電化學(xué)發(fā)光測(cè)定血清總Ⅰ型前膠原氨基端前肽的分析性能評(píng)價(jià)

電化學(xué)發(fā)光測(cè)定血清總Ⅰ型前膠原氨基端前肽的分析性能評(píng)價(jià)甘潔民;繆應(yīng)新;張蓉;施泓【摘要】ObjectiveToevaluateautomatedelectrochemiluminescencesystemforassayofserumtotalN-terminalpropep-tideoftypeIcollagen(tP1NP)andestablishthereferencevalueinourlaboratory.MethodsSerumtP1NPwasmeasuredonElec-sys2010automatedanalyzer(Roche).Thebetween-runcoefficientofvariation(CV)wascalculatedwiththetestedvaluesofhighandlowlevercontrols.Thefunctionalsensitivitywasanalyzedwithaseriestestedresultsoflowleverserum.Theanalyticmeasure-mentrange(AMR)wasdeterminedwiththeresultsofmixedserum.ThereferencerangeofserumtP1NPinourlaboratorywases-tablishedwiththedetectedresultsof138normalsubjects.ResultsThebetween-runCVswere4.7%and2.4%.Thefunctionalsensitivitywas6.60ng/ml.AMRwas6.8~1020.2ng/ml.Thereferencerangewas17.8~55.8ng/ml.ConclusionTheECLIAmethodhasgoodperformancefordetectingtP1NPlevel.%目的：按美國(guó)病理家學(xué)會(huì)(CAP)的要I(tP1NP)的各項(xiàng)分析性220610d,138tP1NP，建立本實(shí)驗(yàn)室的參考范圍。結(jié)CV4.72.46.60ng/ml；分析驗(yàn)證測(cè)量范圍(AMR6.8~1020.2ng/mltP1NP17.8～55.8ml。結(jié)論用電化學(xué)發(fā)光免疫法測(cè)定血清I型前膠原氨基端前肽，靈敏度高，穩(wěn)定性好,本系統(tǒng)的各項(xiàng)性能符合CAP要求?！酒诳Q】《實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)》【年(卷),期】2014(000)004【總頁數(shù)】3頁(P389-391)【關(guān)鍵詞】血清I型前膠原氨基端前肽(tP1NP);電化學(xué)發(fā)光免疫;方法學(xué)評(píng)價(jià)【作者】甘潔民;繆應(yīng)新;張蓉;施泓【作者單位】復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院，上海200040;復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院，上海200040;復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院，上海200040;復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院，上海200040【正文語種】中文【中圖分類】R446.62Ⅰ型膠原是骨的重要蛋白，是骨有機(jī)質(zhì)的主要成分，約占骨基質(zhì)的90%，由兩條α1鏈及一條α2鏈構(gòu)成的異三聚體，其中編碼α1鏈基因?yàn)镃OLIA1，α2鏈為COLIA2，兩種多肽鏈以2：1合成。Ⅰ型前膠原氨基端前肽(N-terminalpropeptideoftypeⅠprocollagen，tP1NP)1tP1NPPICP(procollagentypeIC-terminalpropeptide,Ⅰ型前膠原羧基端前肽)，它們是沉集于基質(zhì)之前所釋放出的物質(zhì)，是各自從未成熟膠原釋放的(在Ⅰ型膠原合成增殖期)，兩者可反映Ⅰ型膠原形成速率。當(dāng)成骨細(xì)胞活性增強(qiáng)時(shí)，前膠原合成增多，tP1NP在血液中濃度增高[1]。目前國(guó)內(nèi)大多用酶聯(lián)免疫法測(cè)定，本文采用羅氏公司近幾年推出的產(chǎn)品測(cè)定血清tP1NP，并作初步的臨床評(píng)價(jià)。為了提高檢驗(yàn)質(zhì)量，國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織(ISO)頒布了《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力的專用要求》(ISO15189)作為醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的標(biāo)準(zhǔn)，要求申請(qǐng)認(rèn)可的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)和方法的主要分析性能進(jìn)行驗(yàn)證或確認(rèn)[2]，證實(shí)其能夠達(dá)到所要求的性能標(biāo)準(zhǔn)。另外美國(guó)病理家學(xué)會(huì)(CAP)也要求申請(qǐng)認(rèn)可的實(shí)驗(yàn)室，在開展某一檢測(cè)項(xiàng)目前，必須對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行方法學(xué)評(píng)價(jià)和建立本實(shí)驗(yàn)室的參考區(qū)間，因此本文對(duì)羅氏Elecsys2010系統(tǒng)進(jìn)行TP1NP檢測(cè)的方法學(xué)評(píng)價(jià)，并對(duì)138例健康體檢者進(jìn)行tP1NP的檢測(cè)，建立本實(shí)驗(yàn)室的參考范圍。