冰凍切片和石蠟切片各自的優(yōu)劣之處之歐陽(yáng)物創(chuàng)編

歐陽(yáng)物創(chuàng)編冰凍切片和石蠟切片各自的優(yōu)劣之處是什么1、時(shí)間：2021.02.07命題人：歐陽(yáng)物2、 從一抗的選擇方面來(lái)看。有的一抗既能做石蠟切片又能做冰凍切片，而有的一抗只能做冰凍切片，關(guān)鍵取決于所要檢測(cè)的抗原穩(wěn)定性，有的抗原不穩(wěn)定，經(jīng)過(guò)組織固定，脫水、透明、浸蠟、包埋、脫蠟等一系列的做石蠟切片的步驟，所檢測(cè)的抗原易被破壞，這時(shí)只能用冰凍切片來(lái)做，檢測(cè)這類(lèi)抗原的一抗只能做冰凍切片，而那些穩(wěn)定的抗原，能經(jīng)受住石蠟切片的的考驗(yàn)，一般來(lái)講也可以用冰凍切片來(lái)做，總得來(lái)講，對(duì)于既可以用冰凍切片也可以用石蠟切片檢測(cè)的抗原，用石蠟切片檢測(cè)的染色效果要比冰凍切片好一些。2、從研究目的來(lái)看。石蠟切片對(duì)組織細(xì)胞的定位很準(zhǔn)確，而長(zhǎng)期凍存組織的冰凍切片可能因冰晶的形成破壞組織細(xì)胞形態(tài)的結(jié)構(gòu)，并造成抗原的彌散，從而定位不準(zhǔn)確。3、從抗原的保真性來(lái)看。冰凍切片對(duì)抗原的保真很好，而石蠟切片在組織固定，脫水、透明、浸蠟、包埋、脫蠟等過(guò)程中可能會(huì)對(duì)抗原的性質(zhì)造成影響。歐陽(yáng)物創(chuàng)編2021.02.07

歐陽(yáng)物創(chuàng)編2021.02.074、從操作步驟的繁瑣程度看。染色過(guò)程冰凍切片簡(jiǎn)單，而石蠟切片要求脫蠟入水、抗原修復(fù)等過(guò)程，比較繁瑣。5、總之，石蠟切片對(duì)標(biāo)本的長(zhǎng)期保存較合適，且組織細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)保持好；而冰凍切片適合對(duì)新鮮組織的制片，然后立即固定、染色效果較好，且免疫熒光中可以相對(duì)避免石蠟自發(fā)熒光的干擾。冰凍切片（什。26門(mén)section）是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬度，然后進(jìn)行切片的方法。因其制作過(guò)程較石蠟切片快捷、簡(jiǎn)便，而多應(yīng)用于手術(shù)中的快速病理診斷。冰凍切片的種類(lèi)較多，有低溫恒冷箱冰凍切片法，二氧化碳冰凍切片法，甲醇循環(huán)制冷冰凍切片法等。這些方法，隨著時(shí)代的變遷，科技的發(fā)展，許多年前被認(rèn)為是非常重要的技術(shù)，現(xiàn)在也逐步被淘汰了。當(dāng)然有些技術(shù)，如低溫恒冷箱冰凍切片法，正在受到青睞。編輯本段冰凍切片的應(yīng)用（1）在手術(shù)進(jìn)行中，突然發(fā)現(xiàn)病人的病變與原診斷原定手術(shù)方案不相符合，或者懷疑時(shí)，需要病理確定。歐陽(yáng)物創(chuàng)編2021.02.07

