GMP質量體系05、紫外分光光度法操作規(guī)程

____________________________________________________________________________________________________第3頁共3頁文件名稱紫外分光光度法操作規(guī)程文件編號JB-TZ-005-A編制人編制日期年月日復制份數(shù)審核人審核日期年月日頒發(fā)部門質量管理部批準人批準日期年月日生效日期分發(fā)部門質檢科、質?？?、質量管理部編訂依據(jù)《中華人民共和國藥典》2000年版目的：建立一個紫外分光光度法試驗操作規(guī)程。范圍：物料檢驗。責任：檢驗員、質檢科長、質?？崎L、質量總監(jiān)。內容：分光光度法分光光度法是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內光的吸收度，對該物質進行定性和定量分析的方法。常用波長范圍為：（1）200~400nm的紫外光區(qū)，（2）400~760nm的可見光區(qū)，（3）2.5~25μm（按波數(shù)計為4000-1~400-1cm）的紅外光區(qū)。所用儀器為紫外分光光度計，可見光分光光度計（或比色計）、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和準確度，所有儀器應按照國家計量檢定規(guī)程或本附錄規(guī)定，定期進行校正檢定。單色光輻射穿過被測物質溶液時，被該物質吸收的量與該物質的濃度和液層的厚度（光路長度）成正比，其關系如下式：式中：A為吸收度；T為透光率；E為吸收系數(shù)，采用的表示方法是（），即吸收度換算成溶液濃度為1%（g/ml），液層厚度為1cm的吸收度數(shù)值；C為100mL中所含被測物質的重量，（按干燥品或無水物計算）g；L為液層厚度，cm。物質對光的選擇性吸收波長，以及相應的吸收系數(shù)是該物質的物理常數(shù)。當已知某純物質在一定條件下的吸收系數(shù)后，可用同樣條件將該供試品配成溶液，測定其吸收度，即可由上式計算出供試品中該物質的含量。在可見光區(qū)，除某些物質對光有吸收外，很多物質本身并沒有吸收，但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過處理使其顯色后再測定，故又稱比色分析。由于顯色時影響呈色深淺的因素較多，且常使用單色光純度較差的儀器，故測定時應用標準品或對照品同時操作。紫外分光光度法文件名稱紫外分光光度法操作規(guī)程文件編號JB-TZ-005-A1、儀器的校正和檢定由于溫度變化對機械部分的影響，儀器的波長經(jīng)常會略有變動，因此除應定期對所用的儀器進行全面校正檢定外，還應于測定前校正測定波長。常用汞燈中的較強譜線237.83nm、253.65nm、275.28nm、296.73nm、313.16nm、334.15nm、365.02nm、404.66nm、435.83nm、546.07nm與576.96nm，或用儀器中氘燈的486.02nm與656.10nm譜線進行校正，鈥玻璃在279.4nm、287.5nm、333.7nm、360.9nm、418.5nm、460.0nm、484.5nm、536.2nm、與637.5nm波長處有尖銳吸收峰，也可作波長校正用，但因來源不同會有微小的差別，使用時應注意。吸收度的準確度可用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定。取在120℃干燥至恒重的基準重鉻酸鉀約60mg，精密稱定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀釋至1000ml，在下表規(guī)定的波長處測定并計算其吸收系數(shù)。規(guī)定的吸收系數(shù)如下表，相對偏差可在±1%以內。波長，nm235257313350（最?。ㄗ畲螅ㄗ钚。ㄗ畲螅┪障禂?shù)124．5144．048．62106．6雜散光的檢查可按下表的試劑和濃度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在下表規(guī)定的波長處測定透光率，應符合表中的規(guī)定。試劑濃度%（g/ml）測定用波長nm透光率%碘化鈉亞硝酸鈉1.005.00220340<0.8<0.82、對溶劑的要求測定供試品前，應先檢查所用的溶劑在供試品所用的波長附近是否符合要求；即用1cm石英吸收池盛溶劑，以空氣為空白（即空白光路中不置任何物質）測定其吸收度，溶劑和吸收池的吸收度，在220—240nm范圍內不得超過0.40；在241—250nm范圍內不得超過0.20；在251—300nm范圍內不得超過0.10，在300nm以上時不得超過0.05。3、測定法測定時，除另有規(guī)定外，應以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對照，采用1cm的石英吸收池，在規(guī)定的吸收峰波長±2nm以內測試幾個點的吸收度，以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確，除另有規(guī)定外，吸收峰波長應在該品種項下規(guī)定的波長±1nm以內；否則應考慮該試樣的真?zhèn)?、純度以及儀器波長的準確度，并以吸收度最大的波長作為測定波長。一般供試品溶液的吸收度讀數(shù)，以在0.3—0.7之間的誤差較小。儀器的狹縫波帶寬度應小于供試品吸收帶的半寬度，否則測得的吸收度會偏低；狹縫寬度的選擇應以減小狹縫寬度時供試品的吸收度不再增加為準，由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測定供試品的吸收度后應減去空白讀數(shù)，再計算含量。文件名稱紫外分光光度法操作規(guī)程文件編號JB-TZ-005-A用作鑒別和檢查項目的方法，分別按各品種項下的方法進行。鑒別項下吸收度讀數(shù)的范圍可根據(jù)配制供試液時稀釋倍數(shù)及制劑的實際含量確定。用于含量測定的方法一般有以下幾種：（1）對照品比較法按各品種項下的方法，分別配制供試品溶液和對照品溶液，對照品溶液中所含被測成分的量應為供試品溶液中被測成分標示量的100±10%，所用溶劑也應完全一致，在規(guī)定的波長測定供試品溶液和對照品溶液的吸收度后，按下式計算供試品中被測溶液的濃度：Cx=(Ax/Ar)Cr式中Cx為供試品溶液的濃度；Ax為供試品溶液的吸收度；Cr為對照品溶液的濃度；Ar為對照品溶液的吸收度。（2）吸收系數(shù)法按各種項下的方法配制供試品溶液，在規(guī)定的波長處測定其吸收度，再以該品種在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計算含量。用本法測定時，應注意儀器的校正和檢定。（