基礎(chǔ)化學(xué)分光光度法(年制)

新浪娛樂(lè)訊9月1日上午9:30柯震東前往臺(tái)北地檢署報(bào)道，他全程低頭媒體圍堵寸步難行。柯震東今日將進(jìn)行毛發(fā)、尿液的檢測(cè)。

第十三章

紫外-可見(jiàn)分光光度法

一、物質(zhì)的吸收光譜物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收物質(zhì)的吸收光譜二、分光光度法的基本原理透光率和吸光度Lambert-Beer定律定量分析滴定分析儀器分析紫外-可見(jiàn)分光光度法

酸堿滴定氧化還原滴定分光光度法是基于物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收而建立起來(lái)的一種分析方法。目視比色法一、紫外-可見(jiàn)分光光度法定義

研究物質(zhì)在紫外、可見(jiàn)光區(qū)的分子吸收光譜

的分析方法稱(chēng)為紫外-可見(jiàn)分光光度法，又稱(chēng)為紫外-可見(jiàn)(分子)吸收光譜法。

吸收光的波長(zhǎng)范圍：200-800nm(1)紫外光區(qū):200-400nm(2)可見(jiàn)光區(qū):400-800nm若用一連續(xù)的電磁輻射照射樣品分子，將照射前后的光強(qiáng)度變化轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)并記錄下來(lái)，就可得到光強(qiáng)度變化對(duì)波長(zhǎng)的關(guān)系曲線(xiàn)，即為分子吸收光譜。躍遷：電子受激發(fā)，從低能級(jí)轉(zhuǎn)移到高能級(jí)的過(guò)程。分子只有選擇性的吸收(hν=△E)某些波長(zhǎng)（頻率）的光才能由較低的能級(jí)躍遷到較高能級(jí)上。三、紫外-可見(jiàn)吸收光譜的產(chǎn)生二、紫外-可見(jiàn)分光光度法特點(diǎn)靈敏度較高，10-6～10-5mol/L

相對(duì)誤差，2～5％有較好的選擇性適當(dāng)?shù)剡x擇測(cè)量條件，可在多種組分共存的體系中測(cè)定一種組分操作簡(jiǎn)單，價(jià)格低，分析速度較快應(yīng)用廣泛二、物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收白光通過(guò)棱鏡色散出紅、橙、黃、綠、藍(lán)、紫等光單色光：?jiǎn)我徊ㄩL(zhǎng)的光復(fù)合光：由不同波長(zhǎng)的光組合而成的光光的互補(bǔ)：若兩種不同顏色的單色光按一定比例混合得到白光，稱(chēng)這兩種單色光為互補(bǔ)色光，這種現(xiàn)象稱(chēng)為光的互補(bǔ)。

有色溶液的顏色是它所選擇吸收光的互補(bǔ)色，吸收越多顏色越深。物質(zhì)的吸收光譜（吸收曲線(xiàn)）測(cè)量某物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)單色光的吸收程度，以波長(zhǎng)（）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)，繪制吸光度隨波長(zhǎng)的變化可得一曲線(xiàn)，此曲線(xiàn)即為吸收光譜或吸收曲線(xiàn)。吸收曲線(xiàn)的討論KMnO4溶液對(duì)不同波長(zhǎng)的光吸收程度不同，在525nm的光吸收程度最大——λmax同一物質(zhì)的吸收曲線(xiàn)是特征的。不同濃度的KMnO4溶液吸收曲線(xiàn)相似，λmax不變。不同物質(zhì)吸收曲線(xiàn)形狀不同，可以作為物質(zhì)定性分析的依據(jù)。不同濃度的同一種物質(zhì)，在某一定波長(zhǎng)下吸光度A有差異，在λmax處吸光度A的差異最大。此特性可作為物質(zhì)定量分析的依據(jù)。在λmax處吸光度隨濃度變化的幅度最大，所以測(cè)定最靈敏吸收曲線(xiàn)是定量分析中選擇入射光波長(zhǎng)的重要依據(jù)。312I0I1I0I2I2<

