體內(nèi)藥物分析中樣品預(yù)處理技術(shù)

體內(nèi)藥物分析中的樣品預(yù)處理技術(shù)【摘要】本綜述主要闡述近年來(lái)體內(nèi)藥物分析中樣品預(yù)處理技術(shù)的幾種常用方法技術(shù)，包括有機(jī)破壞、分離蛋白法液—液萃取法、固相萃取法固相微萃取技術(shù)和超臨界流體萃取技術(shù)等。關(guān)鍵詞】樣品預(yù)處理技術(shù)；有機(jī)破壞；分離蛋白法；液—液萃取法；固相萃取法；固相微萃取法；超臨界流體萃取法；體內(nèi)藥物分析【正文】在體內(nèi)藥物分析中常采用的生物樣品包括血液、尿液、唾液、乳汁、精液、淚液、胃液、膽汁、糞便等樣品。其中最常用的是血漿或血清，因?yàn)槎吒荏w現(xiàn)藥物濃度與治療作用之間的關(guān)系。測(cè)定體內(nèi)藥物及其代謝物時(shí)，常常不能進(jìn)行直接測(cè)定，需要實(shí)施分離、凈化、濃集、化學(xué)衍生等，這些處理技術(shù)即為樣品預(yù)處理技術(shù)。樣品預(yù)處理是體內(nèi)藥物分析中極為重要的環(huán)節(jié)，也是最困難，最繁瑣的工作。在分析過(guò)程中如何方便、快捷地對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理，將少量的藥物從大量復(fù)雜的生物基質(zhì)中分離出來(lái)，以便準(zhǔn)確定性、定量，是體內(nèi)藥物分析面臨的首要問(wèn)題。常用的樣品預(yù)處理技術(shù)有有機(jī)破壞法、蛋白分離技術(shù)、萃取技術(shù)等。近幾年研究表明：采用固相微萃取技術(shù)及超臨界流體萃取技術(shù)處理生物樣品具有快速簡(jiǎn)便，選擇性好、回收率高、無(wú)需使用大量有機(jī)溶劑等優(yōu)點(diǎn)，因此成為當(dāng)今體內(nèi)藥物分析中最有發(fā)展?jié)摿Φ膬煞N樣品預(yù)處理技術(shù)。1.有機(jī)破壞技術(shù)有機(jī)破壞包括濕法破壞、干法破壞以及氧瓶燃燒法三種技術(shù)。濕法破壞是以硝酸為消解液，與生物樣品共熱，生物樣品被氧化破壞游離出待測(cè)組分；干法破壞是將生物樣品高溫?zé)胱疲锝橘|(zhì)被灰化，經(jīng)水或酸溶解后測(cè)定；氧瓶燃燒法是采用燃燒分解有機(jī)物的簡(jiǎn)單技術(shù)，能將待測(cè)元素定量分解成離子型。2．分離蛋白質(zhì)法蛋白質(zhì)分離技術(shù)包括容劑解法、中性鹽鹽析法、強(qiáng)酸破壞、金屬鹽沉淀、超濾法、酶解法、加熱法使蛋白質(zhì)變性沉淀等。前兩者主要是破壞蛋白質(zhì)表面電荷及水化膜是蛋白質(zhì)沉淀；金屬鹽能與蛋白中的特定離子生成沉淀達(dá)到分離效果；超濾法是運(yùn)用半透膜的原理來(lái)分離蛋白質(zhì)；待測(cè)組分對(duì)熱穩(wěn)定時(shí)可采用加熱方法是蛋白質(zhì)變性，從而與待測(cè)組分分離。3．分離、純化與濃集技術(shù)主要采用萃取技術(shù)達(dá)到預(yù)處理的目的。常用的萃取方式有：液—液萃取法、固相萃取法、固相微萃取法、超臨界流體萃取法等。3?1液一液萃取法（LLE）是利用待測(cè)藥物與內(nèi)源性干擾物油水分配系數(shù)不同而進(jìn)行的液相分離技術(shù)。多數(shù)藥物是親脂性的，而血樣或尿樣等內(nèi)源性物質(zhì)多數(shù)是極性強(qiáng)的水溶性物質(zhì)，用有機(jī)溶劑可將其萃取分離。3?2固相萃取法（SPE）SPE又稱液一固萃取技術(shù)，其原理是將不同填料作為固定相裝入微型小柱，當(dāng)含有藥物的生物樣品通過(guò)小柱時(shí)，由于受到吸附、分配、離子交換或其他親和力作用，藥物或干擾物質(zhì)被保留在固定相上，用適當(dāng)溶劑洗除干擾物質(zhì)，再用適當(dāng)溶劑洗脫藥物。3.3固相微萃取(SPME)是80年代后期發(fā)展起來(lái)的樣品預(yù)處理方法，其裝置簡(jiǎn)單，操作方便，已實(shí)現(xiàn)自動(dòng)控制，適用于現(xiàn)場(chǎng)分析。它用一個(gè)類似于氣相色譜微量進(jìn)樣器的萃取裝置，從樣品中萃取出待測(cè)物質(zhì)，并直接與氣相色譜(GC)或高效液相色譜(HPLC)聯(lián)用，在進(jìn)樣口(GC即為氣化室)將萃取的組分解吸附后進(jìn)行色譜分離檢測(cè)。SPME集萃取、濃縮、進(jìn)樣于一身，極大地提高了分析速度。萃取模式可分為直接固相微萃取和頂空固相微萃取兩種。直接固相微萃取將涂有高分子固相液膜的石英纖維直接伸入樣品基質(zhì)中進(jìn)行萃取，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間達(dá)到分配平衡，即可取出進(jìn)行色譜分析。頂空固相微萃取則將石英纖維放在樣品溶液上方進(jìn)行頂空萃取，避免了基質(zhì)的干擾，提高了分析速度。3?4超臨界流體萃取法超臨界流體(SF)是指溫度與壓力均在其臨界點(diǎn)之上的流體在研究過(guò)的超臨界流體體系中,C02因其價(jià)格低廉且無(wú)毒，應(yīng)用最為廣泛。超臨界流體同時(shí)表現(xiàn)出液體與氣體的優(yōu)點(diǎn)，既有與液體相近的密度，又有與氣體相近的粘度及高的擴(kuò)散系數(shù)。故具有很高的溶解能力和良好的流動(dòng)、傳遞性能，可代替?zhèn)鹘y(tǒng)的有毒、易揮發(fā)、易燃的有機(jī)溶劑。超臨界流體萃取技術(shù)(SFE)對(duì)熱敏感物質(zhì)和復(fù)雜樣品中微量組分萃取的有效性已引起人們關(guān)注，目前已用于體內(nèi)分析?！窘Y(jié)束語(yǔ)】綜上所述，樣品預(yù)處理技術(shù)是體內(nèi)藥物分析中十分關(guān)鍵的操作技術(shù)之一。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，樣品預(yù)處理技術(shù)也得到不斷的改進(jìn)。然而，尋找快捷安全、易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化的新型樣品預(yù)處理技術(shù)，在體內(nèi)藥物分析中也顯得尤為重要。可見，樣品預(yù)處理技術(shù)有著良好地發(fā)展前景。參考文獻(xiàn)童珊珊，余江南，劉文英，安登魁，等.體內(nèi)藥物分析中的樣品預(yù)處理技術(shù)J].藥學(xué)雜志，2001,1(25)李好枝.體內(nèi)藥物分析.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2003徐銘，李范珠。微透析技術(shù)及其在體內(nèi)藥物分析中的應(yīng)用.藥學(xué)雜志，2006,34(2):165-168楊新磊，羅明