實驗五卵磷脂的分離與鑒定

實驗五、蛋黃中卵磷脂的提取、純化與鑒定一、實驗?zāi)康恼莆諒孽r雞蛋中提取卵磷脂的方法與原理。卵磷脂鑒定的方法與原理。加深了解磷脂類物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)。二、實驗內(nèi)容磷脂是一類含有磷酸的脂類，機(jī)體中主要含有兩大類磷脂，由甘油構(gòu)成的磷脂稱為甘油磷脂（phosphoglyceride）；由神經(jīng)鞘氨醇構(gòu)成的磷脂，稱為鞘磷脂（sphingolipid）。磷脂依照氨基醇的不同可分：（1）磷脂酰膽堿（卵磷脂）（PC），其主要作用是控制肝脂代謝，防止脂肪肝的形成；（2）、磷脂酰乙醇胺（腦磷脂）（PE），參與血液凝結(jié)；（3）、磷脂酰絲氨酸（PS）；（4）、磷脂酰肌醇（PI）；（5）、磷脂酰甘油（PG）；（6）、二磷脂酰甘油（心磷脂）。蛋黃磷脂屬動物胚胎磷脂，含有大量的膽固醇和甘油三酯及許多人體不可缺少的營養(yǎng)物質(zhì)和微量元素。卵磷脂是生命的基礎(chǔ)物質(zhì)，人類生命自始至終都離不開它的滋養(yǎng)和保護(hù)。卵磷脂存在于每個細(xì)胞之中，更多的是集中在腦及神經(jīng)系統(tǒng)、血液循環(huán)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)以及肝、心、腎等重要器官。卵磷脂也被譽(yù)為“第三營養(yǎng)素”。三、實驗原理、方法和手段原理一：蛋黃中卵磷脂含量較多(10%左右)。卵磷脂和腦磷脂均溶于乙醚而不溶于丙酮，利用此性質(zhì)可將其與中性脂肪分離開；卵磷脂能溶于乙醇而腦磷脂不溶，利用此性質(zhì)又可將卵磷脂和腦磷脂分離。原理二：卵磷脂為白色，其所含不飽和脂肪酸易被空氣氧化而呈黃褐色。卵磷脂被堿水解后可分解為脂肪酸鹽、甘油、膽堿和磷酸鹽。甘油與硫酸氫鉀共熱，可生成具有特殊臭味的丙烯醛；磷酸鹽在酸性條件下與鉬酸銨作用，生成黃色的磷鉬酸沉淀；膽堿在堿的進(jìn)一步作用下生成無色且具有氨和魚腥氣味的三甲胺。從而完成對卵磷脂的鑒定。五、實驗條件1、實驗材料：1枚鮮雞蛋/組2、儀器與器皿：蛋清分離器、恒溫水浴鍋、蒸發(fā)皿、漏斗、鐵架臺、磁力攪拌器、天平、25mL量筒、100mL量筒、干燥試管、玻棒、小燒杯大小各2個。3、試劑：95％乙醇、乙醚、丙酮、ZnCl2、無水乙醇、濾紙、10%氫氧化鈉、3%溴的四氯化碳溶液、紅色石蕊試紙、硫酸氫鉀、鉬酸銨溶液六、實驗步驟1）、卵磷脂的提取方法二、稱取10g蛋黃于小燒杯中，加入溫?zé)岬?5%乙醇30mL，邊加邊攪拌均勻，冷卻后過濾。如濾液仍然混濁，可再次過濾至濾液透明。將濾液置于蒸發(fā)皿內(nèi)，于水浴鍋中蒸干（或用加熱套蒸干，溫度可設(shè)140℃左右），所得干物即為卵磷脂。（為了減少或盡可能不用乙醚，實驗采用方法二。）方法一、蛋黃10g放入潔凈的帶塞三角瓶中，加入95%乙醇40ml，攪拌15min后，靜置15min；然后加入10ml的乙醚，攪拌15min后，靜置15min；過濾；濾渣進(jìn)行二次提取，加入乙醇與乙醚(體積比為3：1)的混合液30ml，攪拌、靜置一定時間；第二次過濾，合并二次濾液，加熱濃縮至少量，加入一定量丙酮除雜，卵磷脂即沉淀出來，即得到卵磷脂粗品。2）、卵磷脂的純化取一定量的卵磷脂粗品，用無水乙醇溶解，得到約10%的乙醇粗提液，加入相當(dāng)于卵磷脂質(zhì)量的10%ZnCl2水溶液，室溫攪拌0.5h；分離沉淀物，加入適量冰丙酮（4℃）洗滌，攪拌1h，再用丙酮反復(fù)研洗，直到丙酮洗液為近無色止，得到白色臘狀的精卵磷脂；干燥；稱重。卵磷脂的溶解性：取干燥試管，加入少許卵磷脂，再加入5mL乙醚，用玻棒攪動使卵磷脂溶解，逐滴加入丙酮3～5mL，觀察實驗現(xiàn)象。3）、卵磷脂的溶解性試驗4）、卵磷脂的鑒定4.1三甲胺的檢驗取干燥試管一支，加入少量提取的卵磷脂以及2～5mL10%氫氧化鈉溶液，放入水浴中加熱15min，在管口放一片紅色石蕊試紙，觀察顏色有無變化，并嗅其氣味。將加熱過的溶液過濾，濾液供下面檢驗。4.2不飽和性檢驗取干凈試管一支，加入10滴上述濾液，再加入1～2滴3%溴的四氯化碳溶液，振搖試管，觀察有何現(xiàn)象產(chǎn)生。4.3磷酸的檢驗取干凈試管一支，加入10滴上述濾液和5～10滴95%乙醇溶液，然后再加入5~10滴鉬酸銨試劑，觀察現(xiàn)象；最后將試管放入熱水浴中加熱5～10min，觀察有何變化。4.4甘油的檢驗取干凈試管一支，加入少許卵磷脂和0.2g硫酸氫鉀，用試管夾夾住并先在小火上略微加熱，使卵磷脂和硫酸氫鉀混熔，然后再集中加熱，待有水蒸氣放出時，嗅有何氣味產(chǎn)生。作業(yè)1)卵磷