藥物分析湖南大學(xué)藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證

第一節(jié)定量分析樣品的前處理方法在進(jìn)行藥物定量分析之前，一般需根據(jù)分析方法的特點(diǎn)，化學(xué)原料藥的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)及藥物制劑的處方組成采用不同的方法對(duì)試樣進(jìn)行前處理，以滿(mǎn)足所選用的分析方法對(duì)試樣的要求。含金屬或鹵素、氮、硫、磷等元素的藥物的分析方法通?？煞譃椋海?）不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（2）經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法第1頁(yè)/共128頁(yè)第一頁(yè)，共129頁(yè)。一、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法不對(duì)藥物分子中的有機(jī)結(jié)構(gòu)進(jìn)行完全破壞;僅選用適當(dāng)?shù)娜軇┤芙鈽悠肥勾郎y(cè)元素離子電離或經(jīng)簡(jiǎn)單回流處理使有機(jī)結(jié)合的待測(cè)元素原子離解而轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)鹽類(lèi)后測(cè)定。適用于含金屬有機(jī)藥物或結(jié)合不牢固的含鹵素等藥物的分析。根據(jù)操作方法不同，主要有：直接測(cè)定法、經(jīng)水解后測(cè)定法、經(jīng)還原分解后測(cè)定法。第2頁(yè)/共128頁(yè)第二頁(yè)，共129頁(yè)。直接測(cè)定法

凡金屬原子不直接與碳原子相連的含金屬的有機(jī)藥物或某些C-M（金屬原子直接與碳原子相連）鍵結(jié)合不牢固的有機(jī)金屬藥物，在水溶液中可電離，不需經(jīng)有機(jī)破壞，直接進(jìn)行測(cè)定。配位滴定法：利用二價(jià)金屬離子可與乙二胺四乙酸二鈉形成配位化合物，直接乙二胺四乙酸二鈉滴定液滴定。氧化還原滴定法：利用不同價(jià)態(tài)的金屬離子的氧化還原性，選用適當(dāng)?shù)牡味ㄒ褐苯踊蜷g接滴定法測(cè)定含量。第3頁(yè)/共128頁(yè)第三頁(yè)，共129頁(yè)。例1：葡萄糖酸鈣的含量測(cè)定

取本品，加水溶解后，在氫氧化鈉堿性條件下，以鈣紫紅素為指示劑，用乙二胺四乙酸二鈉滴定液滴定至溶液自紫色轉(zhuǎn)變?yōu)榧兯{(lán)色。例2：葡萄糖酸銻鈉的含量測(cè)定

本品所含的五價(jià)銻具有氧化性，在酸性溶液中可氧化碘化鉀并析出碘，選用間接碘量法，用硫代硫酸鈉滴定液滴定。第4頁(yè)/共128頁(yè)第四頁(yè)，共129頁(yè)。經(jīng)水解后測(cè)定法堿水解后測(cè)定法：將含鹵素的有機(jī)藥物溶解于適當(dāng)?shù)娜軇┲?，加NaOH溶液回流使其水解，將有機(jī)結(jié)合的鹵素轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)機(jī)形式的鹵素離子，然后選用間接銀量法。本法適用于含鹵素有機(jī)藥物結(jié)構(gòu)中鹵素原子結(jié)合不牢固的藥物，如鹵素和脂肪碳相連者。酸水解后測(cè)定法：將含金屬的有機(jī)藥物與適當(dāng)?shù)牡V酸（如鹽酸）共熱，將不溶性金屬鹽類(lèi)水解置換為可溶性鹽，然后選用配位滴定或剩余酸堿滴定法測(cè)定。第5頁(yè)/共128頁(yè)第五頁(yè)，共129頁(yè)。例2：三氯叔丁醇的含量測(cè)定

取本品，溶于乙醇后，加NaOH溶液并加熱回流，使有機(jī)結(jié)合的氯水解生成NaCl，與AgNO3生成AgCl沉淀，過(guò)量的AgNO3用NH4SCN溶液滴定(指示劑:Fe3+)。例1：十一烯酸鋅的含量測(cè)定

本品與稀鹽酸共沸，水解生成十一烯酸和氯化鋅，用乙二胺四乙酸鈉滴定液直接滴定鋅離子。CCl3-C(CH3)2-OH+4NaOH

△回流(CH3)2-CO+3NaCl+HCOONa+2H2O第6頁(yè)/共128頁(yè)第六頁(yè)，共129頁(yè)。NaCl+AgNO3

AgCl↓+NaNO3

AgNO3+NH4SCNAgSCN↓+NH4NO3（淡棕紅色）(Ksp=1.56×10–10)(Ksp=1.0×10-12)Fe3++SCNˉFe(SCN)2+

第7頁(yè)/共128頁(yè)第七頁(yè)，共129頁(yè)。經(jīng)還原分解后測(cè)定法。

含碘有機(jī)藥物，當(dāng)?shù)庠又苯优c芳環(huán)連接時(shí)，碘的結(jié)合比較牢固，采用堿性溶液回流是難以使C-I鍵斷裂，但可在堿性人溶液中加入還原劑（如鋅粉）回流，使其轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)碘化物后測(cè)定。例：泛影酸的含量測(cè)定

取本品約0.4g（精密稱(chēng)定），加NaOH試液30ml與鋅粉1.0g，加熱回流30min，放冷，冷凝管用少量水洗滌，濾過(guò)，燒瓶與濾器用水洗滌三次，每次15ml，洗液與濾液合并，加冰醋酸5ml與曙紅鈉指示液5滴，用AgNO3（0.1mol/L）滴定液滴定。第8頁(yè)/共128頁(yè)第八頁(yè)，共129頁(yè)。+11NaOH+3Zn→+3NaI+2CH3COONa+3Na2ZnO2+3H2OCOONaNH2NH2NaI+AgNo3→AgI↓+NaNO3碘他拉酸、膽影酸、碘番酸等均采用同法測(cè)定第9頁(yè)/共128頁(yè)第九頁(yè)，共129頁(yè)。膽影酸碘他拉酸碘番酸第10頁(yè)/共128頁(yè)第十頁(yè)，共129頁(yè)。二、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法含金屬及含鹵素、氮、硫、磷等有機(jī)藥物結(jié)構(gòu)中的待測(cè)原子與碳原子結(jié)合牢固者，用水解或氧化還原的方法難以將有機(jī)結(jié)合的待測(cè)原子轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)機(jī)形式；須采用有機(jī)破壞的方法將藥物分子中有機(jī)結(jié)構(gòu)部分完全破壞，使有機(jī)結(jié)合形式的待測(cè)原子轉(zhuǎn)變?yōu)榭蓽y(cè)的無(wú)機(jī)離子（或氧化物、無(wú)氧酸等）后方可分析。有機(jī)破壞方法包括：濕法破壞、干法破壞。第11頁(yè)/共128頁(yè)第十一頁(yè)，共129頁(yè)。濕法破壞

