GB/T 22916-2008水泡性口炎病毒熒光RT-PCR檢測方法

犐犆犛１１．２２０

犅４１

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

犌犅／犜２２９１６—２００８

水泡性口炎病毒熒光犚犜犘犆犚檢測方法

犘狉狅狋狅犮狅犾狅犳犳犾狌狅狉狅犵犲狀犻犮犚犜犘犆犚犳狅狉狏犲狊犻犮狌犾犪狉狊狋狅犿犪狋犻狋犻狊狏犻狉狌狊

２００８１２３１發(fā)布２００９０５０１實(shí)施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局

發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

書

犌犅／犜２２９１６—２００８

前言

本標(biāo)準(zhǔn)參考了世界動物衛(wèi)生組織（ＯＩＥ）《陸生動物診斷試驗(yàn)和疫苗手冊（哺乳動物、禽鳥與蜜蜂）》

（第５版）。

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄Ａ為規(guī)范性附錄，附錄Ｂ為資料性附錄。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國動物防疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中華人民共和國深圳出入境檢驗(yàn)檢疫局、中華人民共和國云南出入境檢驗(yàn)檢

疫局。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：花群義、周曉黎、曾少靈、曹琛福、詹愛軍、張彩虹、林慶燕、陳兵、楊云慶、孫潔。

Ⅰ

書

犌犅／犜２２９１６—２００８

水泡性口炎病毒熒光犚犜犘犆犚檢測方法

１范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水泡性口炎病毒熒光ＲＴＰＣＲ檢測的操作方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于動物及其產(chǎn)品中水泡性口炎病毒的檢測。

２縮略語

下列縮略語適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

２．１熒光犚犜犘犆犚

熒光反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)。

２．２犆狋值

每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號達(dá)到設(shè)定的閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。

２．３犚犖犃

核糖核酸。

２．４犇犈犘犆

焦碳酸磷酯。

２．５犘犅犛

磷酸鹽緩沖鹽水（配方見附錄Ａ）。

２．６犜犪狇酶

犜犪狇ＤＮＡ聚合酶。

２．７犞犛犞

水泡性口炎病毒。

３原理

水泡性口炎病毒屬ＲＮＡ病毒，根據(jù)水泡性口炎病毒兩型共有基因特定的序列，合成一對特異性引

物和一條特異性的熒光雙標(biāo)記探針。通過嚴(yán)格設(shè)計(jì)和篩選的引物和探針，涵蓋水泡性口炎病毒的兩個(gè)

型和突變株，為水泡性口炎病毒的特異性通用引物和探針。探針的５′端標(biāo)記ＦＡＭ熒光素，它發(fā)出的熒

光能夠被檢測儀器接收，稱為報(bào)告熒光基團(tuán)；３′端標(biāo)記ＴＡＭＲＡ熒光素，它在近距離內(nèi)能吸收５′端報(bào)告

熒光基團(tuán)發(fā)出的熒光信號，稱為淬滅熒光基團(tuán)。在擴(kuò)增時(shí)，犜犪狇酶發(fā)揮它的５′→３′端外切核酸酶的功

能，將探針?biāo)獬蓡魏塑账幔璧K，標(biāo)記在探針兩端的報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)均游離于溶液

中，儀器檢測到發(fā)出的熒光信號。

４材料與試劑

４．１儀器與器材

４．１．１熒光ＲＴＰＣＲ檢測儀。

４．１．２高速臺式冷凍離心機(jī)（離心速度１２０００ｒ／ｍｉｎ以上）。

４．１．３臺式離心機(jī)（離