免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)及其研究進(jìn)展,免疫學(xué)論文

免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)及其研究進(jìn)展,免疫學(xué)論文內(nèi)容摘要：免疫檢測(cè)技術(shù)是一種以抗原抗體特異性辨別和結(jié)合為原理對(duì)樣品中特定的目的物進(jìn)行定性定量測(cè)定的分析方式方法,其在臨床醫(yī)學(xué)、當(dāng)代生命科學(xué)、食品科學(xué)、生態(tài)學(xué)等領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。本文主要綜述最近幾年應(yīng)用比擬廣泛的免疫學(xué)檢測(cè)方式方法及其研究近況。本文關(guān)鍵詞語：免疫學(xué)檢測(cè),酶標(biāo)記,熒光素標(biāo)記,放射免疫1免疫熒光技術(shù)免疫熒光技術(shù)就是指用熒光色素對(duì)目的物標(biāo)記后,再對(duì)其進(jìn)行定性定量檢測(cè)的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)[8]。其基本原理就是抗體和抗原發(fā)生特異性結(jié)合后,使用熒光顯微鏡對(duì)待測(cè)物進(jìn)行觀察和鑒別。其基本操作步驟是先制備熒光標(biāo)記物(熒光抗體或抗原),即在已經(jīng)知道的抗體或者抗原上標(biāo)記上相應(yīng)的熒光素,再將這種熒光標(biāo)記物(熒光抗體或抗原)注入到細(xì)胞內(nèi)部作為探針,當(dāng)它們進(jìn)入細(xì)胞后即可和細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合,此時(shí)使用熒光顯微鏡來觀察標(biāo)本能否能發(fā)出熒光,以此來對(duì)細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的抗體或者抗原進(jìn)行定位和檢測(cè)[6]。在臨床應(yīng)用中免疫熒光技術(shù)的作用方式主要有兩種,一種是放射免疫分析法,另一種是時(shí)間分辨免疫熒光分析法。競(jìng)爭(zhēng)反響是放射免疫分析技術(shù)的主要利用原理,這種檢測(cè)方式方法曾被人以為是最具發(fā)展?jié)摿Φ拿庖邫z測(cè)技術(shù)[9]。時(shí)間分辨免疫熒光分析法能夠?qū)ν凰睾兔高M(jìn)行標(biāo)記。另外,其在試驗(yàn)中所需試劑的存放時(shí)間較長,所需的實(shí)驗(yàn)材料制作起來比擬簡單,因而有人將它稱為免疫檢測(cè)技術(shù)中的新成果[10]。隨著免疫熒光技術(shù)應(yīng)用范圍的不斷擴(kuò)大,其在免疫學(xué)、當(dāng)代分子生物學(xué)、環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域都有所牽涉[11]。另外,免疫熒光技術(shù)也在微生物學(xué)領(lǐng)域發(fā)揮著一定的作用,有人[12]已經(jīng)用免疫熒光技術(shù)快速檢測(cè)葡萄球菌、沙門氏菌、李斯特氏菌等細(xì)菌。2免疫層析技術(shù)(膠體金免疫層析技術(shù))免疫層析技術(shù)是免疫學(xué)上用于檢測(cè)分析的一種色譜分析方式方法。其利用的是抗原-抗體特異性吸附的原理,該技術(shù)操作簡單,能夠在較短的時(shí)間內(nèi)對(duì)待測(cè)物進(jìn)行檢測(cè)。當(dāng)前在免疫層析技術(shù)中,使用比擬好的有膠體金免疫層析技術(shù)[13]。