NY/T 565-2002梅迪-維斯納病瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)方法

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中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)

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梅迪┐維斯納病瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散

試驗(yàn)方法

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┐┐發(fā)布┐┐實(shí)施

中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布

犖犢／犜５６５—２００２

前言

梅迪維斯納（ＭａｅｄｉＶｉｓｎａ）病是羊的慢性致死性傳染病，世界動物衛(wèi)生組織［ＷｏｒｌｄＯｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ

ｆｏｒＡｎｉｍａｌＨｅａｌｔｈ（英），ＯｆｆｉｃｅＩｎｔｅｎｔｉｏｎａｌｄｅｓＥｐｉｚｏｏｔｉｃ（法），ＯＩＥ］將之列為Ｂ類、我國將其列為二類

動物疫病。

梅迪維斯納病（ＶｉｓｎａＭａｅｄｉ）又稱綿羊進(jìn)行性肺炎、進(jìn)行性間質(zhì)性肺炎等，是在臨床和病理學(xué)上明

顯不同的兩種慢性進(jìn)行性傳染病。這兩種病的潛伏期均長達(dá)數(shù)月至數(shù)年，病程長，發(fā)展緩慢，均以死亡

而告終。梅迪病以慢性進(jìn)行性間質(zhì)性肺炎為特征，病羊消瘦，呼吸困難，出現(xiàn)干咳，最后死亡，羊群病死

率達(dá)２０％～３０％。維斯納病以慢性脫髓鞘的亞急性腦炎為特征，病羊口唇震顫，頭部姿勢異常，后肢麻

痹，隨后發(fā)展為截癱病，全身麻痹，羊群病死率為６％～１０％。盡管梅迪病和維斯納病在臨床癥狀和病

理變化上有很大差別，但病毒學(xué)、血清學(xué)、分子生物學(xué)和動物試驗(yàn)都證明，這兩種病的病原是同一種病

毒，即梅迪維斯納病毒。１９２３年在加拿大蒙大拿綿羊中首先發(fā)現(xiàn)梅迪病，１９３３年在冰島綿羊中大流

行，其后發(fā)現(xiàn)維斯納病。目前此病主要發(fā)生或曾經(jīng)發(fā)生于冰島、德國、法國、荷蘭、美國、南非、肯尼亞、印

度、以色列、秘魯?shù)葒偷貐^(qū)。

我國６０年代也曾發(fā)現(xiàn)可疑病例，其臨床癥狀和剖檢變化與梅迪病相似。１９８４年從澳大利亞和新

西蘭引進(jìn)的邊區(qū)萊斯特綿羊及其后代檢出了抗體，并于１９８５年分離出病毒。該病既無疫苗可供預(yù)防，

又無有效治療方法，羊群一旦感染本病，生產(chǎn)性能下降，最終死亡，給養(yǎng)羊業(yè)造成巨大損失。

本標(biāo)準(zhǔn)是根據(jù)ＯＩＥ《診斷試驗(yàn)和生物試劑標(biāo)準(zhǔn)手冊》（２０００年版）（ＭａｎｕａｌｏｆＳｔａｎｄａｒｄｓｆｏｒＤｉａｇ

ｎｏｓｔｉｃＴｅｓｔｓａｎｄＶａｃｃｉｎｅｓ，２０００）第２．４．４／５章所規(guī)定的“瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（國際貿(mào)易指定試驗(yàn)）”和本

國的多年實(shí)驗(yàn)研究及實(shí)踐制定的，但進(jìn)行了以下修改：試驗(yàn)的孔徑和孔距稍有不同，不影響試驗(yàn)結(jié)果且

更易于操作和觀察。

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄Ａ為規(guī)范性附錄。

本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)局提出。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國動物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：榮駿弓、魏仁山。

Ⅰ

書

犖犢／犜５６５—２００２

梅迪維斯納病瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散

試驗(yàn)方法

１范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了梅迪維斯納病瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)的技術(shù)要求。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于梅迪維斯納病感染的檢測、診斷和流行病學(xué)調(diào)查。

２瓊脂免疫凝膠擴(kuò)散試驗(yàn)

２．１材料準(zhǔn)備

２．１．１瓊脂板，制備方法見附錄Ａ（規(guī)范性附錄）。

２．１．２抗原，標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、陰性血清。

２．２操作方法

２．２．１瓊脂平皿，制備、打孔見附錄Ａ。

２．２．２吸取抗原滴加中心孔，加滿為止。

２．２．３吸取標(biāo)準(zhǔn)陽性血清分別滴加外周２、４、６孔，加滿為止。每一試驗(yàn)應(yīng)包括一弱陽性對照。

２．２．４吸取被檢血清分別滴加外周１、３、５孔，加滿為止。

２．３判定

２．３．１抗原、標(biāo)準(zhǔn)陽性血清和被檢血清滴加完畢后，將平皿倒置，放濕盒內(nèi)置３７℃下孵育，并于２４ｈ及

４８ｈ觀察是否有沉淀線出現(xiàn)。

２．３．２當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)陽性血清與抗原孔間有明顯沉淀線，而被檢血清與抗原孔間也有明顯沉淀線，并與標(biāo)準(zhǔn)

陽性血清的沉淀線相融合，或標(biāo)準(zhǔn)陽性血清與抗原孔的沉淀線末端明顯在毗鄰的被檢血清孔處向中央

孔方向偏彎時，該被檢血清為陽性（＋）。

當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)陽性血清與抗原孔間有明顯沉淀線，而被檢血清與抗原孔間無沉淀線，或標(biāo)準(zhǔn)陽性血清與