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2021.02.07（2）了解淋巴結(jié)內(nèi)是否有轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞，或者轉(zhuǎn)移的程度，以利于確定是否需要徹底掃除淋巴結(jié)或者其它的治療措施。（3）對(duì)于已確定為惡性腫瘤的患者，則需要了解其手術(shù)范圍是否足夠，上下切緣是否有殘存的腫瘤組織。（4）在做剖腹探查時(shí)所發(fā)現(xiàn)的腫塊或者異樣的組織。（5）顯示組織中的脂肪和脂類(lèi)物質(zhì)，這常見(jiàn)于某些病例如脂肪瘤及肉瘤，某些科研組織等。（6）某些酶的顯示如ATP酶，琥珀酸脫氫酶等。（7）神經(jīng)病理學(xué)技術(shù)中的某些染色法如：Eager氏法，Marchi氏法，Cajal氏法，Hortega氏法和Holzer氏法等。（8）對(duì)某些物質(zhì)所進(jìn)行的免疫熒光的研究。編輯本段冰凍切片的制作方法低溫恒冷箱冷凍切片制作法以ShandonAs620E型恒溫箱冷凍切片機(jī)為例，該機(jī)的箱面上有電子控制板，裝有即時(shí)冷凍鍵和除霜鍵，啟動(dòng)即時(shí)冷凍鍵，機(jī)器馬上進(jìn)行工作狀態(tài)，并可持續(xù)10mins。啟動(dòng)即時(shí)除霜鍵，可將工作間頂部后面的制冷柵上的霜除掉，并可持續(xù)15mins。有照明鍵一個(gè)，啟動(dòng)該鍵可照明工作間，有利工作及觀(guān)察組織的冰凍狀況。配有消毒鍵一個(gè)，當(dāng)進(jìn)行歐陽(yáng)物創(chuàng)編2021.02.07歐陽(yáng)物創(chuàng)編2021.02.07一周的工作或者一天的工作后，啟動(dòng)該鍵，可對(duì)工作間進(jìn)行消毒。當(dāng)每天工作完畢時(shí)，可啟動(dòng)密鎖鍵，鎖住工作間。除此之外，箱面的左邊有四個(gè)按鍵，兩個(gè)為快速自動(dòng)進(jìn)退鍵，兩個(gè)為微小進(jìn)退鍵，還有一個(gè)手動(dòng)旋鈕，調(diào)節(jié)修組織塊時(shí)的進(jìn)退。冷凍箱內(nèi)左邊的冷凍臺(tái)，溫度可達(dá)-60℃左右，冷凍箱的中間為一臺(tái)切片機(jī)，工作間的溫度在0-30℃間可任意調(diào)節(jié)，并在箱面上的熒屏顯示出來(lái)。操作方法及步驟①取材，未能固定的組織取材，不能太大太厚，厚者冰凍費(fèi)時(shí)，大者難以切完整，最好為24x24x2mm。②取出組織支承器，放平擺好組織，周邊滴上包埋劑，速放于冷凍臺(tái)上，冰凍。小組織的應(yīng)先取一支承器，滴上包埋劑讓其冷凍，形成一個(gè)小臺(tái)后，再放上細(xì)小組織，滴上包埋劑。③將冷凍好的組織塊，夾緊于切片機(jī)持承器上，啟動(dòng)粗進(jìn)退鍵，轉(zhuǎn)動(dòng)旋鈕，將組織修平。④調(diào)好欲切的厚度，根據(jù)不同的組織而定，原則上是細(xì)胞密集的薄切，纖維多細(xì)胞稀的可稍為厚切，一般在5?10um間。歐陽(yáng)物創(chuàng)編2021.02.07歐陽(yáng)物創(chuàng)編

2021.02.07⑤調(diào)好防卷板。制作冰凍切片，關(guān)鍵在于防卷板的調(diào)節(jié)上，這就要求操作者要細(xì)心，準(zhǔn)確地將其調(diào)較好，調(diào)校至適當(dāng)?shù)奈恢?。切片時(shí)，切出的切片能在第一時(shí)間順利地通過(guò)刀防卷板間的通道，平整地躺在持刀器的鐵板上。這時(shí)便可掀起防卷板，取一載玻片，將其附貼上即可。⑥應(yīng)視不同的組織選擇不同的冷凍度。冷凍箱中冷凍度的高低，主要根據(jù)不同的組織而定，不能一概而論。如：切未經(jīng)固定的腦組織，肝組織和淋巴結(jié)時(shí)，冷凍箱中的溫度不能調(diào)太低，在-10--15℃左右，切甲狀腺、脾、腎、肌肉等組織時(shí)，可調(diào)在-15?20℃左右，切帶脂肪的組織時(shí)，應(yīng)調(diào)至-25℃左右，切含大量的脂肪時(shí)，應(yīng)調(diào)至-30℃。