適用于含氮有機(jī)合成藥物分析的前處理，在生物制品分析中用于氮（包括蛋白質(zhì)）、磷、硫柳汞及氯化鈉測(cè)定法的前處理；亦可用于生物樣品中金屬元素測(cè)定時(shí)生物基質(zhì)的去除。 主要分解劑：硫酸 輔助分解劑：硝酸、高氯酸、過(guò)氧化氫。 濕法破壞可分為：硫酸-硝酸法、硫酸-高氯酸法、硫酸-硫酸鹽法、硝酸-高錳酸鉀法。第12頁(yè)/共128頁(yè)第十二頁(yè)，共129頁(yè)。以硫酸-硫酸鹽法為基礎(chǔ)的含氮有機(jī)藥物定量分析方法―凱氏定氮法原理將含氮有機(jī)藥物與硫酸和硫酸鹽在凱氏燒瓶中共熱，藥物分子中有機(jī)結(jié)構(gòu)被氧化分解成二氧化碳和水，有機(jī)結(jié)合的氮?jiǎng)t轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)機(jī)氨，并于過(guò)量的硫酸結(jié)合為硫酸氫銨及硫酸銨；經(jīng)NaOH堿化后釋放出氨氣，并隨水蒸汽餾出，用硼酸溶液或定量的酸滴定液吸收后，再用酸或堿滴定液滴定。加入硫酸鹽的作用是：提高硫酸的沸點(diǎn)，增強(qiáng)硫酸的氧化破壞能力，且防止硫酸的分解損失。第13頁(yè)/共128頁(yè)第十三頁(yè)，共129頁(yè)。以硫酸-硫酸鹽法為基礎(chǔ)的含氮有機(jī)藥物定量分析方法―凱氏定氮法原理（續(xù)）催化劑（如汞或汞鹽、硒粉、銅鹽、二氧化錳）：加快氧化分解的速度，以縮短反應(yīng)時(shí)間。硫酸銅因價(jià)廉易得，且無(wú)揮發(fā)、毒性低，常被用作本法的催化劑。對(duì)某些難以分解的藥物（如含氮雜環(huán)結(jié)構(gòu)藥物），在氧化分解過(guò)程中常需加入輔助氧化劑，使分解完全并縮短分解時(shí)間。常用的輔助氧化劑有30%過(guò)氧化氫和高氯酸。高氯酸為強(qiáng)氧化劑，用量不宜過(guò)大。第14頁(yè)/共128頁(yè)第十四頁(yè)，共129頁(yè)。以硫酸-硫酸鹽法為基礎(chǔ)的含氮有機(jī)藥物定量分析方法―凱氏定氮法操作（常量法）氧化分解供試品適量置于500ml凱氏燒瓶中依次加入10gK2SO4和0.5gCuSO4粉末沿瓶壁加入20mlH2SO4加熱至溶液成澄明的綠色后，繼續(xù)加熱30min放冷，沿瓶壁加250ml水，振搖混合放冷，加75ml40%NaOH溶液加鋅粒數(shù)粒（防爆沸）用氮?dú)馇驅(qū)P氏燒瓶與冷凝管連接第15頁(yè)/共128頁(yè)第十五頁(yè)，共129頁(yè)。吸收與滴定取2%硼酸溶液50ml置500ml錐形瓶中加甲基紅-溴甲酚綠混合指示劑10滴將冷凝管下端插入硼酸溶液的液面下輕輕擺動(dòng)凱氏燒瓶后，加熱蒸餾餾出液用硫酸滴定液（0.05mol/L）滴定至溶液由藍(lán)綠色變?yōu)榛易仙珜⒌味ǖ慕Y(jié)果用空白實(shí)驗(yàn)校正第16頁(yè)/共128頁(yè)第十六頁(yè)，共129頁(yè)。以硫酸-硫酸鹽法為基礎(chǔ)的含氮有機(jī)藥物定量分析方法―凱氏定氮法應(yīng)用范圍中國(guó)藥典主要應(yīng)用本法測(cè)定含氨基或酰胺結(jié)構(gòu)的藥物含量；對(duì)于以偶氮或肼等結(jié)構(gòu)存在的含氮藥物，因在消解過(guò)程中易于生成氮?dú)舛鴵p失，需在消解前加入鋅粉還原后再依法處理；雜環(huán)中的氮，因不易斷鍵而難以消解，可用氫碘酸或紅磷還原為氫化雜環(huán)后再行消解；對(duì)于含氮量較高（>10%）的樣品，可在消解液中加入少量多碳化合物，如蔗糖、淀粉等作為還原劑，以利于氮轉(zhuǎn)變?yōu)榘?。?7頁(yè)/共128頁(yè)第十七頁(yè)，共129頁(yè)。干法破壞

