生物制藥學(xué)概述

1第一章 緒論1DNA重組技術(shù)或其他生物技術(shù)研制的蛋白質(zhì)或核酸類藥物。2、生物藥物按其功能用途可以分為三類〔〕〔〕3〕診斷藥物。3、生物技術(shù)藥物的特性〔〕〕3〕〔〕5〕〕〕〔〕9〕多效性和網(wǎng)絡(luò)效應(yīng)〔1〕檢的特異性4、生物技術(shù)制藥的特性：高技術(shù)；高投入；長周期；高風(fēng)險(xiǎn)；高收益。其次章基因工程制藥1和多肽類，包括：(1)免疫性蛋白，各種抗原和單克隆抗體。(2)細(xì)胞因子，如各種干擾素,白細(xì)胞介素，集落刺激生長因子，表皮生長因子及凝血因子〔3〕激素，如胰島素，〔4〕酶類，如尿激酶，鏈激酶，葡激酶，組織型纖維蛋白溶酶原激活劑及超氧化物歧化酶等。28隆的A1BA1B干擾素。3、基因工程技術(shù)是將所要重組對(duì)象的目的基因插入載體，拼接，轉(zhuǎn)入的宿主細(xì)胞，構(gòu)建4工程菌—產(chǎn)物分別純化—除菌過濾—半成品檢定—成品檢定—包裝。5mRNA的純化；CDNA第一鏈的合成；CDNA其次鏈的合成；CDNA克?。粚⒅亟M體導(dǎo)入宿主細(xì)胞；CDNA文庫的鑒定；目的CDNA的分別和鑒定。67、基因表達(dá)的微生物宿主細(xì)胞分為兩類：原核生物，目前常用的有大腸桿菌，枯草芽孢桿菌，鏈霉菌。真核生物，常用的有酵母，絲狀真菌。89、影響目的基因在大腸桿菌中表達(dá)的因素〔〕外源基因的劑量2〕率：啟動(dòng)子的強(qiáng)弱；核糖體結(jié)合位點(diǎn)的有效性；SD序列和起始密碼的間距；密碼子組〔〕〔〕〔5〕工程菌的培育條件。10短的原核多肽和真核蛋白結(jié)合在一起的。11mRNA的AUG端不含任何細(xì)菌多肽序列。12、質(zhì)粒的不穩(wěn)定分為分裂不穩(wěn)定和構(gòu)造不穩(wěn)定。13性和培育條件有關(guān)；二是這兩種菌比生長速率差異的大小。14、提高質(zhì)粒穩(wěn)定性的方法：選擇適宜的宿主菌；選擇適宜的載體；選擇壓力；分階段掌握培育；掌握培育條件；固定化。15、接種量：是指移入的種子液體積和培育液的體積的比例。1、基因工程藥物的分裂純化特點(diǎn)〔1〕目的產(chǎn)物在初始物料中含量低〔〕〔3〕目的產(chǎn)物的穩(wěn)定性差〔〕〕應(yīng)用面廣。17、分別純化的根本過程的5個(gè)步驟：包括細(xì)胞裂開，固液分別，濃縮與初步純化，高度純化直至得到純品，成品加工。1、產(chǎn)品的保存1〕液態(tài)保存：低溫保存；在穩(wěn)定PH〔2〕固態(tài)保存：干粉或結(jié)晶。19品檢定—分裝—凍干—成品檢定—成品包裝。其次章 動(dòng)物細(xì)胞工程制藥1細(xì)胞生物學(xué)，分子生物學(xué)等理論和技術(shù)，有目的地進(jìn)展細(xì)心設(shè)計(jì)，細(xì)心操作，使細(xì)胞的某些遺傳性發(fā)生轉(zhuǎn)變，從而到達(dá)改進(jìn)或產(chǎn)生品種的目的，以及使細(xì)胞增加或重獲得產(chǎn)生某種特定產(chǎn)物的力量，從而在離體條件下進(jìn)展大量培育，增值，并提出對(duì)人類有用的產(chǎn)品。2、貼壁細(xì)胞：這類細(xì)胞的生長必需有可以貼附的支持物外表，細(xì)胞依靠自身分泌的或培育〔分為兩種形態(tài)，即成纖維樣細(xì)胞型或上皮樣細(xì)胞型。3、懸浮細(xì)胞這類細(xì)胞的生長不依靠支持物外表可在培育液中呈懸浮狀態(tài)生長。 44、兼性貼壁細(xì)胞：有些細(xì)胞并不嚴(yán)格地依靠支持物，它們既可以貼附于支持物外表生長，但在肯定的條件下，它們還可以在培育基中呈懸浮狀態(tài)良好地生長。5、動(dòng)物細(xì)胞的生理和生長特點(diǎn)？