走進(jìn)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室

走進(jìn)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室

——分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備和儀器介紹孫文宋田源培養(yǎng)箱常用培養(yǎng)箱一般為隔水式恒溫培養(yǎng)箱細(xì)菌——37℃霉菌——28℃使用時(shí)注意培養(yǎng)箱的水位，水位過(guò)低會(huì)引起溫度變化幅度加大，不能控溫冰箱4℃適合儲(chǔ)存某些溶液、試劑、藥品等。-20℃適用于酶、血清、配好的抗生素和DNA、蛋白質(zhì)樣品等。-80℃適合某些長(zhǎng)期低溫保存的樣品、大腸桿菌菌種、純化的樣品、特殊的低溫處理感受態(tài)等的保存。0-10℃的層析冷柜適合低溫條件下的電泳、層析、透析等實(shí)驗(yàn)。搖床分為恒溫式和常溫式用于大腸桿菌，酵母菌等生物工程菌種的振蕩培養(yǎng)及蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)，培養(yǎng)通常為37℃和28℃烘箱用于滅菌和洗滌后的物品烘干有些塑料用具只能在42-45℃的烤箱中進(jìn)行烘干；用于RNA方面的實(shí)驗(yàn)用具，需要在250℃烤箱中烘干。高壓蒸汽滅菌鍋/箱主要用于能耐高溫的物品，如培養(yǎng)基、金屬器械、玻璃、搪瓷、敷料、橡膠及一些藥物的滅菌。壓力升至103.4kPa，溫度達(dá)121.3℃，維持15~20分鐘，可達(dá)到滅菌目的。電子天平按照最大稱(chēng)量的不同分為超微量（2-5g），微量（3-50g），半微量（20-100g）等規(guī)格使用前需要檢查是否水平稱(chēng)量時(shí)需要稱(chēng)量紙，決不允許直接稱(chēng)量稱(chēng)量腐蝕性和吸濕性物質(zhì)時(shí)需要用燒杯稱(chēng)量pH計(jì)玻璃電極平常不用時(shí)應(yīng)浸泡在蒸餾水中。甘汞電極在初次使用前，應(yīng)浸泡在飽和氯化鉀溶液內(nèi)，不要與玻璃電極同泡在蒸餾水中。不使用時(shí)也浸泡在飽和氯化鉀溶液中。磁力攪拌器在配置試劑過(guò)程中，有些試劑較難溶解，這時(shí)需要借助磁力攪拌器。磁力攪拌器可以加速溶解固體內(nèi)容物。磁力攪拌器一般帶加熱功能。電爐和微波爐生物安全柜和超凈工作臺(tái)PCR儀、PCR反應(yīng)及結(jié)果檢測(cè)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)高溫變性低溫退火中溫延伸基于聚合酶制造的PCR儀實(shí)際就是一個(gè)溫控設(shè)備，能在變性溫度，復(fù)性溫度，延伸溫度之間很好地進(jìn)行控制。優(yōu)點(diǎn)特異性強(qiáng)靈敏度高簡(jiǎn)便、快速純度要求低PCR儀類(lèi)型普通和梯度PCR儀熒光定量PCR儀原位PCR儀PCR反應(yīng)體系10×擴(kuò)增緩沖液10μl4種dNTP混合物（終濃度）各100～250μmol/L引物（終濃度）各5～20μmol/L模板DNA0.1～2μgTaqDNA聚合酶5～10UMg2+（終濃度）1～3mmol/L補(bǔ)加雙蒸水100μl

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)引物DNA聚合酶dNTP模板鏈緩沖體系引物設(shè)計(jì)原則①引物長(zhǎng)度：15-30bp②引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。③引物內(nèi)部不應(yīng)出現(xiàn)互補(bǔ)序列。④兩個(gè)引物之間不應(yīng)存在互補(bǔ)序列⑤引物與非特異擴(kuò)增區(qū)的序列的同源性不要超過(guò)70%⑥引物3’端應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，引物的5’端可以修飾。循環(huán)數(shù)一般為25～30次。循環(huán)數(shù)決定PCR擴(kuò)增的產(chǎn)量。一般循環(huán)數(shù)為30個(gè)左右，循環(huán)數(shù)超過(guò)30個(gè)以后，DNA聚合酶活性逐漸達(dá)到飽和，產(chǎn)物的量不再隨循環(huán)數(shù)的增加而增加。結(jié)果檢測(cè)熒光素（溴化乙錠，EB）染色凝膠電泳熒光探針凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳（水平）聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）（垂直）蛋白質(zhì)的凝膠電泳（SDS）凝膠制備和電泳過(guò)程制作膠模融化瓊脂糖，冷卻后加入EB倒模