本法主要適用于含鹵素、硫、磷等有機(jī)藥物分析的前處理，亦可用于某些藥物中硒及砷鹽的檢查。根據(jù)破壞方式可分為高溫?zé)胱品ê脱跗咳紵?。高溫?zé)胱品ǎ涸恚?將含待測(cè)元素的有機(jī)藥物經(jīng)高溫灼燒灰化，使有機(jī)結(jié)構(gòu)分解而到測(cè)元素轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)元素或可溶性無(wú)機(jī)鹽，以供分析。第18頁(yè)/共128頁(yè)第十八頁(yè)，共129頁(yè)。應(yīng)用范圍：本法主要適用于含鹵素藥物的鑒別，亦可用于含磷藥物的定量測(cè)定和藥物中砷鹽的檢查。根據(jù)分析對(duì)象與目的不同，常加無(wú)水Na2CO3、Mg（NO3)2、Ca(OH)2、ZnO等輔助灰化。含碘藥物的鑒別：將適量樣品置于坩鍋中。直火熾灼，或與無(wú)水Na2CO3混勻后，熾灼至紫色的碘蒸汽產(chǎn)生。含氟、氯、溴等元素藥物的鑒別：將適量樣品置于坩鍋中，與無(wú)水Na2CO3（或Na2CO3-K2CO3混合物）混合，熾灼至完全灰化，加水溶解后鑒別。第19頁(yè)/共128頁(yè)第十九頁(yè)，共129頁(yè)。含磷藥物（如甘油磷酸鈉注射液）的定量測(cè)定：精密稱(chēng)取樣品1ml，置于瓷坩鍋中，加氧化鋅1g，加熱碳化后在600℃熾灼1h，放冷，加水與鹽酸個(gè)5ml，加熱煮沸使溶解后，用鉬藍(lán)比色法測(cè)定。砷鹽的檢查：有機(jī)結(jié)合的砷經(jīng)與無(wú)水Na2CO3或Ca(OH)2、Mg(NO3)2共熱（<700℃）轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)砷酸鹽后，依法檢查。本法主要用于高分子化合物（如：右旋糖酐鐵）或植物提取物（如：大豆油）中砷鹽的檢查，亦應(yīng)用與少數(shù)有機(jī)藥物（如吡羅昔康、布美他尼等）.第20頁(yè)/共128頁(yè)第二十頁(yè)，共129頁(yè)。氧瓶燃燒法：原理：將含待測(cè)元素的有機(jī)藥物置于充滿(mǎn)氧氣的密閉燃燒瓶中充分燃燒，使有機(jī)結(jié)構(gòu)部分徹底分解為CO2和H2O，而待測(cè)元素根據(jù)電負(fù)性的不同轉(zhuǎn)化為不同的氧化物（或無(wú)氧酸），被吸收于適當(dāng)?shù)奈找褐校ǘ嘁运岣x子形式存在）以供分析。本法適用于含鹵素或硫、磷等元素的有機(jī)藥物的鑒別、限度檢查或含量測(cè)定，亦可用于藥物中雜質(zhì)硒的檢查。第21頁(yè)/共128頁(yè)第二十一頁(yè)，共129頁(yè)。儀器裝置：燃燒瓶為500ml、1000ml或2000ml的磨口、硬質(zhì)錐形瓶，瓶塞應(yīng)嚴(yán)密，底部熔封鉑絲一根（直徑：1mm），鉑絲下端做成網(wǎng)狀或螺旋狀，長(zhǎng)度約為瓶身長(zhǎng)度的2/3。通常取樣量為10～20mg，使用500ml燃燒瓶；加大樣品取樣量（200mg）時(shí)可選用1000ml或2000ml的燃燒瓶第22頁(yè)/共128頁(yè)第二十二頁(yè)，共129頁(yè)。A～F氧瓶燃燒裝置與樣品包裝操作圖第23頁(yè)/共128頁(yè)第二十三頁(yè)，共129頁(yè)。吸收液的選擇：根據(jù)待測(cè)元素的種類(lèi)與所選用的分析方法選擇適當(dāng)?shù)奈找海墒箻悠方?jīng)燃燒分解所生成的不同價(jià)態(tài)的待測(cè)元素定量地被吸收并轉(zhuǎn)變?yōu)閱我粌r(jià)態(tài)，以滿(mǎn)足分析方法的要求。

含氟藥物一般選用茜素氟藍(lán)比色法檢查氟含量，其燃燒產(chǎn)物為單一的氟化氫，可選用水作為吸收液。

吸收液的選擇第24頁(yè)/共128頁(yè)第二十四頁(yè)，共129頁(yè)。

采用銀量法測(cè)定含氯藥物時(shí)，燃燒產(chǎn)物亦為單一的氯化氫，但氯化氫在水中溶解度較低，需用H2O-NaOH溶液作為吸收液。

采用銀量法測(cè)定含溴藥物時(shí)，分解產(chǎn)生的溴化氫可被氧氣氧化成單質(zhì)溴，故其燃燒產(chǎn)物為單質(zhì)溴和溴化氫的混合物，可在H2O-NaOH吸收液中加入還原劑SO2飽和溶液，將單質(zhì)溴還原為溴負(fù)離子。吸收液的選擇第25頁(yè)/共128頁(yè)第二十五頁(yè)，共129頁(yè)。

測(cè)定含碘藥物時(shí)，分解產(chǎn)生的碘化氫可被氧氣進(jìn)一步氧化，其燃燒產(chǎn)物主要為單質(zhì)碘，并含有少量的五價(jià)碘（HIO3）與一價(jià)碘（HI）。當(dāng)使用AgNO3滴定法測(cè)定含量時(shí)，用H2O-NaOH溶液-SO2飽和溶液作為吸收液，上述不同價(jià)態(tài)的碘均轉(zhuǎn)變?yōu)樨?fù)一價(jià)的碘（NaI）；若使用間接碘量法測(cè)定時(shí)，用H2O-NaOH溶液為吸收液，此時(shí)吸收液中的待測(cè)物轉(zhuǎn)變?yōu)榈馑徕c（NaIO3）與碘化鈉，可用溴-醋酸溶液將其氧化為同一價(jià)態(tài)，即HIO3后，再加KI使之定量生成單質(zhì)碘，再用硫代硫酸鈉滴定生成的碘。吸收液的選擇第26頁(yè)/共128頁(yè)第二十六頁(yè)，共129頁(yè)。

含硫藥物的燃燒產(chǎn)物主要為SO3，可用濃H2O2與水的混合液作為吸收液，燃燒產(chǎn)物經(jīng)吸收轉(zhuǎn)變?yōu)镠2SO4，加入鹽酸溶液并煮沸除去剩余的過(guò)氧化氫后，加入BaCl2，使硫酸生成BaSO4，以重量法測(cè)定含量。

含磷藥物（有機(jī)膦酸類(lèi)）的燃燒產(chǎn)物為P2O5，以水為吸收液，加入少量硝酸溶液并經(jīng)煮沸使焦磷酸（H4P2O7）和偏磷酸[(HPO3)n]轉(zhuǎn)化為磷酸后，采用鉬藍(lán)比色法測(cè)定含量。

硒化合物在有機(jī)燃燒分解的同時(shí)轉(zhuǎn)化為SeO2（含有少量的SeO3），經(jīng)硝酸溶液（1→30）吸收后轉(zhuǎn)變?yōu)槲幔℉2SeO4），再用二氨基奈比色法測(cè)定。吸收液的選擇第27頁(yè)/共128頁(yè)第二十七頁(yè)，共129頁(yè)。操作法：燃燒瓶?jī)?nèi)加入規(guī)定的吸收液瓶口用水濕潤(rùn)小心急速通入氧氣后蓋上表面皿點(diǎn)燃包有供試品的濾紙，迅速放入燃燒瓶中按緊瓶塞，用少量水封閉瓶口俟燃燒完畢后充分振搖，使生成的煙霧完全吸收用少量水沖洗瓶塞和鉑絲，合并洗液和吸收液用同法另作空白實(shí)驗(yàn)依法進(jìn)行鑒別、檢查或含量測(cè)定第28頁(yè)/共128頁(yè)第二十八頁(yè)，共129頁(yè)。例：碘苯酯的含量測(cè)定

