標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 19915.7-2005 豬鏈球菌2型熒光PCR檢測(cè)方法》是中國(guó)關(guān)于豬鏈球菌2型檢測(cè)的一項(xiàng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，旨在為相關(guān)領(lǐng)域提供一種快速、靈敏且特異的檢測(cè)手段。該標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了利用熒光聚合酶鏈反應(yīng)（Fluorescent Polymerase Chain Reaction, F-PCR）技術(shù)來(lái)鑒定和定量檢測(cè)豬鏈球菌2型的方法步驟、所需材料、操作條件及質(zhì)量控制要求，以確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。下面是該標(biāo)準(zhǔn)的主要內(nèi)容概述：

標(biāo)準(zhǔn)適用范圍

本標(biāo)準(zhǔn)適用于生豬臨床樣本（如血液、組織、分泌物等）中豬鏈球菌2型的定性及定量檢測(cè)，對(duì)于豬鏈球菌病的診斷、疫情監(jiān)測(cè)及防控具有重要意義。

檢測(cè)原理

熒光PCR技術(shù)基于傳統(tǒng)PCR擴(kuò)增原理，通過(guò)在反應(yīng)體系中加入特異性的熒光探針或熒光染料，實(shí)現(xiàn)在DNA復(fù)制過(guò)程中熒光信號(hào)的累積，進(jìn)而通過(guò)對(duì)熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)來(lái)定量分析目標(biāo)DNA序列的存在及其初始濃度。

關(guān)鍵要素

  1. 引物設(shè)計(jì)：標(biāo)準(zhǔn)中詳細(xì)說(shuō)明了設(shè)計(jì)針對(duì)豬鏈球菌2型特異性基因序列的引物原則和要求，確保檢測(cè)的特異性和敏感性。
  2. 樣本處理：規(guī)范了樣本采集、保存、前處理及核酸提取的具體步驟，以減少污染風(fēng)險(xiǎn)并保證樣本質(zhì)量。
  3. 反應(yīng)體系與條件：列出了熒光PCR反應(yīng)所需的各種試劑成分比例、反應(yīng)體積及最佳循環(huán)參數(shù)（包括退火溫度、延伸時(shí)間等），以優(yōu)化檢測(cè)效率。
  4. 熒光檢測(cè)與數(shù)據(jù)分析：闡述了熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)方法，以及如何根據(jù)熒光曲線分析判斷陽(yáng)性或陰性結(jié)果，并提供了Ct值（循環(huán)閾值）的計(jì)算方法用于定量分析。
  5. 質(zhì)量控制：強(qiáng)調(diào)了實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的內(nèi)外對(duì)照使用、儀器校準(zhǔn)及實(shí)驗(yàn)人員培訓(xùn)的重要性，以確保檢測(cè)結(jié)果的可靠性。

結(jié)果判定與報(bào)告

標(biāo)準(zhǔn)明確了陽(yáng)性和陰性結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)，要求報(bào)告中應(yīng)包含樣本信息、檢測(cè)方法、實(shí)驗(yàn)日期、檢測(cè)結(jié)果及必要的質(zhì)量控制信息。

注意事項(xiàng)

雖然未直接要求總結(jié)，但理解上需注意，執(zhí)行該標(biāo)準(zhǔn)時(shí)需嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室生物安全規(guī)程，確保人員及環(huán)境安全；同時(shí)，定期進(jìn)行方法驗(yàn)證和性能確認(rèn)，以維持檢測(cè)系統(tǒng)的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性。

該標(biāo)準(zhǔn)通過(guò)上述內(nèi)容，為豬鏈球菌2型的熒光PCR檢測(cè)提供了科學(xué)、統(tǒng)一的技術(shù)指導(dǎo)，有助于提升我國(guó)動(dòng)物疫病防控水平和食品安全管理能力。


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  • 2005-09-27 頒布
  • 2005-11-01 實(shí)施
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文檔簡(jiǎn)介

ICS07.100.30C53中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T19915.7—2005豬鏈球菌2型熒光PCR檢測(cè)方法Methodofthereal-timePCRforthedetectionofStreptococcussuistype22005-09-27發(fā)布2005-11-01實(shí)施中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T19915.7—2005前本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A是規(guī)范性附錄，附錄B是資料性附錄本標(biāo)準(zhǔn)由國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)動(dòng)物防疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中華人民共和國(guó)北京出入境檢驗(yàn)檢疫局、中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張鶴曉、宋立、高志強(qiáng)、寧宜寶、喬彩霞、王甲正、楊承槐、吳丹、谷強(qiáng)本標(biāo)準(zhǔn)系首次發(fā)布的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T19915.7—2005豬鏈球菌2型熒光PCR檢測(cè)方法范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬鏈球菌2型熒光PCR檢測(cè)方法本標(biāo)準(zhǔn)適用于增菌培養(yǎng)物、疑似病料及生豬斌子、豬組織樣品中豬鏈球菌2型的檢測(cè)規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勒誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn).然而.鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T19438.1—2004禽流感病毒通用熒光RT-PCR檢測(cè)方法縮略語(yǔ)本標(biāo)準(zhǔn)采用下列縮略語(yǔ)：熒光PCR熒光聚合酶鏈反應(yīng)C值每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)量達(dá)到設(shè)定的閩值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)圈數(shù)DNA脫氧核糖核酸TA酶TagDNA聚合酶PBS磷酸鹽緩沖生理鹽水原理采用TaqMan方法,在比對(duì)豬鏈球菌2型英膜抗原2」基因（cDs2J)序列的基礎(chǔ)上.設(shè)計(jì)針對(duì)該基因的特異性引物和特異性的熒光雙標(biāo)記探針進(jìn)行配對(duì)。探針5端標(biāo)記FAM熒光素為報(bào)告熒光基團(tuán)(用R表示）.3'端標(biāo)記TAMRA熒光素為澤滅熒光基團(tuán)(用Q表示）,它在近距離內(nèi)能吸收5°端熒光基團(tuán)發(fā)出的熒光信號(hào)。PCR反應(yīng)進(jìn)入退火階段時(shí),引物和探針同時(shí)與目的基因片段結(jié)合.此時(shí)探針上R基團(tuán)發(fā)出的熒光信號(hào)被Q基團(tuán)所吸收,儀器檢測(cè)不到熒光信號(hào)；而反應(yīng)進(jìn)行到延伸階段時(shí).Taq酶的5"→3的外切核酸酶功能將探針降解。這樣探針上的R基團(tuán)游離出來(lái),所發(fā)出的熒光不再為Q所吸收而被檢測(cè)儀所接收。隨著PCR反應(yīng)的循環(huán)進(jìn)行,PCR產(chǎn)物與熒光信號(hào)的增長(zhǎng)呈現(xiàn)對(duì)應(yīng)關(guān)系5豬鏈球菌2型熒光PCR檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)化設(shè)置與管理豬鏈球苗2型熒光PCR檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)化設(shè)置與管理見(jiàn)GB/T19438.1—2004中附錄C。試劑和材料6.1試劑除另有說(shuō)明，所用試劑均為分析純。6.1.1無(wú)水乙醇：-20℃預(yù)冷。6.1.275%乙醇:用新開(kāi)啟的無(wú)水乙醇和無(wú)DNA酶的滅菌純化

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