答〔細(xì)胞的分裂周期長〔并有接觸抑制現(xiàn)象〔〕正常二倍體細(xì)胞的生長壽命是有限的4〕動(dòng)物細(xì)胞對(duì)四周環(huán)5〕動(dòng)物細(xì)胞對(duì)培育基的要求高〔〕動(dòng)物細(xì)胞對(duì)蛋白質(zhì)的合成途徑和修飾功能與細(xì)菌不同。6、DNA〔〕融合法：細(xì)胞融合法；脂質(zhì)體介導(dǎo)法；原生質(zhì)體融合法；微細(xì)胞介導(dǎo)法〔〕DNDEA—葡聚糖法；3〕物理法：電穿孔法；顯微注射法；基因槍法〔〕轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)法；重組DNA病毒介導(dǎo)法。78、二倍體細(xì)胞系：原代細(xì)胞經(jīng)過傳代，篩選，克隆，從而從多種細(xì)胞成分的組織中選擇并純化出某種具有肯定特征的細(xì)胞株。9、〕〔〕質(zhì)粒載體，穿梭質(zhì)粒載體。1〔1〕提高了細(xì)胞培育的可重復(fù)性避開了由于血清批次之間差異的影響〕減小了由血清帶來病毒，真菌和支原體等微生物污染的危急〔〕，穩(wěn)定4〕細(xì)胞產(chǎn)品易于純化5〕避開了血清中某些因素對(duì)有些細(xì)胞的毒性〔6〕減小了血清中蛋白對(duì)某些生物測(cè)定的干擾，便于對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的分析。11細(xì)胞，也適用于兼性貼壁細(xì)胞。12適用于一切貼附依靠性細(xì)胞，也適用于兼性貼壁細(xì)胞。13、動(dòng)物細(xì)胞培育的操作方式：分批式操作，流加式操作，半連續(xù)式操作連續(xù)式操作，灌流式操作。14、組織工程即通過對(duì)細(xì)胞的大量培育，并用細(xì)胞直接作為一種治療手段用于臨床或用培育的細(xì)胞進(jìn)一步加工構(gòu)成一種組織人造皮膚人造肝臟人造姨腺人造骨和人造血管，并用于臨床治療。 、第四章 抗體制藥12B淋巴細(xì)胞克隆產(chǎn)生的，稱為單克隆抗體。34答：免疫酶技術(shù)、免疫熒光技術(shù)和放射免疫技術(shù)。5HAT培育液配方及其篩選細(xì)胞的原理：HT,，是用次黃嘌呤H、氨基喋呤A、胸腺嘧啶T〕院子里是1〕氨基喋呤A〕能阻斷DNA脾融合細(xì)胞不能合成DNA不能合成DNA而死亡。(2)骨髓瘤細(xì)胞都是次黃嘌呤磷酸核苷轉(zhuǎn)移酶〔HGPRT〕缺乏株，由于不能將H轉(zhuǎn)化為G，瘤-瘤融合細(xì)胞、瘤細(xì)胞由于不能合成DNA而死亡。67、基因工程抗體的目的：一是降低鼠源性單克隆抗體分子的免疫原性；二是降低抗體的相對(duì)分子質(zhì)量，一增加組織的透過性。8、抗體爭論領(lǐng)域的進(jìn)展大致可分為3個(gè)階段1以1890年Behring表，起特點(diǎn)是用抗原免疫動(dòng)物來獲得多克隆抗體〕以1975年Kohler創(chuàng)立雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體為代表〔3〕以1994年Winter以基因工程方法制備為代表。9、噬菌體抗體庫技術(shù)的特點(diǎn)〔1〕模擬自然全套抗體庫2〕〔〕可獲得高親和力的人源化抗體。10、血清學(xué)鑒定用的抗體試劑：診斷血清、分群血清、分型血清、因子血清等。11、凝集反響：在細(xì)菌、紅細(xì)胞等顆粒性抗原中參加相應(yīng)抗體，在有適量的電解質(zhì)存在下，能形成肉眼可見的凝集塊。1、抗體治療藥物分為那些〔〕放射性同位素標(biāo)記的抗體治療藥物2〕3〕毒素偶聯(lián)的抗體藥物。