本品主要為10-對(duì)碘苯基十一酸乙酯與鄰、間位的碘苯基十一酸乙酯的混合物。碘苯酯I第29頁(yè)/共128頁(yè)第二十九頁(yè)，共129頁(yè)。精密稱(chēng)定本品約20mg照氧瓶燃燒法進(jìn)行有機(jī)破壞吸收液：2ml氫氧化鈉試液+10ml水吸收完全后，加10ml溴-醋酸溶液密塞，振搖，放置數(shù)分鐘，加甲酸約1ml用水洗滌瓶口，通空氣3～5分鐘除去剩余Br蒸汽加碘化鉀2g，密塞，搖勻用Na2S2O3（0.02mol/L）滴定，指示劑：淀粉；結(jié)果用空白實(shí)驗(yàn)校正測(cè)定方法第30頁(yè)/共128頁(yè)第三十頁(yè)，共129頁(yè)。IO2/燃燒I2(HIO3、HIO、HI)I2+2NaOHNaIO+NaI+H2O3NaIONaIO3+2NaI3Br2+I-+3H2OIO3-+6HBrBr2

（過(guò)量的）+HCOOH2HBr+CO2IO3-+5I-+6H+3I2+3H2OOH-I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6第31頁(yè)/共128頁(yè)第三十一頁(yè)，共129頁(yè)。氧瓶燃燒法中的裝置和材料有（）A.磨口硬質(zhì)玻璃錐形瓶B.磨口軟質(zhì)玻璃錐形瓶C.鉑絲D.鐵絲E.無(wú)灰濾紙F(tuán).鋁絲自測(cè)題第32頁(yè)/共128頁(yè)第三十二頁(yè)，共129頁(yè)。

氧瓶燃燒法可用于A.含鹵素有機(jī)藥物的含量測(cè)定B.醚類(lèi)藥物的含量測(cè)定C.檢查甾體激素類(lèi)藥物中的氟D.檢查甾體激素類(lèi)藥物中的硒E.芳酸類(lèi)藥物的含量測(cè)定第33頁(yè)/共128頁(yè)第三十三頁(yè)，共129頁(yè)。氧瓶燃燒法測(cè)定含氯有機(jī)藥物時(shí)所用的吸收液多數(shù)為（）A.H2O2溶液B.H2O2-NaOH溶液C.NaOH溶液D．硫酸肼飽和液E.NaOH-硫酸肼飽和液第34頁(yè)/共128頁(yè)第三十四頁(yè)，共129頁(yè)。第二節(jié)定量分析法的特點(diǎn)一、容量分析法 容量分析法（也稱(chēng)滴定法），是將已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液（滴定液）滴定被測(cè)藥物溶液，直至滴定液與被測(cè)藥物反應(yīng)完全（通過(guò)適當(dāng)方法指示），根據(jù)滴定液的濃度和消耗的體積，按化學(xué)計(jì)量關(guān)系計(jì)算出被測(cè)藥物的含量。第35頁(yè)/共128頁(yè)第三十五頁(yè)，共129頁(yè)。容量分析法的特點(diǎn) 在容量分析法中，常需借助指示劑的顏色改變來(lái)判斷滴定終點(diǎn)的到達(dá)。但滴定終點(diǎn)與反應(yīng)的化學(xué)計(jì)量點(diǎn)不一定恰好符合，二者之差稱(chēng)為滴定誤差，是容量分析誤差的來(lái)源之一，為了減少滴定誤差，需要選擇合適的指示劑。 容量分析法所用儀器價(jià)廉易得，操作簡(jiǎn)便、快捷，方法耐用性高，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確（通常相對(duì)誤差<0.2%）。但專(zhuān)屬性（選擇性）較差，一般適用于含量較高的試樣分析（如化學(xué)原料藥）第36頁(yè)/共128頁(yè)第三十六頁(yè)，共129頁(yè)。容量分析法的有關(guān)計(jì)算滴定度：每1ml規(guī)定濃度的滴定液所相當(dāng)?shù)谋粶y(cè)藥物的質(zhì)量，《中國(guó)藥典》規(guī)定滴定度用mg表示。滴定度的計(jì)算： 設(shè)被測(cè)藥物分子（A）與滴定劑（B）之間的反應(yīng)如下：

反應(yīng)完全時(shí)，被測(cè)藥物的量（WA）與滴定劑的量（WB）的關(guān)系為：MA：被測(cè)藥物分子量MB：滴定劑分子量第37頁(yè)/共128頁(yè)第三十七頁(yè)，共129頁(yè)。

被測(cè)藥物的量（WA）可有下式計(jì)算：nB：被測(cè)藥物消耗的滴定劑的摩爾數(shù)mB：滴定液的摩爾濃度VB：被測(cè)藥物消耗的滴定劑的體積

單位體積（VB=1mol）的滴定液相當(dāng)于被測(cè)藥物的量被稱(chēng)為滴定度，用T表示，量綱為mg/ml。第38頁(yè)/共128頁(yè)第三十八頁(yè)，共129頁(yè)。例：維生素的含量測(cè)定

用碘量法測(cè)定維生素C[M(C6H8O6)=176.13]的含量時(shí)，碘滴定液的摩爾濃度為0.05mol/L（以I2為單元），化學(xué)反應(yīng)式如下：

求碘滴定液的滴定度T。第39頁(yè)/共128頁(yè)第三十九頁(yè)，共129頁(yè)。含量的計(jì)算： 用容量分析法測(cè)定藥物的含量時(shí)，滴定方式有直接滴定法和間接滴定法。直接滴定法：用滴定液直接滴定被測(cè)藥物，被測(cè)藥物的百分含量計(jì)算式如下：

若配置的滴定液的摩爾濃度與《中國(guó)藥典》中規(guī)定的濃度不一致時(shí)，應(yīng)將滴定度乘以校正因素F。第40頁(yè)/共128頁(yè)第四十頁(yè)，共129頁(yè)。間接滴定法：包括生成物滴定法和剩余量滴定法

