其它毒性第二軍醫(yī)大學新藥評價中心新藥評價課件

其它毒性試驗皮膚給藥毒性試驗皮膚給藥的急性毒性試驗皮膚給藥的長期毒性試驗皮膚刺激試驗皮膚過敏試驗光敏試驗其它毒性試驗腔道用藥毒性試驗眼刺激試驗滴鼻劑和吸入劑急性毒性試驗滴鼻劑和吸入劑刺激試驗直腸、陰道用藥急性毒性試驗直腸、陰道用藥刺激試驗其它毒性試驗藥物依賴性試驗身體依賴性試驗自然戒斷試驗替代試驗催促試驗誘導試驗精神依賴性試驗

皮膚給藥急性毒性試驗劑量：3個，組距0.65－0.85。家兔每組４只，豚鼠或大鼠每組10只并設賦形劑或空白對照組方法：將受試物均勻涂敷于脫毛區(qū)，破損皮膚則在脫毛區(qū)劃破皮膚后再涂敷受試物。24h后去除，每日觀察，連續(xù)7-14天。觀察動物體重、皮膚、毛發(fā)、眼睛和粘膜的變化，呼吸、循環(huán)、中樞神經系統(tǒng)、四肢活動等變化。若有死亡則進行尸檢，當有肉眼可見病變，則需進行病檢判斷：試驗結果與對照組比較判斷

皮膚給藥的長期毒性試驗目的：觀察經皮滲透產生的異常反應和可逆程度，找到靶器官動物：家兔(2kg,6只/組)，豚鼠(300g，10只/組)或大鼠(200g，10只/組)，♀♂各半。給藥前24h動物背部脊柱兩側脫毛，面積同急毒受試物：同急性毒性試驗劑量：３個，要求同大鼠口服長毒試驗，并設賦形劑或空白對照組，若用受試物劑量超過有效濃度20倍以上，仍未見動物有不良反應或死亡時，則只須設一個高劑量組皮膚給藥的長期毒性試驗方法：受試物均勻涂敷,每次至少接觸６h，臨床用藥療程的３倍以上時間連續(xù)給藥。部分動物應于停藥后繼續(xù)觀察１-２周，檢測指標：除每日觀察皮膚、臨床變化及皮膚病理學檢查外，其血液學、血液生化指標和病理學檢查項目同大鼠長期毒性試驗要求判斷：實驗結果應寫明安全劑量、中毒劑量、中毒表現、中毒靶器官及中毒的可逆程度等皮膚刺激試驗多次給藥則每日涂抹一次，連續(xù)一周，其余均與一次給受試物的方法和要求一致結果評價：每只動物試驗結果進行刺激反應評分，計算出平均分值進行刺激強度評價皮膚刺激反應評分━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━

刺激反應

分值━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━紅斑:

無紅斑

0

勉強可見

1

中度紅斑

2

嚴重紅斑

3

紫紅色紅斑并有焦痂形成

4水腫:

