實(shí)驗(yàn)-第六次細(xì)胞融合

掌握細(xì)胞融合的方學(xué)習(xí)使用PEG促進(jìn)細(xì)胞融合的方二．實(shí)驗(yàn)原的細(xì)胞合并形成一個細(xì)胞的過程。由于體外培養(yǎng)的細(xì)胞很少會發(fā)生自發(fā)融合融合頻率大10?4-10?6之間，因此要采用生物、化學(xué)或物理的方法人為地促使細(xì)胞融合。生物方法： ，Newcastle ，Vaceine（DMSO從而使細(xì)胞發(fā)生融合。在眾多的化學(xué)試劑中，PEGPEG更易和控制、活性穩(wěn)定、使用方便、而且促進(jìn)細(xì)胞融合的能力更強(qiáng)。2080置精巧，方法簡單，可在顯微鏡下觀察或錄象融合過程：免去PEG誘導(dǎo)后的洗滌過程，誘導(dǎo)過程可控制性強(qiáng)。三．實(shí)驗(yàn)材料及實(shí)驗(yàn)材料50%PEG混合雞紅細(xì)胞懸生理鹽Hanks實(shí)驗(yàn)設(shè)備普通光學(xué)顯微載玻片若干，注射燈、恒溫水浴離心管若干、吸水紙、滴管、剪刀、白瓷四．實(shí)驗(yàn)方法及取細(xì)胞懸液1mL，移入10mL4mL0.85%生理鹽水混勻。1200r/min離心5min。棄上清液（用吸管吸去0.85%生理鹽水5mL，混收集最后一次離心沉淀的血細(xì)胞，加入適量Hanks910%的紅細(xì)胞懸液（濃度約為3-4萬個/mL）取上述懸液1mL到一個試管中，加入0.5-0.8mL五．實(shí)驗(yàn)結(jié)13在光鏡下可見單個橢圓狀的雞血紅細(xì)胞，在經(jīng)由PEG接觸的雞血紅細(xì)胞發(fā)生融合，可見相互接觸的紅細(xì)胞逐漸融合組成一PEG以可見大量細(xì)胞而成的褐紅色團(tuán)塊。六．實(shí)驗(yàn)討實(shí)驗(yàn)結(jié)論討論一：細(xì)胞融合方法主要有哪幾類？各有何優(yōu)缺點(diǎn)幾類細(xì)胞融合方法的優(yōu)缺點(diǎn)如下好；缺點(diǎn)為PEG對細(xì)胞性，處理不好則會直接影響融合細(xì)胞討論二：本實(shí)驗(yàn)中所用的PEG融合方法能否用于植物細(xì)胞？為本實(shí)驗(yàn)所用PEG融合方法不能直接用于未脫壁植物細(xì)胞的融合，因?yàn)橹参锛?xì)胞具有細(xì)胞壁，PEG無法介導(dǎo)其細(xì)胞融合；但是，如果將PEG討論三：和其他同學(xué)比較，為什么出現(xiàn)了較多褐色團(tuán)塊？影響PEG融合的因素還有哪些？管，導(dǎo)致被PEG其他影響因素PEG的分子量與濃度:細(xì)胞融合效果與PEG的分子量及其PEGPEG1000~4000，濃度一般為40~60%。PEG的pH經(jīng)驗(yàn)證，PEGpH8.0~8.2之間融合PEG的處理時間:處理時間越長，融合效果越好,但對細(xì)胞的毒害也就越大。故一般將處理時間限制在1分鐘之內(nèi)。本實(shí)果,在細(xì)胞可能承受的溫度范圍內(nèi)可適當(dāng)提高處理的溫度。對于哺乳動物的細(xì),一般采用的溫度為38~40℃。七．參考文[1]DOSREMEDIOSCG,CHHABRAD,KEKICM,etal.Actinbindingproteins:regulationofcytoskeletalmicrofilaments.[J].2(2):433-473[3],,,等.PEG介導(dǎo)細(xì)胞融合最適條件的探討[J].動物醫(yī)學(xué)