對(duì)象對(duì)照組：13830～707068BMDT-score＞-2.5。疾病組：均系明確診斷為18712340～78BMDT-score＜-2.5；甲狀腺功能亢進(jìn)組:2235～70歲；腎功能不全組:22例，年齡40～69歲；腫瘤骨轉(zhuǎn)移組:9例，年齡42～68歲；變形性骨炎組：1例，年齡68歲；肝纖維化組：10例，年齡40～78歲。上述對(duì)象用含促凝劑的真空采血管采血3ml,3h內(nèi)離心，直接上機(jī)檢測(cè)。試劑和儀器電化學(xué)發(fā)光免疫法測(cè)定血清I(tP1NP)，儀器Elecsys2010方法電化學(xué)發(fā)光免疫法，其原理是雙抗體夾心法待測(cè)樣品中的血清I基端前肽(tP1NP)、釕標(biāo)記的單克隆tP1NP抗體和包被抗體的磁性微珠充分反應(yīng)，形成釕-抗體-抗原-抗體-微珠復(fù)合物。被磁性微珠捕獲的釕在磁鐵的作用下被吸附，並被激發(fā)電壓激發(fā)，發(fā)生電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，最后產(chǎn)生的光強(qiáng)度與釕的濃度呈線性關(guān)系，據(jù)此測(cè)出血清I型前膠原氨基端前肽(tP1NP)的含量。178227，濃度：75.4ng/ml)和高值(批號(hào)：178227，濃度：704ng/ml)220(2)準(zhǔn)確度驗(yàn)證：用批號(hào)為178226-01610d1x﹑sCVCV20%(4)分析測(cè)量范圍3：1﹑2：2﹑1：3354tP1NP，以理論值與測(cè)試值作回歸分析。SPSSx±st220CV4.7%2.4%1)。21.4%～5.2%范圍，達(dá)到11.9%)。2.313.26﹑11.18﹑9.32﹑8.46﹑7.49﹑6.62ng/ml4.14%﹑7.25%﹑10.12%﹑13.26%﹑17.09%﹑20.08%,CV20%時(shí)對(duì)應(yīng)的tP1NP濃度為6.62ng/ml，為tP1NP檢測(cè)的功能靈敏度。2.4分析測(cè)量范圍理論值為1202.2﹑903.4﹑604.5﹑320.9和6.8ng/ml的樣品，其檢測(cè)值分別為1202.2﹑872.3﹑591.8﹑308.5和6.8ng/ml,回歸方程為Y=0.990X-7.354,r2=0.999。按b=1.00±0.05,r＞0.975為判斷標(biāo)準(zhǔn)，本次評(píng)估符合要求，本檢測(cè)系統(tǒng)的AMR在6.8～1020.2ng/ml。(ng/ml)tP1NP36.8±9.7，x±1.96s95%的數(shù)據(jù)范圍，則參考區(qū)間為17.8～55.8ng/ml。I(tP1NP)測(cè)定值各疾病組與對(duì)照組比均有顯著差異。升高最明顯的是異位甲狀旁腺腺瘤，與其它各疾病組有非常顯著的差異。其次是甲亢組，與其它各疾病組有非常顯著的差異。見表2。美國(guó)病理家學(xué)會(huì)(CAP)要求申請(qǐng)認(rèn)可的實(shí)驗(yàn)室，在開展某一檢測(cè)項(xiàng)目前，必須對(duì)檢2006分析性能進(jìn)行評(píng)價(jià)，才可將分析系統(tǒng)用于常規(guī)工作。本研究對(duì)羅氏Elecsys2010I(tP1NP)的各項(xiàng)分析性的驗(yàn)證方法。25%，是構(gòu)成膠原纖維的基本IN-MIN酶等，兩者都有其局限性，前者受腎功能和藥物影響較大[3]，后者易與肝源性堿性磷酸酶發(fā)生交叉反應(yīng)。tP1NP[4]，tP1NP各種骨代謝疾病，由于骨轉(zhuǎn)換率不同，骨轉(zhuǎn)換生化指標(biāo)有不同程度的升高，這些骨代謝疾病往往會(huì)導(dǎo)致繼發(fā)性骨質(zhì)疏松[5]。目前國(guó)內(nèi)較多采用酶聯(lián)免疫法測(cè)定血清I型前膠原氨基端前肽(tP1NP)，本文應(yīng)用先進(jìn)的電化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)(ECLIA)自動(dòng)測(cè)定血清I型前膠原氨基端前肽(tP1NP)，靈敏度高，準(zhǔn)確度高，穩(wěn)定性好[6]，可克服上述缺點(diǎn)，能很好地反映骨轉(zhuǎn)換的變化[7]，是骨代謝疾病研究的診斷、監(jiān)測(cè)、治療效果觀察非常有價(jià)值的指標(biāo)?！鞠嚓P(guān)文獻(xiàn)】MelkkoJ,KauppilaS,NiemiS,etal.ImmunoassayforintactaminoterminalpropeptideofhumantypeIprocollagen[J].ClinChem,1996,42(6):947-954.叢玉隆，馮仁豐，陳曉東,等.臨床實(shí)驗(yàn)室管理學(xué)[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2004：1-39[3]IvaskaKK,HentunenTA,VaaraniemiJ,etal.Releaseofintactandfragmentedosteocalcinmoleculesfrombonematrixduringboneresorptioninvitro[J].JBiolChem2004,279(18):18361-18369.ClowesJA,HannonRA,YapTS,etal.Effectoffeedingonboneturnovermarkersanditsimpactonbiologicalvariabilityofmeasurements[J].Bone,2002,30(6):886-890.王繼貴.繼發(fā)性骨質(zhì)疏松的實(shí)驗(yàn)室檢查[J]2013,31(3):201-204.LomeoA,BolnerA.Stabil