GB/T 19563-2004大豆種子品種鑒定實驗方法簡單重復(fù)序列間區(qū)法

ICS65.020.01B21中華人民共和國國家標準GB/T19563—2004大豆種子品種鑒定實驗方法簡單重復(fù)序列間區(qū)法Experimentalidentifieationmethodforvarietyofsoybeanseed-ISSR2004-06-22發(fā)布2004-12-01實施中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布中國國家標準化管理委員會

GB/T19563一2004前本標準的附錄A為規(guī)范性附錄。本標準由國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局提出本標準起草單位：國家農(nóng)業(yè)標準化監(jiān)測與研究中心（黑龍江)黑龍江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局.本標準主要起草人：王慶貴、徐品、姜雯、李光宇、石紹業(yè)、郝兆軍。

GB/T19563—2004目前.我國農(nóng)作物種子的鑒定多采用種植鑒定、快速測定法(苯酚染色法、大豆種皮愈創(chuàng)木酚染色法、高梁種子氫氧化鉀-漂白粉測定法、燕麥種子熒光測定法、小麥種子氫氧化鉀測定法)、聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定大麥、小麥種子純度等。這些方法所需的檢驗周期較長.雖然電泳法所需時間短，但不具備分子水平鑒定的諸多優(yōu)點。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，特別是20世紀90年代以來.分子生物學(xué)的相關(guān)技術(shù)已被廣泛應(yīng)用.其檢測對象為DNA大分子——生物的遺傳基礎(chǔ)。以DNA為檢測對象,具有許多其他檢測水平所不具備的優(yōu)點：首先.可供探測DNA標記的數(shù)量是無限的.這是同工酶技術(shù)所無法比擬的；其二.DNA分析技術(shù)不像其他技術(shù)那樣隨組織或發(fā)育階段而異，植物體任何部位、任何時期提供的DNA均可用于分析，其檢測結(jié)果都是一樣的:第三.DNA分析不受環(huán)境影響,其變異只源干等位基因DNA序列的變異.這和穩(wěn)定性便于揭示品種間的遺傳變異，從而排除了環(huán)境變異所造成的表型變異。基于上述優(yōu)點,DNA分析技術(shù)是農(nóng)、林、牧、漁等品種鑒定的先進方法

GB/T19563-2004大豆種子品種鑒定實驗方法簡單重復(fù)序列間區(qū)法1范圍本標準規(guī)定了大豆種子品種鑒定的實驗方法。本標準適用于利用簡單重復(fù)序列間區(qū)（ISSR)法對大豆種子品種鑒定的實驗過程2術(shù)語、定義和縮略語2.1術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本標準2.1.1聚合酶鏈式反應(yīng)polymerasechainreaction少至一個拷貝的特定堿基順序的DNA片斷在體外花費幾個小時即可擴增出數(shù)百萬個分子的酶催化反應(yīng)，即DNA合成反應(yīng)2.1.2簡單重復(fù)序列間區(qū)inter-simplesequencerepeat是在PCR技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種分子標記和檢測方法·根據(jù)某個簡單重復(fù)序列（微衛(wèi)星位點）設(shè)計出一系列特異引物，通過PCR反應(yīng)擴增微衛(wèi)星位點間隔的堿基順序,以檢測其擴增片段長度的多態(tài)性。2.1.3微衛(wèi)星DNAmmicrosatelliteDNA是一類由幾個核苷酸(一般為1個～5個）為重復(fù)單位的長達幾十至幾百個核音酸的串聯(lián)重復(fù)慶列。2.1.4核谷酸nuclcotide是構(gòu)成核酸的基本單元，由三部分組成：五碳糖、磷酸和環(huán)狀的含氮堿基2.1.5引物primer一條互補結(jié)合在模板DNA鏈上的短的單鏈,提供3-OH末端作為DNA合成的起點，延伸合成模板DNA的互補鏈。2.1.6引物擴增多態(tài)性primeramplifiedpolymorphism-對引物在兩個或兩個以上不同材料基因組DNA之間擴增，得到數(shù)目不同或長度不同的DNA片斷。2.2縮略語下列縮略語適用于本標準ISSR簡單重復(fù)序列間區(qū)（Inter-SimpleSequence