實(shí)驗(yàn)二培養(yǎng)基配制相關(guān)器皿的包扎及消毒滅菌

實(shí)驗(yàn)二培養(yǎng)基配制相關(guān)器皿的包扎及消毒滅菌第一頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一

培養(yǎng)基及無菌水的制備第二頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日一、培養(yǎng)基的相關(guān)知識(shí)介紹1、培養(yǎng)基的定義和組成培養(yǎng)基：指由人工配制的、適合微生物生長(zhǎng)繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物用的混合營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)（反映出培養(yǎng)基的2個(gè)作用？）。包括六大營(yíng)養(yǎng)要素：碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子、能源、水。第三頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日2、培養(yǎng)基制備原則和方法四個(gè)原則：目的明確；營(yíng)養(yǎng)協(xié)調(diào)；物理化學(xué)條件適宜；經(jīng)濟(jì)節(jié)約。C/N：指在微生物培養(yǎng)基中所含的碳源中碳原子摩爾數(shù)與氮源中的氮原子摩爾數(shù)之比。四種方法：生態(tài)模擬；參閱文獻(xiàn)；精心設(shè)計(jì)；試驗(yàn)比較。第四頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日3、物理化學(xué)條件適宜的說明pH值：滲透壓和水活度（aw）：

在同溫同壓下，某溶液的蒸氣壓（P）與純水蒸氣壓（P0）之比。氧化還原電位：

針對(duì)厭氧菌分離特別需要注意（不常加入半胱氨酸、巰基乙醇酸鈉等？）。第五頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日4、培養(yǎng)基的分類⑴按成分分——對(duì)成分種類、量是否清楚

天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基（組合培養(yǎng)基）半合成培養(yǎng)基（也稱半組合培養(yǎng)基）⑵按物理狀態(tài)分

固體培養(yǎng)基（凝固劑的使用；固體基質(zhì)的使用）半固體培養(yǎng)基（凝固劑使用量較低）液體培養(yǎng)基（工業(yè)生產(chǎn)中的重要性）脫水培養(yǎng)基（也稱預(yù)制干燥培養(yǎng)基）第六頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日（3）按培養(yǎng)基對(duì)微生物的功能分基礎(chǔ)培養(yǎng)基：含有一般微生物生長(zhǎng)繁殖需要的基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。選擇性培養(yǎng)基：根據(jù)某種微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或其對(duì)某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基，具有使混合菌樣中的劣勢(shì)菌變成優(yōu)勢(shì)菌的功能，廣泛用于菌種篩選等領(lǐng)域?！巴镀渌?、取其所抗”。——高通量篩選的建立。鑒別性培養(yǎng)基：在培養(yǎng)基中加入有能與目的菌的無色代產(chǎn)物發(fā)生顯色反應(yīng)的指示劑，從而達(dá)到只須用肉眼辨別顏色就能方便地從近似菌落中找出目的菌菌落的培養(yǎng)基。——直觀、專一性（伊紅美蘭培養(yǎng)基，EMB）第七頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日大腸桿菌在EMB培養(yǎng)基上的形態(tài)第八頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日二、培養(yǎng)基的配方一個(gè)實(shí)驗(yàn)班共配置3種固體培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基高氏1號(hào)培養(yǎng)基馬丁氏培養(yǎng)基按照老師的劃分進(jìn)行，每個(gè)實(shí)驗(yàn)小組都要準(zhǔn)備，幾個(gè)實(shí)驗(yàn)小組配1種培養(yǎng)基，供全班使用。第九頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日1、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基

——500ml/組

（分離、培養(yǎng)細(xì)菌用）牛肉膏3.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g水1000ml瓊脂15～20gpH7.4～7.6第十頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日

可溶性淀粉20gNaCl0.5gKNO31.0gK2HPO4·3H2O

0.5gMgSO4·7H2O0.5gFeSO4·7H2O0.01g

瓊脂15～25g

水1000mlpH7.4～7.6

臨用時(shí)無菌操作在500ml培養(yǎng)基中加入3%的K2Cr2O7溶液0.7ml。2、高氏1號(hào)培養(yǎng)基——500ml/組

（分離、培養(yǎng)放線菌用）第十一頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日KH2PO41gMgSO4·7H2O0.5g蛋白胨5g葡萄糖10g瓊脂20g水1000mlpH自然配好后在此培養(yǎng)基中，按1000ml加入1%孟加拉紅水溶液3.3ml。臨用時(shí)以無菌操作在100ml培養(yǎng)基中加入1%的鏈霉素0.3ml，使其終濃度為30ug/ml。3、馬丁氏培養(yǎng)基——500ml/組