生成物滴定法：被測(cè)藥物與化合物A作用，定量生成化合物B，再用滴定液滴定化合物B。該法的百分含量計(jì)算方法與直接滴定法相同。

例：葡萄糖酸銻鈉的含量測(cè)定精密稱(chēng)定本品約0.3g，置錐形瓶中加水100ml鹽酸15ml碘化鉀10ml用Na2S2O3(0.1mol/L)滴定，指示劑：淀粉第41頁(yè)/共128頁(yè)第四十一頁(yè)，共129頁(yè)。Na2S2O3滴定液的滴定度T第42頁(yè)/共128頁(yè)第四十二頁(yè)，共129頁(yè)。

剩余量滴定法：先加入定量的過(guò)量的滴定液A，使其與被測(cè)藥物反應(yīng)，再用另一滴定液B來(lái)回滴定反應(yīng)剩余的滴定液A。本法常需進(jìn)行空白實(shí)驗(yàn)校正。

其百分含量可按下式計(jì)算：W：供試品的稱(chēng)取量TA：滴定液A的滴定度FB：滴定液B的濃度校正因子VB0：空白實(shí)驗(yàn)時(shí)消耗的滴定液B的體積VBS：樣品測(cè)定時(shí)消耗的滴定液B的體積第43頁(yè)/共128頁(yè)第四十三頁(yè)，共129頁(yè)。例：司可巴比妥的含量測(cè)定精密稱(chēng)定本品約0.1g，置碘瓶中加水10ml，振搖使溶解用Na2S2O3(0.1mol/L)滴定，指示劑：淀粉精密加25ml溴滴定液(0.05mol/L),再加鹽酸5mol，立即密塞、搖勻加碘化鉀試液10ml，搖勻結(jié)果用空白實(shí)驗(yàn)校正供試品的稱(chēng)去量：0.1022gNa2S2O3濃度校正因數(shù)：1.038司可巴比妥的摩爾質(zhì)量：260.23司可巴比妥與溴反應(yīng)的摩爾比：1:1供試品消耗Na2S2O3的體積：15.73ml空白實(shí)驗(yàn)消耗Na2S2O3的體積：23.21ml已知求司可巴比妥的含量第44頁(yè)/共128頁(yè)第四十四頁(yè)，共129頁(yè)。溴滴定液的滴定度T第45頁(yè)/共128頁(yè)第四十五頁(yè)，共129頁(yè)。二、光譜分析法 光譜分析法，是利用物質(zhì)的光譜進(jìn)行定性、定量和結(jié)構(gòu)分析。通過(guò)測(cè)定被測(cè)物質(zhì)在光譜的特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)的吸光度或發(fā)光強(qiáng)度，對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析的方法稱(chēng)為分光光度法。

《中國(guó)藥典》收載的光譜分析法有：紫外-可見(jiàn)分光光度法、紅外分光光度法、熒光分析法等。第46頁(yè)/共128頁(yè)第四十六頁(yè)，共129頁(yè)。紫外-可見(jiàn)分光光度法

紫外光區(qū)：200～400；可見(jiàn)光區(qū)：400～760nm朗伯-比爾定律

A：吸光度；T：透光率；L：比色皿厚度；

C：每100ml溶液中所含被測(cè)物質(zhì)的重量（g）；

E：吸收系數(shù)，以

表示，物理意義為當(dāng)溶液濃度為1%(g/ml)，L為1cm時(shí)的吸光度。第47頁(yè)/共128頁(yè)第四十七頁(yè)，共129頁(yè)。特點(diǎn)靈敏度高（10-4～10-7g/ml）準(zhǔn)確度高（相對(duì)誤差：2%～5%）儀器價(jià)格低廉，操作簡(jiǎn)單，易于普及。應(yīng)用廣泛，借助化學(xué)計(jì)量學(xué)方法，可不經(jīng)分離直接測(cè)定混合物中各組分含量。第48頁(yè)/共128頁(yè)第四十八頁(yè)，共129頁(yè)。儀器校正和鑒定波長(zhǎng)校正:利用汞燈或氘燈中的較強(qiáng)譜線。吸光度的準(zhǔn)確度的檢定：利用重鉻酸鉀的硫酸溶液在規(guī)定波長(zhǎng)處的吸收系數(shù)。雜散光的檢查：利用規(guī)定濃度的碘化鈉或亞硝酸鈉溶液在規(guī)定波長(zhǎng)處的透光率。第49頁(yè)/共128頁(yè)第四十九頁(yè)，共129頁(yè)。對(duì)溶劑的要求含雜原子的有機(jī)溶劑具有很強(qiáng)的末端吸收，使用時(shí)不能超出其截止波長(zhǎng)（如甲醇和乙醇的截止波長(zhǎng)為205nm）。溶劑的吸光度：220～240nm，≤0.40241～250nm，≤0.20251～300nm，≤0.10300nm以上，≤0.05第50頁(yè)/共128頁(yè)第五十頁(yè)，共129頁(yè)。測(cè)定方法對(duì)照品比較法:CX：供試品溶液的濃度；AX：供試品溶液的吸光度CR：對(duì)照品溶液的濃度；AR：對(duì)照品溶液的吸光度第51頁(yè)/共128頁(yè)第五十一頁(yè)，共129頁(yè)。吸收系數(shù)法:CX：供試品溶液的濃度（g/ml）；

AX：供試品溶液的吸光度；：被測(cè)成分的百分吸收系數(shù)(要求：>100）；100：濃度換算因素，將g/100ml換算成g/ml。顯色法:當(dāng)供試品在紫外-可見(jiàn)光區(qū)沒(méi)有強(qiáng)吸收，或雖有吸收，但為了避免干擾或提高靈敏度，加入適當(dāng)?shù)娘@色劑顯色后進(jìn)行測(cè)定。第52頁(yè)/共128頁(yè)第五十二頁(yè)，共129頁(yè)。熒光分析法