冰凍切片時(shí)的注意事項(xiàng)①防卷板及切片刀和持刀架上的板塊應(yīng)保持干凈，需經(jīng)常用毛筆挑除切片殘余和用柔軟的紙張擦。有時(shí)需要每切完一張切片后就用紙擦一次。因?yàn)檫@個(gè)地方是切片通過(guò)和附貼的地方，如果有殘余的包埋劑粘于刀或板上，將會(huì)破壞甚至撕裂切片，便切片不能完整切出。②多例多塊組織同時(shí)需做冰凍切片時(shí)，可各自放于不同的支承器上，于冷凍臺(tái)上凍起來(lái)，然后依據(jù)不同的編號(hào)，依序切片，這樣做既不費(fèi)時(shí)也不會(huì)亂。歐陽(yáng)物創(chuàng)編2021.02.07歐陽(yáng)物創(chuàng)編2021.02.07③放置組織冰凍前，應(yīng)視組織的形狀及走勢(shì)來(lái)放置，所謂〃砍柴看柴勢(shì)〃，切片也是如此，如果胡亂放置，就不能收到很好的效果。④組織塊不須經(jīng)各種固定液固定，尤其是含水的固定液，在未達(dá)到固定前，更不能使用。臨床快速冰凍切片，不須要預(yù)先固定，一是為了爭(zhēng)取時(shí)間，二是固定了的組織，反而增加了切片的難度。如果使用未完全固定的組織做冰凍切片，就會(huì)出現(xiàn)冰晶。這是因?yàn)楹墓潭ㄒ涸诮M織未經(jīng)固定前，其中的水份也可滲入到組織中去，當(dāng)冰凍發(fā)生時(shí)，這些水份就存留于組織中，形成了冰晶。⑤當(dāng)切片時(shí)，如果發(fā)現(xiàn)冰凍過(guò)度時(shí)，可將冰凍的組織連同支承器取出來(lái)，在室溫停留片刻，再行切片，或者用口中哈氣，或者用大拇指按壓組織塊，以此來(lái)軟化組織，再行切片。另者，調(diào)高冰凍點(diǎn)。⑥用于附貼切片的載玻片，不能存放于冷凍處，于室溫存放即可。因?yàn)楫?dāng)附貼切片時(shí)，從室溫中取出的載玻片與冷凍箱中的切片有一種溫度差，當(dāng)溫度較高的載玻片附貼上溫度較低的切片時(shí)，由于兩種物質(zhì)間溫度的差別，當(dāng)它們碰撞在一起時(shí)，分子彼此間發(fā)生轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生了一種吸附力，使切片與載玻片牢固地附貼在一起。如果使用冷藏的載玻片來(lái)附貼切片，由于溫度相同，沒(méi)有發(fā)生上述的現(xiàn)象。歐陽(yáng)物創(chuàng)編2021.02.07歐陽(yáng)物創(chuàng)編2021.02.07冰凍切片的快速染色法冰凍切片附貼于載玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定1分鐘后即可染色。以往，為了防止切片脫落，當(dāng)切片附貼于載玻片后，即用電吹風(fēng)吹干后再固定。根據(jù)實(shí)驗(yàn)對(duì)比認(rèn)為這種做法欠妥未經(jīng)固定的切片，強(qiáng)熱作用后，蛋白發(fā)生變性，核內(nèi)含有的物質(zhì)由于熱的作用融合在一起，染色后鏡下分辨不出核內(nèi)的各種物質(zhì)。冰凍切片附貼于載玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定，這樣可以使切片中細(xì)胞內(nèi)各種物質(zhì)都在沒(méi)有任何變化的情況下被固定起來(lái)，核染色質(zhì)清晰，核仁明顯，其他物質(zhì)都完好保存。