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文檔簡介

雜交瘤細胞的純化原理與方法雜交瘤細胞的篩選未融合的免疫細胞在培養(yǎng)6~10天后會自行死亡；異型多核細胞分裂不正常，培養(yǎng)過程中也會死亡；未融合的骨髓瘤細胞因其生長快不利于雜交瘤細胞生長，所以要將雜交瘤細胞篩選出。脾細胞(B淋巴細胞)骨髓瘤細胞雜交瘤細胞脾細胞脾細胞骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞脾細胞篩選出不能長期存活不能長期存活雜交瘤細胞的篩選HAT培養(yǎng)基進行篩選原理細胞DNA合成有兩條途徑：從頭合成途徑補救合成途徑

從頭合成途徑即利用糖和氨基酸這些可從培養(yǎng)液中攝取的簡單的含碳、含氮復(fù)合物來合成核苷酸，進而合成DNA。這一過程需四氫葉酸參與供甲基及甲?；?，因此該途徑可被葉酸拮抗物氨基喋呤（A）阻斷。補救合成途徑細胞可通過次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK），將核苷酸前體合成核苷酸以供DNA合成的原料。DNA的生物合成途徑與HAT選擇培養(yǎng)基ATHIMPDNA核苷酸

糖和氨基酸TMPHGPRTTK核苷酸前體H—hypoxanthine（次黃嘌呤）

A—aminopterin（氨基喋呤）

T—thymidine（胸腺嘧啶核苷）實驗所用骨髓瘤細胞是HGPRT缺陷（HGPRT-）和TK缺陷（TK-）細胞，不能利用培養(yǎng)基中的H和T，且未融合骨髓瘤細胞合成DNA的主要途徑被培養(yǎng)基中的A阻斷，所以未融合骨髓瘤細胞不能在HAT培養(yǎng)基中生長。未融合的脾細胞因不能在體外長期存活而死亡。脾細胞和脾細胞自身融合的細胞能在HAT培養(yǎng)基上正常生活,但不能增殖,所以經(jīng)過數(shù)代后,HAT培養(yǎng)基上沒有脾細胞和脾細胞自身融合的細胞。只有雜交瘤細胞由于從脾細胞獲得了HGPRT和TK，因此能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖。骨髓瘤細胞：HGPRTˉ或TKˉ

死亡脾細胞：HGPRT+，TK+

存活但短命雜交瘤細胞：HGPRT+，TK+

存活篩選方法

骨髓瘤細胞死亡

融合后的混合物HAT培養(yǎng)基未融合的

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