（分離、培養(yǎng)真菌用）第十二頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日三、培養(yǎng)基配制的步驟1、計(jì)算按照配方要求（一般為1000ml的量）和實(shí)際配制培養(yǎng)基的量，計(jì)算出不同組分需要的量。第十三頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日2、稱量、溶解按培養(yǎng)基配方在三角瓶中先加水（如無加入后大幅度改變?cè)w積的物質(zhì)，可以把水加足），然后依次準(zhǔn)確稱取各藥品并分別逐一溶解于其中（瓊脂需加熱溶解），最后補(bǔ)充水到所需體積。（注意：各成分之間發(fā)生化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生不溶的沉淀；培養(yǎng)基成分中有影響pH試紙的顯色的物質(zhì)，調(diào)pH值后再加入）第十四頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日3、調(diào)pH

用5~10%NaOH、1~5%HCl溶液將培養(yǎng)基的pH調(diào)到所需范圍，根據(jù)需要用精密pH試紙或pH計(jì)來確定。

4、包扎（有一定規(guī)范要求）

5、滅菌（高壓蒸汽滅菌：121.3℃,15～30min）第十五頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日四、培養(yǎng)基配制過程中需注

意的事項(xiàng)先加水——易產(chǎn)生沉淀逐一溶解——易產(chǎn)生沉淀調(diào)節(jié)pH——容易忘記加塞滅菌（或過濾除菌）——及時(shí)滅菌煮過或加熱過的培養(yǎng)基，注意水的蒸發(fā)損失——容量補(bǔ)足第十六頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日五、培養(yǎng)基配制中的2點(diǎn)說明1、量微的藥品（學(xué)生實(shí)驗(yàn)使用的天平精準(zhǔn)度低，無法稱量準(zhǔn)確），可以溶液的形式加入（先配制成一定濃度的溶液）；2、粘稠的藥品和物品，稱好后與稱量紙一起放入溶液中，待藥品溶解后取出稱量紙；或利用減稱量法完成（從總藥品量中以減量稱出所需要的量）。第十七頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日六、無菌水的準(zhǔn)備經(jīng)滅菌處理后的蒸餾水或自來水。1、量取90mL蒸餾水在250mL三角瓶，內(nèi)加玻珠（10粒左右）1瓶2、吸取9mL蒸餾水在18*180試管中

6～7支包扎后滅菌。第十八頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日注意！！1、標(biāo)記（記號(hào)筆）寫在器皿壁或外包裝紙上（如還需要高壓蒸汽滅菌，只能寫在外包裝紙上）；2、不要直接寫在瓶（管）塞或包裝棉布上。第十九頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)內(nèi)容二

消毒與滅菌第二十頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日一、消毒、滅菌的定義和常見方法1、消毒：指消滅病原菌和有害微生物的營(yíng)養(yǎng)體。2、滅菌：指殺滅一切微生物的營(yíng)養(yǎng)體、芽孢和孢子。常見的滅菌方法：

加熱法：包括干熱滅菌和濕熱滅菌過濾除菌輻射滅菌化學(xué)藥品滅菌第二十一頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日高溫滅菌或消毒的方法第二十二頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日過濾除菌技術(shù)（正壓和負(fù)壓之分）濾膜過濾器——微孔濾膜（醋酸纖維、硝酸纖維、火棉膠、有機(jī)大分子物質(zhì)），孔徑0.22和0.45um。玻璃濾器——玻璃粉燒結(jié)板（G1~G6）蔡氏（Seitz）濾器——多層石棉纖維板（整體為金屬制成）其它（不常見）——陶瓷、硅藻土制濾燭形：

——張伯倫（Chamberland）濾器

——伯克菲爾德（Berkefeld）濾器

——曼德勒爾（Mandler）濾器第二十三頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日膜過濾裝置第二十四頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日不耐熱的液體培養(yǎng)基的除（滅）菌第二十五頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日膜過濾裝置第二十六頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日細(xì)菌截留于膜過濾器濾膜表面第二十七頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日二、加熱滅菌的方法1、干熱滅菌法：火焰灼燒法烘箱內(nèi)熱空氣滅菌法2、濕熱滅菌（消毒）法：常壓下：巴氏消毒法；煮沸消毒法；間歇滅菌法。加壓下：常規(guī)加壓滅菌法；連續(xù)加壓滅菌法。第二十八頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日三、干熱滅菌火焰灼燒滅菌和熱空氣滅菌兩種方法。通常所說的干熱滅菌是在電熱干燥箱內(nèi)利用高溫干燥空氣（160~180℃）進(jìn)行滅菌，此法適用于玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿等）的滅菌。第二十九頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日干熱滅菌需要注意的事項(xiàng)1、不能對(duì)塑料器皿和培養(yǎng)基滅菌；2、控制好溫度和時(shí)間（160~180℃，2小時(shí)），防止包扎的報(bào)紙焦糊；3、滅菌過程（未完全冷下來，60℃以下）不要打開烘箱門，防止報(bào)紙著火或玻璃器皿遇冷爆裂。第三十頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日四、高壓蒸汽滅菌鍋的