方法：①切片固定30秒-1分鐘。②水洗。③染蘇木素3-5分鐘。④分化。于堿水中返藍(lán)20秒。伊紅染色10-20秒。⑦脫水，透明，中性樹(shù)膠封固。冰凍組織1-2分鐘，切片1分鐘，固定1分鐘，染色共五分鐘。總共在10分鐘內(nèi)完成快速制片過(guò)程，結(jié)果與石蠟切片不相上下。歐陽(yáng)物創(chuàng)編2021.02.07歐陽(yáng)物創(chuàng)編2021.02.07冰凍切片的方法還有很多種，如甲醇循環(huán)的半導(dǎo)體冰凍切片法，二氧化碳冰凍切片法，半導(dǎo)體冰凍切片法和氯乙烷冰凍切片法等，這些方法在目前來(lái)說(shuō)已很少使用，因此在這里不作闡述。編輯本段優(yōu)缺點(diǎn)（一）優(yōu)點(diǎn)：?簡(jiǎn)便，可以不需要對(duì)組織固定、脫水、透明、包埋等手續(xù)即可進(jìn)行切片，減少了一些中間環(huán)節(jié)。?快速，用時(shí)短。?組織變化不大。4?能很好保存脂肪，類(lèi)脂等成分。5?能夠比較完好地保存各種抗原活性及酶類(lèi)，特別是對(duì)于那些對(duì)有機(jī)溶劑或熱的溫度耐受能力較差的細(xì)胞膜表面抗原和水解酶保存較好。（二）缺點(diǎn)：1?不容易做連續(xù)切片。2?切取的組織不能過(guò)大，組織過(guò)大不容易凍結(jié)或者組織凍結(jié)不均，影響切片及染色效果。3?不容易制作較薄的切片。歐陽(yáng)物創(chuàng)編2021.02.07歐陽(yáng)物創(chuàng)編2021.02.074?組織塊在凍結(jié)過(guò)程中容易產(chǎn)生水的結(jié)晶而影響細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)及抗原物質(zhì)的定位，并且組織結(jié)構(gòu)也不如石蠟切片清晰。編輯本段冰凍切片操作中的注意事項(xiàng)（1）新鮮的組織制備組織盡可能新鮮、驟冷愈快愈好，才能避免冰晶，常用的驟冷劑有：①CO2氣（-78℃）②丙酮干冰冷卻的輕石油醐、乙烷和庚烷（-80℃）③液氮（-190℃）④液氮冷卻的丙烷（-19℃）。液氮適用于組織化學(xué)，較安全。缺點(diǎn)：組織塊易發(fā)生龜裂。（2）固定組織的制備為防止水解酶和其他物質(zhì)的移位、彌散，常用4℃、24小時(shí)的甲醛固定能很好地保存酶類(lèi)。但對(duì)許多脫氫酶和轉(zhuǎn)移酶能滅活。故不宜使用，低溫，冷甲醛短時(shí)間固定（10分鐘左右）固定，可顯示琥珀酸脫氫酶。電鏡出現(xiàn)后，需要保存細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)，以4%緩沖戊二醛（25%戊二醛16ml;0.1M二甲腫酸（pH7）84ml;蔗糖8g）固定較好。這些固定液主要用于水解酶，而不適于許多氧化還原酶和轉(zhuǎn)移酶。歐陽(yáng)物創(chuàng)編2021.02.07歐陽(yáng)物創(chuàng)編2021.02.07(3)恒冷箱溫度一般在冷凍后10分鐘，到接近冷室溫度時(shí)再切，一般組織在-15?-20℃切片最易成功。每種組織有其合適的切片溫度、刀的溫度和冷室溫度，Pearse及Bancroft的經(jīng)驗(yàn)如下：組織刀溫度組織溫度恒冷箱溫度肝-18-10-5腎-15-8-5皮膚-35-10-5腦-18-5-5固定組織一般高3-5度(4)切片機(jī)的使用抗卷板的前緣與刀面須有足夠的距離，使切片平滑通過(guò)?？咕戆迓愿哂诘睹娴淖罡唿c(diǎn)。可憑經(jīng)驗(yàn)調(diào)整刀對(duì)組織的