實驗五、消毒與滅菌

實驗五、消毒與滅菌生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室－YJH消毒與滅菌消毒是指采用物理、化學(xué)和生物的方法消除物體的表面病原菌和有害微生物的過程。滅菌則是指采用物理、化學(xué)和生物的方法殺滅一切微生物的營養(yǎng)體，芽孢和孢子的過程。在微生物實驗中，需要進(jìn)行純培養(yǎng)，不能有任何雜菌污染，因此對所用器材、培養(yǎng)基和工作場所都要進(jìn)行嚴(yán)格的消毒和滅菌。生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室－YJH消毒與滅菌方法加熱滅菌干熱滅菌濕熱滅菌過濾除菌輻射滅菌放射線輻照滅菌紫外線滅菌化學(xué)藥品滅菌生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室－YJH干熱滅菌干熱滅菌是利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固性與其本身的含水量有關(guān)，在菌體受熱時，當(dāng)環(huán)境和細(xì)胞內(nèi)含水量越大，則蛋白蛋凝固就越快，反之含水量越少，凝固緩慢。因此，與濕熱滅菌相比，干熱滅菌所需溫度要高（160～170℃），時間要長（1～2h），但干熱滅菌溫度不能超過180℃，否則，包器皿的紙或棉塞就會燒焦，甚至引起燃燒。生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室－YJH生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室－YJH高壓蒸氣滅菌高壓蒸氣滅菌是將待滅菌的物品放在一個密閉的加壓滅菌鍋內(nèi)，通過加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸氣。待水蒸氣急劇地將鍋內(nèi)的冷空氣從排氣閥中驅(qū)盡，然后關(guān)閉排氣閥，繼續(xù)加熱，此時由于蒸氣不能溢出，而增加了滅菌鍋內(nèi)的壓力，從而使沸點增高，得到高于100℃的溫度。導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室－YJH

在同一溫度下，濕熱的殺菌效力比干熱大。其原因有三：一、濕熱中細(xì)菌菌體吸收水分，蛋白質(zhì)較易凝固，因蛋白質(zhì)含水量增加，所需凝固溫度降低，二、濕熱的穿透力比干熱大，三、濕熱的蒸氣有潛熱存在。1g水在100℃時，由氣態(tài)變?yōu)橐簯B(tài)時可放出2.26kJ(千焦)的熱量。這種潛熱，能迅速提高被滅菌物體的溫度，從而增加滅菌效力。生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室－YJH在使用高壓蒸氣滅菌鍋滅菌時，滅菌鍋內(nèi)冷空氣的排除是否完全極為重要，因為空氣的膨脹壓大于水蒸氣的膨脹壓，所以，當(dāng)水蒸氣中含有空氣時，在同一壓力下，含空氣蒸氣的溫度低于飽和蒸氣的溫度。生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室－YJH一般培養(yǎng)基用0.1Mpa，121.5℃,15～30min可達(dá)到徹底滅菌的目的。滅菌的溫度及維持的時間隨滅菌物品的性質(zhì)和容量等具體情況而有所改變。例如含糖培養(yǎng)基用0.06Mpa,112.6℃滅菌，然后以無菌操作手續(xù)加入滅菌的糖溶液。又如盛于試管內(nèi)的培養(yǎng)基以0.1Mpa,121.5℃滅菌20min即可，而盛于大瓶內(nèi)的培養(yǎng)基最好以0.1Mpa，122℃滅菌30min。生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室－YJH生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室－YJH紫外線滅菌紫外線滅菌是用紫外線燈進(jìn)行的。波長為200~300nm的紫外線都有殺菌能力，其中以260nm的殺菌力最強(qiáng)。在波長一定的條件下，紫外線的殺菌效率與強(qiáng)度和時間的乘積成正比。紫外線殺菌機(jī)理主要是因為它誘導(dǎo)了胸腺嘧啶二聚體的形成和DNA鏈的交聯(lián)，從而抑制了DNA的復(fù)制。另一方面，由于輻射能使空氣中的氧電離成[O]，再使O2氧化生成臭氧（O3）或使水（H2O）氧化生成過氧化氫（H2O2）。O3和H2O2均有殺菌作用。紫外線穿透力不大，所以，只適用于無菌室，接種箱，手術(shù)室內(nèi)的空氣及物體表面的滅菌。紫外線燈距照射物以不超過1.2m為宜。生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室－YJH此外，為了加強(qiáng)紫外線滅菌效果，在打開紫外燈以前；可在無菌室內(nèi)(或接種箱內(nèi))噴灑3%～5%石炭酸溶液，一方面使空氣中附著有微生物的塵埃降落，另一方面也可以殺死一部分細(xì)菌。無菌室內(nèi)的桌面、凳子可用2%～3%的來蘇爾擦洗，然后再開紫外燈照射，即可增強(qiáng)殺菌效果，達(dá)到滅菌目的。生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室－YJH微孔濾膜過濾除菌過濾除菌是通過機(jī)械作用濾去液體或氣體中細(xì)菌的方法。根據(jù)不同的需要選用不同的濾器和濾板材料。微孔濾膜過濾器是由上下二個分別具有出口和入口連接裝置的塑料蓋盒組成，出口處可連接針頭，入口處可連接針筒，使用時將濾膜裝入兩塑料蓋盒之間，旋緊蓋盒，當(dāng)溶液從針筒注入濾器時，此濾器將各種微生物阻留在微孔濾膜上面，從而達(dá)到除菌的目的。根據(jù)待除菌溶液量的多少，可選用不同大小