第五章植物細(xì)胞工程制藥1、植物的分化：高等植物的分化可以分為胚胎發(fā)生和器官發(fā)生兩個(gè)階段。前者是從精子一通過器官分化過程，形成根、莖、葉、花和果實(shí)。2、脫分化：已經(jīng)分為的細(xì)胞、組織和器官在人工培育的條件下又變成未分化的細(xì)胞和組織的過程。3、再分化：通過脫分化誘導(dǎo)形成的愈傷組織在適宜的培育條件下再分化成為胚狀體或直接分化出器官。愈傷組織形成胚狀體一般有兩個(gè)途徑：1、由體細(xì)胞或性細(xì)胞，通過脫分化形成胚狀體。2、通過愈傷組織直接形成胚狀體。4、外植體：外植體是指用于植物組織〔細(xì)胞〕培育的器官或組織〔的切段，植物的各部位如根、莖、葉、花、果、穗、胚珠、胚乳、花藥和花粉等均可作為外植體進(jìn)展組織培育。5、無性生殖系：在植物細(xì)胞工程中是指使用母體培育物反復(fù)進(jìn)展繼代培育時(shí)，通過同一外植體而獲得越來越多的無性生殖后代而言，如根無性系、組織無性系、懸浮培育物無性系等。6、突變體：經(jīng)過確證已發(fā)生遺傳變異或的培育物至少是通過一種誘變處理而發(fā)生變異所得的細(xì)胞，即為突變體。7、生理活性物質(zhì)：是一類對(duì)細(xì)胞內(nèi)的生化反響和生理活動(dòng)起調(diào)整作用的物質(zhì)的總稱，包括酶、維生素、植物激素和抗生素等。8〔如細(xì)胞分裂和生殖〕產(chǎn)生作用，其量雖微，但作用甚大。9、抗生素和植物殺菌素：是由微生物〔如某些菌類植物〕產(chǎn)生的能殺死或抑制某些微生物10、簡述植物組織和細(xì)胞培育成分有那些？答：無機(jī)鹽、碳源、植物生長調(diào)整劑、有機(jī)氮源和維生素。11、影響植物次級(jí)代謝產(chǎn)物累積的因素？〔1〕生物條件，如外植體、季節(jié)、休眠、分化等〔〕物理?xiàng)l件，如溫度、光、通pH值和滲透壓等〔〕基酸、核酸、抗生素、自然物質(zhì)、前體等〔〕工業(yè)培育條件，如培育罐類型、通氣、攪拌和培育方法等。12、植物細(xì)胞的固定化培育有那些有點(diǎn)？〔1〕可以保護(hù)細(xì)胞免受剪切〔2〕細(xì)胞可長時(shí)間重復(fù)使用〕〔〕細(xì)胞間接觸良好，易于分化，有利于次級(jí)代謝產(chǎn)物的合成5〕削減細(xì)〔6〕易于實(shí)現(xiàn)連續(xù)化操作。13、什么叫生物轉(zhuǎn)化?與生物合成、生物降解有什么區(qū)分？答：生物轉(zhuǎn)化是指生物離體培育或器官及細(xì)胞器等對(duì)外源化合物進(jìn)展構(gòu)造修飾而獲得有價(jià)值產(chǎn)物的生理反響，其本質(zhì)是利用生物體系本生所產(chǎn)生的酶對(duì)外源化合物進(jìn)展酶催化反響，它具有反響選擇性強(qiáng)、反響條件溫順、副產(chǎn)物少、不造成環(huán)境污染和后處理簡潔等優(yōu)點(diǎn)，并可以進(jìn)展傳統(tǒng)有機(jī)合成不能或困難進(jìn)展的化學(xué)反響。生物轉(zhuǎn)化與生物合成不同，后者是指利用整體細(xì)胞、器官和有機(jī)體中簡潔的底物合成物的過程；與生物降解不同，在生物降解中，簡單的底物被分解為簡潔物質(zhì)。第六章 酶工程制藥12〔〕2〕微生物生長生殖快、生產(chǎn)周期短、產(chǎn)量高〕培育方法簡潔，原料來源4〕微生物具有較強(qiáng)的適應(yīng)性和應(yīng)變力量，可以通過各種遺傳變異的手段，培育出的高產(chǎn)菌株。3〔1〕生殖快、產(chǎn)酶量高、酶的性質(zhì)應(yīng)符合使用要求，而且最好是產(chǎn)生胞外酶的菌；〔2〕不是致病菌，在系統(tǒng)發(fā)育上與病原體無關(guān)，也不產(chǎn)生有毒物質(zhì)〔〕產(chǎn)酶性能穩(wěn)44、大腸桿菌是應(yīng)用最為廣泛的產(chǎn)酶菌；枯草桿菌是工業(yè)上應(yīng)用最為廣泛的產(chǎn)酶菌之一；啤酒酵母是工業(yè)上最為廣泛的酵母。