過敏原血清學(xué)檢測與臨床應(yīng)用

過敏原血清學(xué)檢測金花2013.3.22基本概念過敏反應(yīng)：1906年vonPiguet提出了allergy一詞。其概念為：機(jī)體對抗原刺激產(chǎn)生的一種“改變了反應(yīng)性”的狀態(tài)。這種狀態(tài)可能是保護(hù)性的，即產(chǎn)生了免疫力；也可能是破壞性的，即產(chǎn)生了超敏反應(yīng)。超敏反應(yīng)是機(jī)體對某抗原初次應(yīng)答后，再次接受相同抗原刺激時(shí)，發(fā)生的一種以機(jī)體生理功能紊亂或組織細(xì)胞損傷為主的特異性免疫應(yīng)答。過敏原：致敏原or變應(yīng)原能夠使人發(fā)生過敏的抗原。吸入過敏原接觸過敏原

過敏原輸注過敏原

過敏原食物過敏原

4種過敏反應(yīng)類型(超敏反應(yīng))byCoombsundGell(1963)

TypeI早期反應(yīng)核Platzhalter數(shù)分鐘內(nèi)

花粉熱

TypeII細(xì)胞毒反應(yīng)壞數(shù)小時(shí)到一天

輸血反應(yīng)

TypeIII免疫復(fù)合物形成IgE-介導(dǎo)肥大細(xì)胞脫IgG/IgM介導(dǎo)靶細(xì)胞的破持續(xù)產(chǎn)生IgG/IgM免疫復(fù)

合物Platzhalter

數(shù)小時(shí)到一天farmerslungs

TypeIV細(xì)胞免疫反應(yīng)T-細(xì)胞介導(dǎo)反應(yīng)

12小時(shí)到數(shù)周接觸過敏反應(yīng)(Ni)過敏性鼻炎、鼻息肉、鼻竇炎過敏性眼病哮喘、過敏性肺炎特應(yīng)性皮炎和接觸性皮炎慢性蕁麻疹和血管性水腫過敏性休克昆蟲過敏藥物過敏食物過敏from《ManualofAllergyandImmunology》常見過敏性疾病流行病學(xué)平均發(fā)病率20%（8~45%）過去10年，成倍增加（doubled） 二十一世紀(jì)的流行病（theepidemicof21thcentury）TriggersEpisodic

（多有明顯誘因）（呈發(fā)作性，癥狀來得快，去的快）Reversible（可完全緩解,查體常無陽性體征）Recurrent（病情反復(fù)，多與過敏原暴露相關(guān)）Atopic（特應(yīng)性，發(fā)生于過敏體質(zhì)者）臨床表現(xiàn)的特點(diǎn)引起過敏反應(yīng)因素遺傳因素接觸過敏原的機(jī)會抗原性質(zhì)Th細(xì)胞及細(xì)胞因子過敏反應(yīng):診斷IgE檢測原理FromALLERGY4thEdition檢測IgE步驟1:總IgE?ELISA步驟2:特異性IgEEUROLINEExtinction總IgEELISA標(biāo)準(zhǔn)品100IU/ml10IU/ml 0IU/mlWHO75/502?4點(diǎn)定標(biāo)Exampleforastandardcurve00,5

2

500IU/ml1,5 10100200300400500600IgE[IU/ml]年齡最高參考上限新生兒1.2IU/ml1-6月7.2IU/ml7-12月12.7IU/ml1-5歲60IU/ml6-9歲155IU/ml10-15歲199IU/ml>16歲100IU/ml總IgEELISA:參考范圍>參考范圍<參考范圍：：可能存在過敏反應(yīng)一般無過敏反應(yīng)特異性IgE：EUROLINE?簡便和快捷的實(shí)驗(yàn)操作?僅需少量樣本(過夜溫育)?結(jié)果基于廣泛應(yīng)用的EAST分級系統(tǒng)?通過EUROLineScan程序?qū)崿F(xiàn)結(jié)果的自動判讀EUROLINE檢測系統(tǒng)顏色反應(yīng)底物膜條

色原抗原提取物特異性IgE：EUROLINE

溫育AP標(biāo)記二抗AKP清洗3x5min

60min二抗反應(yīng)