結(jié)構(gòu)及使用第三十一頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日高壓蒸汽滅菌的原理高壓蒸汽滅菌器是利用加壓的飽和蒸汽（潛熱）對(duì)物品、器械、藥液等滅菌的設(shè)備，適用于科學(xué)研究、醫(yī)療衛(wèi)生、食品等實(shí)驗(yàn)室或工廠使用——造成蛋白質(zhì)等變性失活。潛熱是指當(dāng)1g100℃的水蒸汽變成1g100℃水時(shí)，釋放出2255.2J（1卡=4.184焦耳）的熱量。各種高壓蒸汽滅菌器之間的區(qū)別只在于自動(dòng)化程度的高低（水位控制、溫度恒定控制、時(shí)間控制、自動(dòng)排放冷空氣、程序化顯示）飽和蒸汽壓壓力指示溫度直接利用溫度探測(cè)器指示溫度第三十二頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日典型的高壓蒸汽滅菌鍋縱剖面結(jié)構(gòu)壓力調(diào)節(jié)器安全閥排氣口控制柄記錄儀門墊圈放電器蒸汽閥蒸汽夾層阻板蒸汽供給蒸汽供應(yīng)閥溫度感應(yīng)器蒸汽凝汽瓣廢汽冷凝器蒸汽通入夾層蒸汽由夾層到滅菌室夾層冷凝水收集口蒸汽由夾層進(jìn)入滅菌室和蒸汽排出口第三十三頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日臥式滅菌鍋示意圖（簡(jiǎn)圖）蒸汽進(jìn)口滅菌過程出氣口（冷空氣和蒸汽）滅菌時(shí)間到排汽口壓力表蒸汽排氣閥溫度計(jì)閥蒸汽供應(yīng)閥門消毒室夾套（層）第三十四頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日

立式壓力滅菌器第三十五頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日手提式滅菌鍋第三十六頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日臥式矩型和圓型壓力蒸汽消毒器第三十七頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日第三十八頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日高壓蒸汽滅菌過程：

1、取出內(nèi)筒，檢查水位；2、加水至淹過電發(fā)熱管和內(nèi)筒支架；3、放入內(nèi)筒，并在其中放入需滅菌物品（要求松散）；4、加蓋（對(duì)稱旋緊），打開放汽閥；5、加熱（有內(nèi)外兩種），升溫；6、排除冷空氣——由放汽閥冒汽3~5分鐘；7、關(guān)閉放汽閥（有些滅菌鍋滅菌過程中一直保持較小排氣或到一定溫度自動(dòng)關(guān)閉），加壓升溫至所需溫度或壓力；8、保溫定時(shí)至所需時(shí)間；9、不再加熱，降溫至壓力表為“0”，打開放汽閥；10、開蓋取物（注意蒸汽燙傷）。第三十九頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日空氣排除度對(duì)滅菌溫度的影響壓力表讀數(shù)鍋內(nèi)溫度（℃）kg/cm2磅/吋2MPa飽和蒸汽排除1/2空氣不排除空氣0.3550.031108.894720.70110.076115.6110901.05150.108121.31121001.40200.142126.21181091.75250.172130.01241152.10300.213134.6128121第四十頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日一些細(xì)菌芽孢濕熱滅菌所需時(shí)間第四十一頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日消毒、滅菌的生物指示菌嗜熱脂肪芽孢桿菌（Bacillusstearothermophilus）結(jié)核分枝桿菌——致病菌指示菌（Mycobacteriumtuberculosis沙門氏菌——致病菌指示菌（通用檢測(cè)）（Salmonellaspp）第四十二頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日高壓蒸汽滅菌效果的監(jiān)測(cè)方法

（3種）1、工藝（程序）監(jiān)測(cè)——壓力表、溫度計(jì)等，最常見，每次都使用；2、化學(xué)指示監(jiān)測(cè)——特定化合物熔點(diǎn)（熔化前后晶體形態(tài)不同，硫磺熔點(diǎn)115℃、乙酰替苯胺116℃、脫水琥珀酸120℃、苯甲酸122.4℃等結(jié)晶）、滅菌指示膠帶（變色反應(yīng)）；3、生物指示劑監(jiān)測(cè)——特定微生物（需經(jīng)培養(yǎng)）。第四十三頁(yè)，共五十頁(yè)，2022年，8月28日五、實(shí)驗(yàn)室常用滅菌方法1、高壓蒸汽滅菌——常用121.3℃，20min和115℃，10min兩種條件進(jìn)行；適用于耐熱性溶液、培養(yǎng)基、水和高糖、高蛋白質(zhì)培養(yǎng)基的滅菌；2、熱空氣干熱滅菌——160~180℃，2hr；適用于玻璃器皿和金屬工具的滅菌；3、灼燒滅菌——