利用熒光強(qiáng)度與溶液中發(fā)射熒光的物質(zhì)的濃度成正比關(guān)系進(jìn)行定量分析。特點(diǎn)靈敏度高（10-10～10-12g/ml）適用與低濃度溶液（濃度太高可致“自熄滅”）對(duì)易被光分解的樣品，需使用基準(zhǔn)溶液代替對(duì)照品溶液校正儀器的靈敏度。能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)較少，常需使用熒光衍生試劑得到強(qiáng)熒光，以提高靈敏度和選擇性。第53頁(yè)/共128頁(yè)第五十三頁(yè)，共129頁(yè)。干擾因素的排除溶劑：溶劑不純會(huì)帶來(lái)較大誤差，蒸餾后再使用。溶液：懸浮物對(duì)光有散射作用，過(guò)濾或離心除去；溶解氧有降低熒光的作用，通入惰性氣體除氧。玻璃儀器：玻璃儀器和測(cè)定池應(yīng)高度潔凈。溫度：溫度對(duì)熒光強(qiáng)度有較大影響，需控制溫度。第54頁(yè)/共128頁(yè)第五十四頁(yè)，共129頁(yè)。測(cè)定法CX：供試品溶液的濃度Cr：對(duì)照品溶液的濃度RX：供試品溶液的熒光強(qiáng)度Rr：對(duì)照品溶液的熒光強(qiáng)度RXb：供試品溶液試劑空白的熒光強(qiáng)度Rrb：對(duì)照品溶液試劑空白的熒光強(qiáng)度第55頁(yè)/共128頁(yè)第五十五頁(yè)，共129頁(yè)。色譜分析法

利用混合物中各組分在吸附劑上的吸附能力的不同或在兩相中的分配系數(shù)的不同，先行分離后再在線對(duì)各組分逐一進(jìn)行分析。高效液相色譜法：靈敏度高（10-12～10-15g/ml）高選擇性高效能高速度應(yīng)用廣泛第56頁(yè)/共128頁(yè)第五十六頁(yè)，共129頁(yè)。對(duì)儀器的一般要求

色譜柱填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠、辛基（或氨基、氰基）硅烷鍵和硅膠、離子交換劑（離子交換色譜）、凝膠或高分子多孔微球（分子排阻色譜）；

十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18）固定相：甲醇-水、乙腈、緩沖液、反離子物質(zhì)等可為流動(dòng)相。但流動(dòng)相中有機(jī)溶劑不應(yīng)<5%，以使C18保持伸展?fàn)顟B(tài)。第57頁(yè)/共128頁(yè)第五十七頁(yè)，共129頁(yè)。柱溫：室溫進(jìn)樣量：數(shù)微升檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器

不同檢測(cè)器和固定相對(duì)流動(dòng)相的要求不同 紫外檢測(cè)器：流動(dòng)相符合紫外-可見(jiàn)分光光度法對(duì)溶劑的要求； 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器和質(zhì)譜檢測(cè)器：流動(dòng)相中不允許含有不揮發(fā)的鹽組分；第58頁(yè)/共128頁(yè)第五十八頁(yè)，共129頁(yè)?！吨袊?guó)藥典》中規(guī)定的條件除固定相種類(lèi)、流動(dòng)相組成、檢測(cè)器類(lèi)型不得任意改變，其他如色譜柱內(nèi)徑、長(zhǎng)度、柱溫、進(jìn)樣量等可適當(dāng)改變，以適應(yīng)具體體系。第59頁(yè)/共128頁(yè)第五十九頁(yè)，共129頁(yè)。系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)：

色譜柱的理論板數(shù)（n）：

n=5.54(tR/wh/2)2wh/2：半峰寬tR：供試品主成分或內(nèi)標(biāo)物色譜峰保留時(shí)間

分離度（R）：tR1，tR2：兩相鄰色譜峰的保留時(shí)間w1，w2：兩相鄰色譜峰的峰寬第60頁(yè)/共128頁(yè)第六十頁(yè)，共129頁(yè)。

重復(fù)性：

連續(xù)進(jìn)樣5次，峰面積測(cè)量值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于2%。

拖尾因子（T）：W0.05h：5%峰高處的峰寬d1：峰頂點(diǎn)至峰前沿5%峰高處之間的距離應(yīng)用峰高法定量時(shí)，T值應(yīng)在0.95～1.05之間。第61頁(yè)/共128頁(yè)第六十一頁(yè)，共129頁(yè)。測(cè)定法：內(nèi)標(biāo)法加校正因子法：AR：內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積；AS：對(duì)照品的峰面積CR：內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的濃度；CS：對(duì)照品的濃度AX：供試品的峰面積；AR?：內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積CX：供試品的濃度；CR?：內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的濃度第62頁(yè)/共128頁(yè)第六十二頁(yè)，共129頁(yè)。外標(biāo)法：AX：供試品的峰面積；AR：外標(biāo)物質(zhì)的峰面積CX：供試品的濃度；CR：外標(biāo)物質(zhì)的濃度由于微量進(jìn)樣器不易精確控制進(jìn)樣，當(dāng)采用外標(biāo)法定量時(shí)，宜用自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣。第63頁(yè)/共128頁(yè)第六十三頁(yè)，共129頁(yè)。氣相色譜法對(duì)儀器的一般要求

色譜柱：填充柱（材質(zhì)：不銹鋼或玻璃，載體：硅藻土或高分子多孔小球）或毛細(xì)管組柱（材質(zhì)：玻璃或石英，固定液：甲基聚硅氧烷等）.

檢測(cè)器：氫火焰離子化檢測(cè)器

進(jìn)樣量：數(shù)微升

檢測(cè)溫度：250～350?C（以免水汽凝結(jié)）第64頁(yè)/共128頁(yè)第六十四頁(yè)，共129頁(yè)?！吨袊?guó)藥典》中規(guī)定的條件除檢測(cè)器種類(lèi)、固定液品種、及特殊指定的色譜柱材料不得任意改變，其他如色譜柱內(nèi)徑、長(zhǎng)度、固體液涂布濃度、進(jìn)樣量等可適當(dāng)改變，以適應(yīng)具體體系。一般色譜圖約于30min內(nèi)記錄完畢。第65頁(yè)/共128頁(yè)第六十五頁(yè)，共129頁(yè)。氣相色譜系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)同高效液相色譜。測(cè)定法：