清洗3x5min

10min底物溫育自動化判讀或肉眼觀察60min未稀釋過夜1:11稀釋類別濃度[kU/l]sIgE水平臨床意義0<0.35未檢出不過敏10.35-0.7低較敏感20.7-3.5中有臨床癥狀33.5-17.5高重417.5-50很高（+）很重550-100特高（++）特重6>100特高（+++）特重特異性IgE分級標(biāo)準(zhǔn)及臨床意義?結(jié)果判讀:EUROLineScan特異性IgE歐蒙印跡法自動化IgE名稱/商品名貨號檢測內(nèi)容檢測項(xiàng)目特點(diǎn)吸入及食物組合DP3713-1601-4E塵螨組合1（屋塵螨/粉塵螨)、貓毛、狗上皮、屋塵、蟑螂、霉菌組合1（點(diǎn)青霉/分枝孢霉/煙曲霉/交鏈孢霉）、樹組合2（柳樹/楊樹/榆樹）、矮豚草、艾蒿、葎草、牛奶、雞蛋白、花生、海魚組合1（鱈魚/龍蝦/扇貝）、CCD標(biāo)記物、質(zhì)控帶10項(xiàng)吸入、4項(xiàng)食物、CCD、指控帶（14項(xiàng)）精簡最常見的食物及吸入過敏原小蒙星DP-3713-1601-5E塵螨組合1（屋塵螨/粉塵螨)、貓毛、狗上皮、屋塵、蟑螂、霉菌組合1（點(diǎn)青霉/分枝孢霉/煙曲霉/交鏈孢霉）、葎草、普通豚草、艾蒿、牛奶、雞蛋白、花生、黃豆、蟹、蝦、海魚組合1（鱈魚/龍蝦/扇貝）、CCD標(biāo)記物、質(zhì)控帶9項(xiàng)吸入、7項(xiàng)食物、CCD、指控帶（16項(xiàng)）兒童相對常見過敏原吸入組合DP-3116-1601-2E樹組合2（柳樹/楊樹/榆樹）、矮豚草、艾蒿、塵螨組合1（屋塵螨/粉塵螨）、屋塵、貓毛、狗上皮、蟑螂、霉菌組合1（點(diǎn)青霉/分枝孢霉/煙曲霉/交鏈孢霉）、葎草、CCD標(biāo)記物、質(zhì)控帶10項(xiàng)吸入、CCD、指控帶（10項(xiàng)）常見吸入過敏原食物組合DP-3414-1601-2E雞蛋白、牛奶、花生、黃豆、海魚組合1（鱈魚/龍蝦/扇貝）、淡水魚組合1（鮭魚/鱸魚/鯉魚）、蝦、蟹、CCD標(biāo)記物、質(zhì)控帶8項(xiàng)食物、CCD、指控帶（8項(xiàng)）常見食物過敏原定制組合1DP3713-7E塵螨組合1（屋塵螨/粉塵螨)、貓毛、狗上皮、屋塵、蟑螂、霉菌組合1（點(diǎn)青霉/分枝孢霉/煙曲霉/交鏈孢霉）、葎草、普通豚草、艾蒿、牛奶、雞蛋白、海魚組合1（鱈魚/龍蝦/扇貝）、CCD標(biāo)記物、質(zhì)控帶9項(xiàng)吸入、3項(xiàng)食物、CCD、指控帶（12項(xiàng)）跟據(jù)客戶需求定制過敏原優(yōu)敏組合Q1：TIgE&sIgE關(guān)系

總IgE:結(jié)果解釋1.總IgE超出參考范圍大多數(shù)是由于過敏反應(yīng)導(dǎo)致?例外:寄生蟲病;免疫抑制;HIV;重度燒傷2.臨床相關(guān)特異性IgE結(jié)果?與總IgE相關(guān)的特異性IgE濃度越高，患者臨床過敏反應(yīng)的可能性就越大.特異性IgE總IgE特異性IgE總IgE5IU/ml(kU/l)200IU/ml總IgE:結(jié)果解釋舉例

患者1特異性IgE總IgE5IU/ml(kU/l)25IU/ml患者2總IgE濃度與特異性IgE水平關(guān)系——并不存在必然相關(guān)性約20-30%超敏疾病患者特異性IgE可能較高，但總IgE可維持正常，甚至低于幾何均值。如患者僅對牛奶高度過敏，其特異性IgE為18kU/L。對于特異性