無水腫

0

勉強可見

1

皮膚隆起輪廓清楚

2

水腫隆起約1mm并范圍擴大

4━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━皮膚刺激強度評價━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━強度分值━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━無刺激性<0.5輕度刺激性<2.0中度刺激性<6.0強度刺激性>6.0━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━皮膚過敏試驗方法：分受試物組，空白對照組，陽性對照組，每組10只（♀♂各半）1.致敏接觸：將受試物0.1-0.2ml(ｇ)涂在左側脫毛區(qū)，持續(xù)6h。第７天和第14天，同法各重復一次2.激發(fā)接觸：末次致敏后14天，將受試物0.1-0.2ml(ｇ)涂于右側脫毛區(qū)，陽性對照用0.1%2,4—二硝基氯代苯，６h后去除，即刻觀察，然后于24、48、72h再次觀察過敏反應情況結果評價：結果按皮膚反應評分標準評分，根據試驗組與對照組豚鼠皮膚反應的差別，判斷受試物對皮膚過敏反應性質可用致敏率(紅斑或水腫的動物例數/受試動物總數)判斷致敏強度皮膚過敏反應評分標準皮膚反應分值紅斑形成：無紅斑０輕度紅斑１中度紅斑２重度紅斑３水腫性紅斑４水腫形成：無水腫０輕度水腫１中度水腫２重度水腫３致敏率分類━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━致敏率（%）反應強度━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━０－10弱致敏性20－30輕度致敏性40－60中度致敏性70－80高度致敏性90－100極度致敏性━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━皮膚給藥毒性試驗有關問題設立賦形劑對照組，賦形劑各種指標、規(guī)格等均應符合藥用規(guī)格受損皮膚的用藥，急毒、長毒等毒性試驗也宜以模擬破損皮膚進行高劑量符合制劑工藝要求，以劑型允許配制濃度和允許給藥容量給藥。不能將外用藥厚厚地涂在皮膚上眼刺激試驗目的：觀察眼睛接觸受試物后產生的刺激反應動物：家兔≥４只，體重2－3kg受試物：液體或膏劑均可直接滴入或涂敷劑量：用原液或原膏劑，不必稀釋，每只眼睛滴入0.1ml或涂敷0.1g以內方法：滴入或涂敷于動物一側眼結膜囊內，另一側作為空白（或賦形劑）對照。給藥后使眼睛被動閉合5－10分。記錄給藥后6、24、48、72h至7天眼的局部反應情況眼刺激試驗臨床用藥超過一周的受試物要進行多次給藥刺激試驗，連續(xù)給藥一周以上結果評價：將每只動物的眼角膜、虹膜和結膜的刺激反應的分值相加，即是一只受試動物眼刺激反應的總積分。把每個受試動物的刺激反應積分的總和除以動物數，就是該受試物對眼刺激性的最后分值，以此判定受試物刺激程度眼刺激試驗--虹膜評分正常０皺褶明顯加深，充血，腫脹，角膜周圍輕度充血，瞳孔對光仍有反應１出血，肉眼可見壞死，對光無反應（或出現其中一種反應）２眼刺激試驗--結膜評分Ａ.充血（指瞼結膜、球結膜部位）血管正常０血管充血呈鮮紅色１血管充血呈深紅色，血管不易分辨２彌漫性充血呈紫紅色３Ｂ.水腫無水腫０輕微水腫（包括瞬膜）１明顯水腫，伴有部分眼瞼外翻２水腫至眼瞼近半閉合３水腫至眼瞼超半閉合４Ｃ.分泌物無分泌物０少量分泌物１分泌物使眼瞼和睫毛潮濕或粘著２分泌物使整個眼區(qū)潮濕或粘著３眼刺激性評價標準━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━刺激程度積分━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━無刺激性０－３輕度刺激性４－８中度刺激性９－１２強度刺激性１３－１６━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━滴鼻劑和吸入劑急性毒性試驗方法：大鼠或豚鼠每組10只，家兔每組４只，♀♂各半。