菊花的組織培養(yǎng)上課

課題1：菊花的組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)是指在人工培養(yǎng)基上，離體培養(yǎng)植物的器官、組織、細胞和原生質體，并使其生長、增殖、分化以及再生植株的技術。一、植物組織培養(yǎng)的基本過程（1）細胞的分化①概念：在個體發(fā)育中，相同細胞的后代在形態(tài)、結構、生理功能上發(fā)生穩(wěn)定性差異的過程.②實例：如：受精卵增殖、生長、分化形成組織、器官、系統(tǒng).③特點：B.不可逆性：C.穩(wěn)定性：在整個分化過程中，細胞內的遺傳物質是不變的、穩(wěn)定的。A.持久性：是一種持久性的變化，它發(fā)生在生物體的整個生命過程中,在胚胎期達到最大限度.細胞分化是依次漸變，不可逆轉的.⑤原因：基因在特定的時間和空間條件下的選擇性表達的結果.④結果：形成不同的細胞和組織（2）植物組織培養(yǎng)的原理：植物細胞的全能性①概念：高度分化的植物細胞，仍具有發(fā)育為完整個體的潛能，植物細胞的這種特性叫做植物細胞的全能性②細胞具有全能性的原因：生物體的每一個細胞都包含有該物種所特有的全套遺傳物質，都有發(fā)育成為完整個體所必需的全部基因.③實例：美國生物學家斯圖爾德利用胡蘿卜根韌皮部細胞培養(yǎng)成胡蘿卜植株受精卵>生殖細胞>體細胞④全能性的比較:二、植物組織培養(yǎng)的基本過程:愈傷組織愈傷組織是通過細胞分裂形成的，其細胞排列疏松而無規(guī)則，高度液泡化呈無定形狀態(tài)的薄壁細胞。脫分化：由高度分化的植物器官、組織或細胞產(chǎn)生愈傷組織的過程，又稱去分化。再分化：脫分化產(chǎn)生的愈傷組織在培養(yǎng)過程中重新分化根或芽等器官的過程愈傷組織:細胞排列疏松而無規(guī)則,是高度液泡化的、成無定形狀態(tài)的薄壁細胞.三、影響植物組織培養(yǎng)的因素：1、外植體的選取

不同植物的組織培養(yǎng)難度不同同一種植物的不同組織培養(yǎng)難度不同2、培養(yǎng)基的配制(MS培養(yǎng)基)

大量元素：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S

微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co

有機物：甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等植物激素：生長素、細胞分裂素、赤霉素等未開花植物的莖上部新萌生的側枝枝條中部的芽①常用的植物激素：生長素、細胞分裂素和赤霉素生長素類：2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA）細胞分裂素類：激動素（KT）、6－芐基嘌呤（6－BA）、玉米素（ZT）赤霉素類：赤霉酸（GA3）3、植物激素的影響討論：你能說出各種營養(yǎng)物質的作用嗎？同專題2中微生物培養(yǎng)基的配方相比，MS培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同？答：微量元素和大量元素提供植物細胞生活所必需的無機鹽；蔗糖提供碳源，同時能夠維持培養(yǎng)基的滲透壓；甘氨酸、維生素等物質主要是為了滿足離體植物細胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營養(yǎng)需求。微生物培養(yǎng)基以有機營養(yǎng)為主。與微生物的培養(yǎng)不同，MS培養(yǎng)基則需提供大量無機營養(yǎng)，無機鹽混合物包括植物生長必須的大量元素和微量元素兩大類。②生長素和細胞分裂素作用植物中生長素和細胞分裂素是啟動細胞分裂、脫分化和再分化的關鍵性激素。在生長素存在的情況下，細胞分裂素的作用呈現(xiàn)加強的趨勢使用順序實驗結果先使用生長素，后使用細胞分裂素有利于細胞分裂，但不利分化先使用細胞分裂素后使用生長素細胞既分裂也分化同時使用分化頻率提高生長素細胞分裂素：>有利于根的分化生長素細胞分裂素：<有利于芽的分化，抑制根的分化生長素細胞分裂素：＝促進愈傷組織生長③生長素和細胞分裂素同時使用，用量的比例對植物細胞發(fā)育方向的影響思考：以下培養(yǎng)基出現(xiàn)的現(xiàn)象反應了什么問題？生長素/細胞分裂素高利于根的形成低利于芽的分化4、pH、溫度、光照

（菊花組培：

pH=5.8，溫度控制在18—22℃，每日光照12h）5、無菌環(huán)境在組織培養(yǎng)的整個過程中，都需要一個無菌環(huán)境，包括培養(yǎng)基的滅菌、外植體消毒以及接種過程的無菌操作等。注：植物組織培養(yǎng)過程離體組織或細胞植物體脫分化細胞分裂素≈生長素愈傷組織芽根細胞分裂素>生長素細胞分裂素<生長素植物細胞培養(yǎng)不需要光需要光制備MS固體培養(yǎng)基外植體消毒

接種

培養(yǎng)栽培四、實驗操作

移栽沖洗—酒精—無菌水沖洗—氯化汞—無菌水沖洗至少三次之上配制各種母液配制培養(yǎng)基滅菌1、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）2、外植體的消毒（酒精、氯化汞）3、接種的無菌操作（酒精、酒精燈——灼燒）4、無菌箱中的培養(yǎng)；5、移栽到消過毒的環(huán)境中生存一段時間。在整個操作過程中，是如何來實現(xiàn)