IgE而言，該結(jié)果已屬于嚴(yán)重過敏（IV級）的范疇。從理論上講， 該患者的總IgE也應(yīng)該為18kU/L。而對于總IgE來說，這個(gè)結(jié)果 是很低的；總IgE升高并不一定是超敏反應(yīng)，而過敏患者總IgE也不總是一定升高。這一要點(diǎn)在評價(jià)總IgE檢測結(jié)果時(shí)非常重要。Q2：CCD？何謂CCDs?CCD是“CrossreactiveCarbohydrateDeterminants（交叉反應(yīng)性碳水化合物決定子）”的英文縮寫.該結(jié)構(gòu)為結(jié)合于糖蛋白N末端的多聚糖。依據(jù)糖基化作用的不同而產(chǎn)生不同的結(jié)構(gòu)。舉例:MMXF(Manα1-6(Manα1-3)(Xylβ1-2)Manβ1-4GlcNAcβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc)CCDs在自然界中的存在?CCDs存在于多種植物性或動物源性的過敏原中。由于結(jié)構(gòu)的相似性導(dǎo)致一些獨(dú)特的交叉反應(yīng)出現(xiàn)。典型含CCD結(jié)構(gòu)的過敏原:?植物花粉?植物性食物?植物乳膠?昆蟲毒液抗CCDIgE結(jié)果的臨床價(jià)值?大部分糖蛋白僅含有一個(gè)IgE結(jié)合的多聚糖，因此無法促進(jìn)結(jié)合有IgE抗體的肥大細(xì)胞表面受體形成二聚體化，進(jìn)而無法活化肥大細(xì)胞發(fā)生脫核及釋放組胺的作用，因此對于僅為抗CCDIgE抗體陽性的患者而言往往無臨床癥狀的表現(xiàn)。在何種情況下應(yīng)排除抗CCDIgE的干擾???當(dāng)體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果與臨床癥狀或皮試結(jié)果不符的情況下。當(dāng)某一患者出現(xiàn)多個(gè)特異性IgE結(jié)果陽性時(shí)。舉例:????花生:特異性IgE陽性但并不表現(xiàn)出臨床癥狀出現(xiàn)多個(gè)食物相關(guān)的陽性結(jié)果但缺乏臨床癥狀表現(xiàn).植物乳膠:針對花粉敏感的患者抗植物乳膠陽性，但無相關(guān)接觸史。昆蟲毒液:針對蜜蜂和馬蜂特異性IgE陽性的患者可能存在交叉反應(yīng)。??1715例體檢人群的問卷統(tǒng)計(jì)及sIgE比較，存在不符合現(xiàn)象。CCD-IgE是引起sIgE檢測交叉反應(yīng)的重要因素，干擾血清sIgE檢測結(jié)果，導(dǎo)致血清sIgE檢測與臨床癥狀不符合。

EUROIMMUNEUROIMMUN研究背景：1個(gè)病人皮試和血清檢測結(jié)果不相符，分析研究了造成不符合的原因，評價(jià)CCD在其中的作用。實(shí)驗(yàn)方法：用已知碳水化合物結(jié)構(gòu)的糖蛋白做抑制實(shí)驗(yàn)。用糖蛋白做和血清結(jié)合，同時(shí)做過敏原提取物和血清結(jié)合。共分析了428份結(jié)果，最終確定CCD引起假陽性的原因。EUROIMMUN獨(dú)家包被有CCD指示帶CCD是“交叉反應(yīng)性碳水化合物決定因子”CCD存在于多種植物性或動物源性的過敏原中，由于結(jié)構(gòu)相似性導(dǎo)致一些獨(dú)特的交叉反應(yīng)出現(xiàn)解釋交叉反應(yīng)的假陽性結(jié)果CCDQ3：食物不耐受&食物過敏EUROIMMUN食物過敏vs食物不耐受EAACI：歐洲變態(tài)反應(yīng)與臨床免疫學(xué)會食物過敏vs食物不耐受食物過敏：免疫介導(dǎo)；

如IgE免疫球蛋白食物不耐受：非免疫介導(dǎo)； 如酶促作用、藥理作用

EAACI：歐洲變態(tài)反應(yīng)與臨床免疫學(xué)會

EUROIMMUNEUROIMMUN食物過敏vs食物不耐受美國變態(tài)反應(yīng)和免疫學(xué)會及國立衛(wèi)生研究院（NIH）定義：食物不良反