膠體金免疫層析技術(shù)是一種將層析分析技術(shù)、膠體金標(biāo)記技術(shù)、免疫檢測(cè)技術(shù)三者相結(jié)合的固相標(biāo)記免疫檢測(cè)技術(shù),其也是將抗原抗體反響和膠體金標(biāo)記技術(shù)有機(jī)結(jié)合的一種應(yīng)用形式,它是借助毛細(xì)作用使得以條帶狀固定在膜上的特異性抗原或抗體發(fā)生泳動(dòng),同時(shí)使得層析條帶上針對(duì)待測(cè)物的受體(如抗體或抗原)與樣品中的待測(cè)物發(fā)生高親和性、高特異性的免疫反響,層析反響經(jīng)過中免疫復(fù)合物被截留或者富集在層析條的檢測(cè)帶區(qū)域,最后通過著色標(biāo)記物或者利用酶促反響快速、直觀地檢測(cè)出待檢物質(zhì)。膠體金免疫檢測(cè)技術(shù)廣泛應(yīng)用于核酸、殺蟲劑、蛋白質(zhì)、激素、藥物和毒素等的檢測(cè)。如BoyleT[14]利用膠體金免疫檢測(cè)技術(shù)評(píng)價(jià)酸奶、巧克力、嬰兒配方奶粉、冰淇淋中的葡萄球菌中的腸毒素。3酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)(ELISA)是把酶的高效催化作用與抗原抗體的特異性反響有機(jī)結(jié)合起來的一種新型的免疫檢測(cè)技術(shù),該方式方法既能夠檢測(cè)抗體,可以以檢測(cè)抗原[15]。其基本原理就是先用酶標(biāo)記抗體,再進(jìn)行抗原抗體反響,最后酶通過分解底物而顯色,根據(jù)顏色的深淺來判定待檢測(cè)的抗原和抗體的含量。ELISA主要有兩大類:傳統(tǒng)ELISA方式方法和新型ELISA方式方法[16]。傳統(tǒng)ELSIA法有:間接ELISA(I-ELISA)、固相競(jìng)爭(zhēng)ELSIA(SC-ELISA)、間接夾心ELISA(IS-ELISA)等。新型ELISA法有:單克隆抗體ELISA((McAbELISA)[17]、PT-PCRELISA、Dot-ELISA[18]等。ELISA法具有操作簡單、穩(wěn)定性好、特異性高、可大批量檢測(cè)樣品等優(yōu)點(diǎn),因其檢測(cè)成本較低,故比擬合適現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè),尤其適用于食品中微量過敏原的檢測(cè)。吳序櫟等人就曾利用雙抗體夾心法ELISA以其最低檢出限:40ng/ml檢測(cè)出了食品中蝦過敏原蛋白成分[19]。但是ELISA法也有其一定的局限性,如抗體制備難、無法進(jìn)行多殘留檢測(cè)、對(duì)構(gòu)造類的化合物存在一定的穿插反響[20],另外實(shí)驗(yàn)結(jié)果也會(huì)出現(xiàn)假陽性。4電化學(xué)免疫傳感器電化學(xué)免疫傳感器[7]是免疫傳感器中種類最多、研究最早、也比擬成熟的一種檢測(cè)技術(shù)。它是將電化學(xué)技術(shù)與免疫檢測(cè)技術(shù)相結(jié)合,用電化學(xué)信號(hào)來反響待檢測(cè)物質(zhì)的濃度,進(jìn)而對(duì)待分析物進(jìn)行分析測(cè)定的一種檢測(cè)方式方法,它由換能器(基本電極)和分子辨別物質(zhì)(抗原、抗體)組成。由于其有不同的檢測(cè)方式,故將電化學(xué)免疫傳感器分為下面幾種類型:阻抗型、電容型、電位型、電流型。4.1阻抗型免疫傳感器阻抗型免疫傳感器具有高度的特異性,它是通過阻抗譜對(duì)于傳感界面變化的靈敏度來檢測(cè)待測(cè)物的濃度的一種免疫檢測(cè)方式方法。Yang[21]等曾經(jīng)將葡萄糖氧化酶和HRP固定在納米材料上作為生物催化劑,催化過氧化氫氧化4-氯萘酚,建立了一種檢測(cè)甲胎蛋白的阻抗型免疫傳感器。4.2電容型免疫傳感器電容型免疫傳感器的測(cè)量原理比擬簡單,其建立根據(jù)主要有兩個(gè)方面:一個(gè)消耗離子所引起的溶液導(dǎo)電性變化,另一個(gè)是免疫生化反響的發(fā)生。外表電荷的改變和物質(zhì)的吸附對(duì)雙電層構(gòu)造有顯著的影響。4.3電位型免疫傳感器電位型免疫傳感器是通過測(cè)定抗原抗體特異性反響經(jīng)過中電位的變化而進(jìn)行免疫分析的一種檢測(cè)方式。由于檢測(cè)溶液的多離子性及其離子濃度之間的復(fù)雜性,該方式方法檢測(cè)的結(jié)果有較大的不確定性。4.4電流型免疫傳感器電流型免疫傳感器是在電壓恒定的情況下測(cè)定抗原抗體特異性反響中電流變化的一種免疫檢測(cè)方式。