5使酶變成不易隨水流失即運(yùn)動(dòng)受到限制，而又能發(fā)揮催化作用的酶制劑，制備固定化酶的過程稱為酶的固定化。6、固定化酶的優(yōu)點(diǎn)〔1〕可以在較長的時(shí)間內(nèi)屢次使用，而且在多數(shù)狀況下，酶的穩(wěn)定性〔〕反響后，酶與底物和產(chǎn)物易于分開，產(chǎn)物中無殘留酶，易于純化，產(chǎn)品質(zhì)量〔34單位酶催化的底物增加，用酶量削減〔〕比水溶酶更適合與多酶反響。75種酶和細(xì)胞純化的固定化的方法？答：物理吸附法、離子結(jié)合法、共價(jià)結(jié)合法、交聯(lián)法、包裸法、熱處理法。8〔1〕2〕酶穩(wěn)定性的變化：操作穩(wěn)定性，貯藏穩(wěn)定性，熱穩(wěn)定性，對(duì)蛋白酶的穩(wěn)定性〔〕p數(shù)〔自然酶經(jīng)固定后，KmKm值不會(huì)變小〔近。9、酶化學(xué)修飾的概念：通過主鏈的切割、剪切和側(cè)鏈基團(tuán)的化學(xué)修飾對(duì)蛋白酶進(jìn)展分子改造，以轉(zhuǎn)變其物理性質(zhì)及生物活性。10的應(yīng)用域，促進(jìn)生物技術(shù)的進(jìn)展〔〕提高生物活性對(duì)針對(duì)效應(yīng)反響性能的轉(zhuǎn)變〔2〕在不良環(huán)境中的穩(wěn)定性3〕針對(duì)異體反響，降低生物識(shí)別力量。11、修飾酶的特性：熱穩(wěn)定性提高、抗各類失活因子力量提高、抗原性消退、體內(nèi)半衰期延長、最適pH轉(zhuǎn)變、酶學(xué)性質(zhì)變化。126-APA，7-ACA只要轉(zhuǎn)變pH6-〔6-APA〕或7氨基頭孢烷7-AC，也可以催化6-APA或7-ACA與其他的羧酸衍生物進(jìn)展反響，以合成的具有不同側(cè)鏈基團(tuán)的青霉素或頭孢霉素。G〔V〕6-氨基青霉烷酸6-AP，是無側(cè)鏈青霉素，它是生產(chǎn)半合成青霉素的最根本原料。以6-APA合成了近3萬種衍生物。并已篩選出了幾十種耐酸、低毒、廣譜抗菌的半合成青霉素。136氨基青霉烷酸？練習(xí)題：1、名詞解釋脫分化、植物組織和細(xì)胞培育；基因表達(dá)、融合蛋白、非融合蛋白、干擾素、凝集反響、Fab片段、免2、問答題：承受動(dòng)物細(xì)胞作為宿主細(xì)胞有哪些特點(diǎn)？動(dòng)物細(xì)胞培育的操作方式有哪些？試述細(xì)胞工程制藥中常用的根本方法。細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)品的質(zhì)量要求6-氨基青霉烷酸的技術(shù)路線。作為酶制劑的生產(chǎn)菌應(yīng)具有哪些特定的要求？酶的催化特點(diǎn)利用微生物生產(chǎn)酶制劑有哪些突出的優(yōu)點(diǎn)？酶分子經(jīng)過化學(xué)修飾后，其特性在肯定程度上發(fā)生了轉(zhuǎn)變，請(qǐng)寫出修飾酶的特性簡述植物細(xì)胞固定化培育的優(yōu)點(diǎn)。簡述植物細(xì)胞培育基的根本組成成分請(qǐng)舉例說明影響植物次級(jí)代謝產(chǎn)物產(chǎn)生和累積的因素有哪些〔每個(gè)因素至少舉出一例〕簡述基因工程藥物制造的主要程序。mRNA分別純化的方法。簡述提高質(zhì)粒穩(wěn)定性的方法。用于基因表達(dá)的宿主細(xì)胞應(yīng)滿足哪些要求？影響目的基因在大腸桿菌中表達(dá)的因素有哪些？試述干擾素的生理功能及基因工程干擾素制備的工藝流程。試述基