量分析4.4色譜定性和定量分析1.定性分析的任務(wù)

確定色譜圖上各個(gè)峰代表什么物質(zhì)4.4.1定性分析2.如何定性？（1）利用保留值與已知物對(duì)照定性I.利用純物質(zhì)或已知物質(zhì)保留時(shí)間定性II.利用峰高增量定性III.利用雙色譜系統(tǒng)定性（2）與其它分析儀器聯(lián)用進(jìn)行定性4.4.1定性分析2.如何定性？（1）利用保留值與已知物對(duì)照定性I.利用純物質(zhì)或已知物質(zhì)保留時(shí)間定性4.4.1定性分析在相同色譜條件下，將標(biāo)準(zhǔn)物和樣品分別進(jìn)樣，兩者保留值相同，可能為同一物質(zhì)此方法要求操作條件穩(wěn)定、一致，必須嚴(yán)格控制操作條件，尤其是流速2.如何定性？（1）利用保留值與已知物對(duì)照定性II.利用峰高增量定性若樣品復(fù)雜，流出峰距離太近，或操作條件不易控制，可將已知物加到樣品中，混合進(jìn)樣，若被測(cè)組分峰高增加了，則可能含該已知物。4.4.1定性分析2.如何定性？

(2)與其它分析儀器聯(lián)用的定性方法小型化的臺(tái)式色質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS；LC-MS）色譜-紅外光譜儀聯(lián)用儀；組分的結(jié)構(gòu)鑒定SampleSample

58901.0DEG/MINHEWLETTPACKARDHEWLETTPACKARD5972AMassSelectiveDetectorDCBA

ABCDGasChromatograph(GC)MassSpectrometer(MS)SeparationIdentificationBACD4.4.1定性分析

1.定量分析的依據(jù)氣相色譜定量分析是根據(jù)檢測(cè)器對(duì)溶質(zhì)產(chǎn)生的響應(yīng)信號(hào)與溶質(zhì)的量成正比的原理，通過色譜圖上的峰面積或峰高，計(jì)算樣品中溶質(zhì)的含量。mi=fiAi

mi=fihi

mi---被測(cè)組分i的質(zhì)量，fi---比例系數(shù)Ai、hi---被測(cè)組分的峰面積及峰高4.4.2定量分析

2.峰面積測(cè)量方法mi=fiAi

mi=fihi對(duì)稱色譜峰A=1.065×h×W1／2

不對(duì)稱色譜峰A=1.065×h（W0.15＋W0.85）/24.4.2定量分析3.定量校正因子mi=fiAi

mi=fihi色譜定量分析是基于峰面積與組分的量成正比關(guān)系但同一檢測(cè)器對(duì)不同物質(zhì)具有不同的響應(yīng)值，即不同物質(zhì)檢測(cè)器的靈敏度不同，相同的峰面積并不意味著有相等的量。定量校正因子：單位峰面積對(duì)應(yīng)組分的質(zhì)量。絕對(duì)定量校正因子fi=mi/Ai受操作條件影響較大，要嚴(yán)格控制色譜條件，不易準(zhǔn)確測(cè)定，沒有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，無法直接引用。相對(duì)定量校正因子fi’樣品中各組分的定量校正因子與標(biāo)準(zhǔn)物的定量校正因子之比。

用一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，把所有組分的A較正到標(biāo)準(zhǔn)物的A上，在同一標(biāo)準(zhǔn)上進(jìn)行比較計(jì)算，熱導(dǎo)檢測(cè)器常用苯作標(biāo)準(zhǔn)4.4.2定量分析相對(duì)定量校正因子fi相對(duì)質(zhì)量校正因子相對(duì)摩爾校正因子fi(M)凡文獻(xiàn)查得的校正因子都是指相對(duì)校正因子可用fM′,fm′分別表示摩爾和質(zhì)量校正因子4、定量方法

（1）歸一化法（2）內(nèi)標(biāo)法（3）外標(biāo)法4.4.2定量分析4.4.2定量分析4、定量方法（1）歸一化法把所有出峰組分的含量之和當(dāng)作100%的定量分析方法稱為歸一化法前提：試樣各組分都出峰若樣品中有幾個(gè)組分，每個(gè)組分的量分解為m1m2…mn

各組分含量總和為m，則組分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)Wi為

優(yōu)點(diǎn)：簡便、準(zhǔn)確、不需標(biāo)準(zhǔn)物，不必準(zhǔn)確稱量和準(zhǔn)確進(jìn)樣，操作條件稍有變化對(duì)結(jié)果影響較少。缺點(diǎn)：所有組分都出峰，并測(cè)所有組分的A和fi′4.定量分析

（2）內(nèi)標(biāo)法準(zhǔn)稱樣品m（含mi被測(cè)組分）+準(zhǔn)稱純物質(zhì)作內(nèi)標(biāo)物ms混合物→進(jìn)樣被測(cè)組分標(biāo)樣(內(nèi)標(biāo)物)4.4.2定量分析ssiisiAf′Af′mm=對(duì)內(nèi)標(biāo)物的要求：1）內(nèi)標(biāo)物應(yīng)是樣品中不存在的純物質(zhì)。2）內(nèi)標(biāo)物與被測(cè)物的峰盡量靠近，但又能完全分開，tR相差少。為簡便起見，求定量校正因子時(shí)，常以內(nèi)標(biāo)物本身作標(biāo)準(zhǔn)。fs

′=1.0內(nèi)標(biāo)法優(yōu)點(diǎn)定量準(zhǔn)確，操作條件不必嚴(yán)格控制，與進(jìn)樣量無關(guān)，被測(cè)組分和內(nèi)標(biāo)物出峰即可，適用于微量組分的測(cè)定，應(yīng)用廣泛。內(nèi)標(biāo)法缺點(diǎn)每次測(cè)定都要準(zhǔn)確稱量樣品和內(nèi)標(biāo)物（2）內(nèi)標(biāo)法

4.定量分析

（3）外標(biāo)法—標(biāo)準(zhǔn)曲線法適用于：樣品中各組分不能完全流出，又沒有合適內(nèi)標(biāo)時(shí)。4.4.2定量分析將待測(cè)組分的純物質(zhì)配制不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)系列，在相同操作條件下，定量進(jìn)樣，測(cè)各個(gè)峰的A或h，繪制A—C曲線或h—C曲線。CA(h)在完全相同條件下，測(cè)待測(cè)樣品，根據(jù)A待或h待，從曲線上查出待測(cè)組分含量。A(h)CA待C待優(yōu)點(diǎn)：操作簡單，計(jì)算方便，不用fi′缺點(diǎn)：要求準(zhǔn)確進(jìn)樣，操作條件穩(wěn)定。例題已知物質(zhì)A和B在一根30.00cm長的柱上的保留時(shí)間分別為16.40min和17.63