主要有兩種類型:非酶標(biāo)記性和酶標(biāo)記型。5免疫磁珠分離技術(shù)免疫磁珠是一種既能結(jié)合活性蛋白(如抗原、抗體)又能被磁力所吸引的磁性微球,其外表包被了各種化學(xué)基團(tuán),以使得能夠和別的物質(zhì)發(fā)生結(jié)合。而免疫磁珠分離技術(shù)[6]的基本原理就是將包被有抗體的磁珠與致病微生物(如抗原)結(jié)合,構(gòu)成抗原抗體復(fù)合物,而包被有抗原的磁性微球就會(huì)因磁力的吸引而發(fā)生聚集,進(jìn)而使得致病微生物與抗體構(gòu)成的復(fù)合物與其它物質(zhì)分開,以到達(dá)分離致病微生物的目的。國家檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)(食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)〕已經(jīng)把免疫磁珠分離技術(shù)作為大腸桿菌O157:H7/MM的檢驗(yàn)方式方法[22]。6分子印跡技術(shù)分子印跡技術(shù)(MIT)是一種模擬抗原抗體反響合成特異性選擇辨別位點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)[23],其在固相萃取、有機(jī)合成、免疫傳感器等領(lǐng)域有著重要的應(yīng)用前景[24]。分子印跡技術(shù)也有一些缺陷,如在極性溶劑或水溶液中該技術(shù)還是那樣不能很好地應(yīng)用。故該技術(shù)當(dāng)前還是主要用于小分子化合物的檢測(cè)。結(jié)束語免疫檢測(cè)技術(shù)在臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域和生物學(xué)領(lǐng)域中發(fā)揮著極其重要的作用,這些方式方法固然具有快速、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn),但也存在操作方式方法較繁瑣、信息量少、容易出現(xiàn)假陽(陰)性等缺點(diǎn)。如,電化學(xué)免疫傳感器由于其易于微型化、簡單、靈敏而曾被以為是AFP(甲胎蛋白)的有效檢測(cè)手段,但是迄今為止,它仍處于其發(fā)展的早期階段,沒有能得到廣泛使用。再如,膠體金免疫層析技術(shù)具有檢測(cè)結(jié)果直觀、快速、不需要特殊設(shè)備、無污染等優(yōu)點(diǎn),合適于大面積普查和大批量檢測(cè),非常合適于食品安全檢測(cè),但是當(dāng)前國內(nèi)市場(chǎng)上還沒有成型的膠體金免疫層析產(chǎn)品?？偟膩碇v,大部分的免疫檢測(cè)技術(shù)仍處于其研究的初級(jí)階段,要使得這些技術(shù)能夠廣泛的使用,我們?nèi)孕枰诰綔?zhǔn)確度和靈敏度的提高、操作的經(jīng)濟(jì)性和簡便性、穩(wěn)定性的保持等方面加強(qiáng)研究。我們相信,免疫檢測(cè)技術(shù)將不斷朝著簡單、靈敏、快速、標(biāo)準(zhǔn)的方向發(fā)展,為臨床醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、食品科學(xué)、環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域做著極其重大的奉獻(xiàn)。以下為參考文獻(xiàn)[1]KahnCR,RothJ.Berson,YalowandtheJCI:theagonyandtheecstasy[J].JClinInvest,2004,114(8):1051-1054.[2]林影,葉茂,韓雙艷,等.免疫檢測(cè)技術(shù)的研究進(jìn)展[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào),2007,26(4):117-120.[3]ShepherdP,DeanC.MonoclonalAntibodies[M].NewYor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