滴入或吸入藥后，至少接觸４小時，給藥后即刻觀察及7-14天觀察動物全身狀況、體重、呼吸、循環(huán)、中樞神經系統(tǒng)、四肢活動等變化，若出現死亡則病檢結果判斷：試驗結果與對照組比較。如能測出LD50值則按急性毒性試驗要求計算滴鼻劑和吸入劑刺激試驗目的：觀察滴入或吸入后產生的刺激反應動物：同上述急性毒性試驗受試物：液體或粉末劑分組：給藥組、賦形劑組及空白對照組，每組家兔３只，或大鼠或豚鼠５只方法：將藥滴入或噴霧于動物。和粘膜接觸至少４h。于24h處死動物，觀察有無充血、紅腫等現象。若有變化則需進行病檢多次給藥則每天滴入或吸入一次,連續(xù)７天，于末次給藥24h后處死動物結果判斷：試驗結果與對照組比較進行判斷直腸、陰道用藥刺激試驗多次給受試物則一般每日一次，連續(xù)７天，于末次給藥后24h處死動物并觀察結果判斷：試驗結果與對照組比較判斷腔道用藥毒性試驗要特別注意既要符合劑型要求，又要考慮腔道可給容量身體依賴性試驗--自然戒斷試驗連續(xù)給藥后突然停藥，觀察戒斷癥狀，與同類的代表藥作對比，判斷受試藥的依賴性潛力動物：小、大鼠和猴。小鼠體重20-24g，每組≥20只，大鼠體重180-220g，每組≥10只,猴體重3-5kg，每組3～5只，♂♀各半劑量：2～3，須設賦形劑對照和陽性藥對照(嗎啡，苯巴比妥或巴比妥)。低劑量用ACD；高劑量組依賴性潛力低的藥物應選用接近毒性反應的劑量，毒性低的藥物選用MTD。藥物可采用恒量或劑量遞增的方式給予身體依賴性試驗--自然戒斷試驗給藥途徑：1～2種給藥途徑，必須有一種與臨床用藥途徑相同給藥期限：鎮(zhèn)痛藥在小、大鼠需給藥30天，猴需給藥90天；鎮(zhèn)靜催眠藥在小、大鼠需給藥60～90天，猴需給藥180天。每天上下午各一次身體依賴性試驗--自然戒斷試驗觀察指標：鎮(zhèn)痛藥在停藥前24h及停藥后48h內每隔4h觀察記錄外觀體征和行為活動、植物神經系統(tǒng)機能變化，并稱重。鎮(zhèn)靜催眠藥在停藥前一天及停藥后的1至2周內每天觀察動物的外觀體征和行為活動及自發(fā)驚厥發(fā)生率外觀體征和行為活動包括：應激性、神情過敏(猴)、飲食、睡眠、自發(fā)運動活動、攻擊性、警覺程度、神經反射、豎尾、震顫、驚厥、呼吸、體溫、體重植物神經系統(tǒng)機能變化：腹瀉、流涎、流淚、惡心、嘔吐、瞳孔大小身體依賴性試驗--自然戒斷試驗資料記錄及整理：①動物應寫明種屬、性別、生產合格證號、記錄體重、實驗室溫度及濕度②受試物應寫明生產批號、配制方法③戒斷癥狀用記分法統(tǒng)計，對檢測指標和體重、驚厥發(fā)生率等應設計合理的圖表顯示。實驗結果進行統(tǒng)計處理身體依賴性試驗--替代試驗給予動物代表藥(如嗎啡、巴比妥或苯巴比妥)產生身體依賴性后，停止給藥，替之以受試藥，觀察記錄動物是否發(fā)生戒斷癥狀及發(fā)作程度動物：參照“自然戒斷試驗”劑量：參照“自然戒斷試驗”給藥途徑：腹腔注射、灌胃或“藥摻食”(drugadmixedfood,DAF)法給予代表藥使產生身體依賴性，然后停止給代表藥，以同樣給藥方式給予不同劑量的受試藥,觀察及記錄替代期間動物的戒斷行為和體重變化身體依賴性試驗--替代試驗鎮(zhèn)痛藥的觀察期為停止嗎啡前24h和停藥后48h內，每4h觀察一次；鎮(zhèn)靜催眠藥的觀察為停止代表藥前一天和停藥后的1～2周內，每天觀察一次采用1～2種給藥途徑，必須有一種與臨床用藥途徑相同觀察指標：參照“自然戒斷試驗”資料記錄與整理：參照“自然戒斷試驗”身體依賴性試驗--催促試驗短時期內給予動物大劑量受試藥，然后注射受體對抗劑，觀察和記錄是否出現戒斷癥狀及其程度。此法只適用于有竟爭性受體對抗劑的阿片類藥物動物：參照“自然戒斷試驗”劑量：除低劑量組一般采用臨床劑量的1至2倍外，余同“自然戒斷試驗”給藥途徑：猴的實驗應采用與臨床給藥途徑相同；大、小鼠的實