除高效液相色譜項(xiàng)下規(guī)定的兩種方法外，亦可采用標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法。AX：供試品中待測(cè)組分的峰面積Ais：加入對(duì)照品后待測(cè)組分的峰面積CX：供試品中待測(cè)組分的濃度ΔCX：加入的已知濃度的待測(cè)組分對(duì)照品的濃度第66頁(yè)/共128頁(yè)第六十六頁(yè)，共129頁(yè)。測(cè)定法方法的選擇手工進(jìn)樣：采用內(nèi)標(biāo)法自動(dòng)進(jìn)樣：采用內(nèi)標(biāo)法或外標(biāo)法頂空進(jìn)樣：標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法與其他定量方法結(jié)果不一致時(shí)，應(yīng)以標(biāo)準(zhǔn)加入法的結(jié)果為準(zhǔn)。第67頁(yè)/共128頁(yè)第六十七頁(yè)，共129頁(yè)。第三節(jié)藥品分析方法的驗(yàn)證一、準(zhǔn)確度 方法測(cè)定結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般用回收率（%）表示。藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證的目的是證明采用的方法適合于相應(yīng)的檢測(cè)要求。驗(yàn)證的內(nèi)容包括：準(zhǔn)確度、精密度、專(zhuān)屬性、檢測(cè)限、定量限、線性、范圍和耐用性。第68頁(yè)/共128頁(yè)第六十八頁(yè)，共129頁(yè)。含量測(cè)定方法原料藥的含量測(cè)定：用已知純度的對(duì)照品或供試品進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率。制劑的含量測(cè)定：用含已知量被測(cè)物的制劑各組分混合物進(jìn)行測(cè)定，回收率按上式計(jì)算。如不能獲得制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測(cè)物進(jìn)行測(cè)定，回收率則應(yīng)按下式計(jì)算。第69頁(yè)/共128頁(yè)第六十九頁(yè)，共129頁(yè)。雜質(zhì)定量測(cè)定方法

雜質(zhì)定量測(cè)定多采用色譜法，其準(zhǔn)確度可通過(guò)向原料藥或制劑中加入已知量雜質(zhì)進(jìn)行測(cè)試。 如不能獲得雜質(zhì)或降解產(chǎn)物，可將本法測(cè)試結(jié)果與另一成熟的方法進(jìn)行比較。 應(yīng)表明單個(gè)雜質(zhì)或雜質(zhì)總量相當(dāng)于主成分的重量比（%）或面積比（%）。第70頁(yè)/共128頁(yè)第七十頁(yè)，共129頁(yè)。數(shù)據(jù)要求

至少用9個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)； 應(yīng)報(bào)告已知加入量的回收率(%)，或測(cè)定結(jié)果的平均值與真實(shí)值之差及其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差或可信度。二、精密度 在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一均勻供試品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。 精密度可用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。第71頁(yè)/共128頁(yè)第七十一頁(yè)，共129頁(yè)。標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（SD）偏差（d）：測(cè)量值與平均值之差相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（RSD)第72頁(yè)/共128頁(yè)第七十二頁(yè)，共129頁(yè)。驗(yàn)證內(nèi)容重復(fù)性： 在較短時(shí)間間隔內(nèi)，在相同的操作條件下由同一分析人員所測(cè)的結(jié)果的精密度（批內(nèi)精密度）。 至少用9個(gè)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。中間精密度：在同一實(shí)驗(yàn)室，在不同時(shí)間，由不同人員用不同設(shè)備所測(cè)定結(jié)果的精密度。重現(xiàn)性：在不同實(shí)驗(yàn)室，由不同人員用不同設(shè)備所測(cè)定結(jié)果的精密度。第73頁(yè)/共128頁(yè)第七十三頁(yè)，共129頁(yè)。數(shù)據(jù)要求應(yīng)報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差和可信限。三、專(zhuān)屬性 在其他成分可能存在下，采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性。鑒別反應(yīng)專(zhuān)屬性：應(yīng)能與可能共存的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似的化合物區(qū)分，不含被測(cè)成分的樣品均應(yīng)呈負(fù)反應(yīng)。第74頁(yè)/共128頁(yè)第七十四頁(yè)，共129頁(yè)。含量測(cè)定和雜質(zhì)測(cè)定專(zhuān)屬性

色譜法和其他分離法，應(yīng)附代表性圖譜，且標(biāo)明諸成分的位置。 對(duì)于含量測(cè)定，試樣中應(yīng)加入雜質(zhì)，考察測(cè)定結(jié)果是否受干擾。 對(duì)于雜質(zhì)測(cè)定，也可向試樣中加入一定量的雜質(zhì)，考察雜質(zhì)能否得到分離。 在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得時(shí)，可將含有雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣進(jìn)行測(cè)定，并與另一個(gè)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的方法比較。第75頁(yè)/共128頁(yè)第七十五頁(yè)，共129頁(yè)。四、檢測(cè)限(limitofdetection,LOD)

試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低濃度或量。它反應(yīng)方法的靈敏度，無(wú)需準(zhǔn)確定量。常用方法目視法：

用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。

適用于非儀器分析法（如顯色鑒別法、薄層色譜法檢測(cè)雜質(zhì)）。第76頁(yè)/共128頁(yè)第七十六頁(yè)，共129頁(yè)。信噪比法：

用已知低濃度樣品測(cè)出的信號(hào)與空白樣品測(cè)出的信號(hào)進(jìn)行比較，計(jì)算出能被可靠檢測(cè)出的最低濃度或量。 一般以信噪比S/N=3（或2)時(shí)的相應(yīng)濃度或量確定為檢測(cè)限。數(shù)據(jù)要求

使用5～6份試樣，其濃度為近似或等于檢測(cè)限目標(biāo)值，進(jìn)行分析，以可靠地測(cè)定檢測(cè)限。報(bào)告應(yīng)附測(cè)試圖譜，說(shuō)明測(cè)試過(guò)程和檢測(cè)限結(jié)果。第77頁(yè)/共128頁(yè)第七十七頁(yè)，共129頁(yè)。五、定量限(limitationofquantitation,LOQ)

試樣中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)具有一定的準(zhǔn)確度和精密度。 雜質(zhì)和降解產(chǎn)物用定量測(cè)定方法研究時(shí)，應(yīng)確定定量限。

LOQ的測(cè)定方法與LOD的方法相同，只是相應(yīng)的系數(shù)不同。LOQ為S/N=10時(shí)的相應(yīng)濃度或量。第78頁(yè)/共128頁(yè)第七十八頁(yè)，共129頁(yè)。六、線性 測(cè)試結(jié)果（響應(yīng)值）與試樣中被測(cè)物的濃度或量直接呈正比關(guān)系的程度。 制備至少5份供試品溶液進(jìn)行測(cè)定，以測(cè)得的響應(yīng)值（或其數(shù)學(xué)變換值）作為被測(cè)物濃度的函數(shù)做圖，觀察是否呈線性，再用最小二乘進(jìn)行線性回歸。 數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)以及線性圖。第79頁(yè)/共128頁(yè)第七十九頁(yè)，共129頁(yè)。七、范圍 指能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性，測(cè)試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。 涉及到定量測(cè)定的檢測(cè)項(xiàng)目均需要對(duì)范圍進(jìn)行驗(yàn)證。 原料藥和制劑含量測(cè)定，范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的80%～120%。 制劑含量均勻度檢查，范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的70%～130%。第80頁(yè)/共128頁(yè)第八十頁(yè)，共129頁(yè)。