I1I0I3I3<

I2<

I1T1=I1I0T2=I2I0T3=I3I0T3<

T2<

T1吸光度A=-lgT=lgI0ItA3>

A2>

A1T=ItI0透光率T=ItI0透光率第二節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度法的基本原理一、透光率（透光度）和吸收度①透光率T定義：T取值為0.0%~100.0%T=0.0%：光全吸收T=100.0%：光全透過(guò)②吸光度（吸收度）AT=ItI0×100%顯然，T↑，溶液吸收度↓；T↓，溶液吸收度↑。即透光率T反映溶液對(duì)光吸收程度，通常用1/T反映吸光度。定義：A=lg1T=-lgT=lgI0ItA=-lgT,T=10-AtI0=It+Ia

+Ir吸收光反射光透過(guò)光

Ia

③T與A關(guān)系：IrA∝1/T，T=0，A=∞，T=100%，A=0二、光的吸收定律朗伯(Lambert)和比爾(Beer)分別于1760年和1852年研究吸光度Ａ與溶液厚度Ｌ和其濃度Ｃ的定量關(guān)系：朗伯定律：A=k1×b比爾定律：A=k1×bA=kbc一束平行單色光通過(guò)一均勻、非散射的吸光物質(zhì)溶液時(shí)，在入射光的波長(zhǎng)、強(qiáng)度以及溶液溫度等保持不變時(shí)，該溶液的吸光度A與其濃度C及液層厚度L的乘積成正比。①入射光為單色光，適用于可見(jiàn)、紅外、紫外光。②均勻、無(wú)散射溶液。③吸光度A具有加和性。Aa+b+c=Aa

+Ab

+Ac朗伯-比爾定律:A=lg1T=-lgT=lgI0It透光率T反映溶液對(duì)光吸收程度，T↑，溶液吸收度↓；T↓，溶液吸收度↑A=kbc朗伯-比爾定律c：mol/L

K

摩爾吸光系數(shù),L·mol–1·cm-1

c：g/L

K

a

質(zhì)量吸光系數(shù)，

L·g–1·cm-1

c：g/100mL

K

相互關(guān)系K

比吸光系數(shù)

e=aMBT=ItI0透光率吸光度A=-lgT=lgI0ItT=10-A=10-kbc分光光度法計(jì)算公式Aa+b+c=Aa

+Ab

+Ac第三節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度法

一、分光光度計(jì)光源單色器樣品室檢測(cè)器顯示1.光源在紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)中，常用的光源有兩類(lèi)：可見(jiàn)光光源，如鎢燈和鹵鎢燈；紫外光源，如氫燈和氘燈。

2.單色器

單色器以棱鏡或光柵分光，提供單色光。

3.吸收池樣品室放置各種類(lèi)型的吸收池（比色皿）和相應(yīng)的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池兩種。在紫外區(qū)須采用石英池，可見(jiàn)區(qū)一般用玻璃池。4.檢測(cè)器利用光電效應(yīng)將透過(guò)吸收池的光信號(hào)變成可測(cè)的電信號(hào)，如：光電池、光電管、光電二極管或光電倍增管(目前常用)。5.結(jié)果顯示記錄系統(tǒng)檢流計(jì)、數(shù)字顯示、微機(jī)進(jìn)行儀器自動(dòng)控制和結(jié)果處理一、定性分析與定量分析法定性分析基礎(chǔ)定量分析基礎(chǔ)物質(zhì)對(duì)光的選擇吸收ABA

在一定的實(shí)驗(yàn)條件下，物質(zhì)對(duì)光的吸收與物質(zhì)的濃度成正比。A

C增大max標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法定量分析法通過(guò)零點(diǎn)的直線(xiàn)示例

蘆丁含量測(cè)定0.710mg/25mL偏離朗伯-比爾定律的因素朗伯-比爾定律：A=kCL依據(jù)Beer定律，A與C關(guān)系應(yīng)為經(jīng)過(guò)原點(diǎn)的直線(xiàn)（一）化學(xué)因素（二）光學(xué)因素

偏離Beer定律的主要因素表現(xiàn)為以下兩個(gè)方面：該定律適用于稀溶液，溶質(zhì)的離解、締合、互變異構(gòu)及化學(xué)變化也會(huì)引起偏離。尤其濃度過(guò)高(>0.01mol/L)會(huì)使C與A關(guān)系偏離定律：①粒子相互作用加強(qiáng)，吸光能力改變。②溶液對(duì)光的折射率顯著改變。（二）光學(xué)因素1．非單色光的影響：入射