案例成果講稿

2011級開題報REV3L對宮頸癌細胞化療敏感性影響的研：導師：導師簽名一、課題的主要依據(jù)及國內(nèi)外研究動全世界范圍內(nèi)，頸癌的居女性的第三位，占全球女性因腫瘤致死病因的第四位化療作為局部晚期宮頸癌的主要治療對于控制腫瘤預防腫瘤復發(fā)轉移具有重要作用。療藥物抗拒的分子生物學機制，建立新的分子靶向治療聯(lián)合化療模式以提高傳療的療效和減少等。這些因素造成了正?；蛞职┑耐蛔兓蛉笔А┑漠惓U增和表達。機體通過DNA損傷修復的多種修復途徑參與了損傷的修復并保持組的穩(wěn)定性。而這些也會造成DNA損傷修復系統(tǒng)的主要作用是針對DNA錯誤、環(huán)境損傷以及的積累效應等保持基復以及DNA雙鏈斷裂損傷修復。近年來，DNA損傷修復的另一途徑跨損傷DNA合成通路在DNA損傷環(huán)境下的生DNA合成（TranslesionDNA聚合酶ζ、κ、η、ι、μ[1]。當DNA鏈在過程中遇到損傷DNA而使停頓時，機體能啟動跨產(chǎn)生一定程度的耐受[2-4]。NojimaDT40NER通路、同源重組以及跨損傷DNA合成通的多個分別敲除后發(fā)現(xiàn)，當跨損傷DNA合成通路被抑制后,細胞對鉑的敏感性增加最多[5]DNA合成途徑在化療藥物順鉑的耐受中發(fā)揮了最重要的作用[6,7]。近年來對跨損傷DNA合成通路中一些關鍵的功能研究也證實了這一點。DNA聚合酶REV3L蛋白為催化亞基，REV7L為結構亞基[18]。REV1蛋白是TLS通路的另一重要成員，dCMPREV3L-REV7LDNA合成任務[9,10]。2005年，KuniharuDT40細胞的研究中發(fā)現(xiàn)，TLS功能缺陷的細胞對順鉑的敏感性顯著高于正常細胞，其中REV3L功能缺陷使得細胞的敏感性提高了20多倍。同時，Howell等人通過功能研究證實REV3L與人纖維原細胞9N58以及腸癌細胞HCT116對順鉑的敏感性密切相關。之后他們又發(fā)現(xiàn)REV1在人癌細胞中同樣與細胞對順鉑的敏感性有既然跨損傷DNA合成途徑在細胞對抗DNA交連中扮演了主要作用,這讓學者們想到了抑制跨損傷DNA合成途徑來提高腫瘤細胞對順鉑的敏感性。Wu等用順鉑處理人成纖維細胞1h后,REV3L逐漸增加，24h后到達峰值他們還用順鉑處理熒光素酶表達載體,隨后轉染細胞,根據(jù)熒光素酶表達來評價細胞對于鉑類藥物的修復能力。隨后，他們用反義RNA來降低人成纖維細胞內(nèi)REV3L表達,觀察到熒光素酶報告的表達降低1.4倍Lin等用RNA干擾降低結腸癌細胞REV3L表達后,鉑類處理過的熒光素酶報告表達下調2.6倍。而對DNA錯配修復途徑喪失后，報告表達變化不大，從而證明跨損傷修復途徑，尤其是DNA聚合酶ζ在修復鉑類引起的DNA損傷中扮演重要作用[14]DolesJ等發(fā)現(xiàn)在肺細胞株中利用RNA干擾技術降低REV3L、證實降低REV3L表達后在體內(nèi)同樣可以增加腫瘤細胞對順鉑的敏感性[15]。KnobelPA等發(fā)現(xiàn)REV3敲除本身即可抑制多種肺細胞株細胞株、大腸癌細胞株、人間皮瘤細胞株及大鼠間皮瘤細胞株克隆的形成，同時抑制大腸癌細胞株和細胞株的增殖，而對對照組細胞株克隆形成及增殖和正常間皮組織形成無影響[16]。Okuda等用同樣的方法抑制REV1表達后,卵巢癌細胞對鉑的敏感性增加1.5倍；而增加REV1的表達后，癌細胞對順鉑的耐藥性增加1.3-1.7倍[12]。Cheung等用RNAi抑制REV7L(MAD2L2)表達后,多種鼻咽癌細胞株對這表明損傷DNALuREV3LmiRNA介導調節(jié)作用影響肺癌易感性[17]U251MG中分別建立REV3L過表達和沉默兩種細胞模型，從正反兩個角度研究REV3L的表達是否與細胞對順鉑的敏感性有關。結果顯示，REV3L的過表達能顯著提高細胞對順鉑的耐受力，而其表達的抑制則能顯著REV3L能顯著降低線粒體介導的細胞凋亡的發(fā)生，從而影響細胞對順鉑的敏感性[18]。這些研究均表明通過抑制DNA聚合酶ζ,或跨損傷修復途徑,將會增加腫瘤細胞對鉑的敏感性[19]。、目前，對跨損傷DNA合成通路中的關鍵REV3L在宮頸癌化療能的研究國內(nèi)外尚未見本課題擬將宮頸癌細胞株REV3L敲除或增強表達后觀察癌細胞對順鉑敏感性的變化，以及凋亡相關蛋白的表達，以探討跨損傷DNA合成通路中關鍵REV3L在宮頸癌化療增敏中作LangeSS,TakataK,WoodRD.DNApolymerasesandcancer[J].NatRevCancer,2011,11(2):96-XieK,DolesJ,HemannMT,WalkerGC.Error-pronetranslesionsynthesismediatesacquiredchemo 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