溶出度或釋放度中的溶出量測(cè)定，范圍應(yīng)為限度的±20%。 如規(guī)定了限度范圍，則應(yīng)為下限的-20%至上限的+20%。八、耐用性 指在測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度，為使方法可用于常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。第81頁(yè)/共128頁(yè)第八十一頁(yè)，共129頁(yè)。

典型的變動(dòng)因素：被測(cè)溶液的穩(wěn)定性、樣品提取次數(shù)、時(shí)間等。 液相色譜法中典型的變動(dòng)因素：流動(dòng)相的組成和pH值，不同廠牌或批號(hào)的同類(lèi)型色譜柱、柱溫和流速等。 氣相色譜法中典型的變動(dòng)因素：不同廠牌或批號(hào)的同類(lèi)型色譜柱、固定相、不同類(lèi)型的載體、柱溫、進(jìn)樣口和檢測(cè)溫度等。第82頁(yè)/共128頁(yè)第八十二頁(yè)，共129頁(yè)。非定量分析方法：一般只需驗(yàn)證“專(zhuān)屬性”、“檢測(cè)限”和“耐用性”。定量分析方法：除“檢測(cè)限”和“定量限”外的其余六項(xiàng)均需驗(yàn)證。微定量分析方法：除“檢測(cè)限”視情況而定外，其余七項(xiàng)均需驗(yàn)證。驗(yàn)證內(nèi)容的確定驗(yàn)證一種分析方法，不一定對(duì)所有八個(gè)指標(biāo)都有要求，應(yīng)視方法使用對(duì)象擬定驗(yàn)證內(nèi)容。第83頁(yè)/共128頁(yè)第八十三頁(yè)，共129頁(yè)。容量分析法 用原料藥精制品(含量>99.5％)或?qū)φ掌房疾旆椒ǖ木芏?，相?duì)標(biāo)準(zhǔn)差：≤0.2％；回收率：99.7～100.3％。UV法 用適當(dāng)濃度的精制品進(jìn)行測(cè)定，RSD≤1％；制劑的測(cè)定，回收率：98％～102％；吸光度A：0.2～0.7；濃度點(diǎn)：n＝5。用濃度c對(duì)A作線性回歸處理，得一直線方程，r≥0.999(n＝5)，方程截距應(yīng)近零。各種含量測(cè)定方法對(duì)效能指標(biāo)的要求第84頁(yè)/共128頁(yè)第八十四頁(yè)，共129頁(yè)。HPLC法

RSD<2％;回收率:98％～102％;

用精制品配制一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度點(diǎn)n應(yīng)為5～7，用濃度c對(duì)峰h或被測(cè)物的響應(yīng)值之比進(jìn)行回歸處理，建立回歸方程，r>0.999，截距應(yīng)趨于零;

專(zhuān)屬性：要考查輔料、有關(guān)物質(zhì)或降解產(chǎn)物對(duì)主藥的色譜峰是否有干擾，如有干擾應(yīng)設(shè)法排除.各種含量測(cè)定方法對(duì)效能指標(biāo)的要求（續(xù)）第85頁(yè)/共128頁(yè)第八十五頁(yè)，共129頁(yè)。精密度是指（）測(cè)得的測(cè)量值與真值接近的程度測(cè)得的一組測(cè)量值彼此符合的程度表示該法測(cè)量的正確性在各種正常試驗(yàn)條件下，對(duì)同一樣品分析所得結(jié)果的準(zhǔn)確程度對(duì)供試物準(zhǔn)確而專(zhuān)屬的測(cè)定能力自測(cè)題第86頁(yè)/共128頁(yè)第八十六頁(yè)，共129頁(yè)。藥物雜質(zhì)檢查所要求的效能指標(biāo)為（）

A.準(zhǔn)確度

B.精密度

C．選擇性

D.檢測(cè)限

E.耐用性第87頁(yè)/共128頁(yè)第八十七頁(yè)，共129頁(yè)。精密度的一般表示方法有()A.相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差B.相對(duì)平均偏差C.相對(duì)誤差D.絕對(duì)誤差E.標(biāo)準(zhǔn)差第88頁(yè)/共128頁(yè)第八十八頁(yè)，共129頁(yè)。檢測(cè)限的表示方法有（）A.百分?jǐn)?shù)B.ppmC.ppbD.μgE.ng第89頁(yè)/共128頁(yè)第八十九頁(yè)，共129頁(yè)。用信噪比法表示檢測(cè)限時(shí)，信噪比一般應(yīng)為（）A.1∶1B.3∶1C.4∶1D.5∶1第90頁(yè)/共128頁(yè)第九十頁(yè)，共129頁(yè)。用碘量法測(cè)定維生素C原料藥時(shí)，要求碘量法應(yīng)具備（）A.選擇性B.定量限C.精密度D.檢測(cè)限E.線性第91頁(yè)/共128頁(yè)第九十一頁(yè)，共129頁(yè)。測(cè)定藥物片劑的溶出度或釋放度時(shí)，對(duì)所用測(cè)定方法應(yīng)要求()A.精密度B.定量限C.耐用性D.回收率E.檢測(cè)限第92頁(yè)/共128頁(yè)第九十二頁(yè)，共129頁(yè)。藥物鑒別試驗(yàn)所要求的效能指標(biāo)（）A.準(zhǔn)確度B.精密度C.選擇性D.檢測(cè)限E.耐用性第93頁(yè)/共128頁(yè)第九十三頁(yè)，共129頁(yè)。第四節(jié)生物樣品分析方法的基本要求一、常用樣品的種類(lèi)、采集和貯藏 生物樣品包括各種體液和組織。在體內(nèi)藥物分析中常用的是血液、尿液和唾液。血樣

包括血漿、血清和全血。其中血漿（plasma）和血清（serum）為常用生物樣品。 測(cè)定血中的藥物濃度通常是指測(cè)定血漿或血清中的藥物濃度，而非全血中的藥物濃度。第94頁(yè)/共128頁(yè)第九十四頁(yè)，共129頁(yè)。

供測(cè)定用血樣的采集：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)，可從動(dòng)脈或心臟取血；對(duì)與患者或志愿者，采取靜脈血（或用毛細(xì)管采血）。

血漿的制備：將采取全血置于含有抗凝劑（如肝素、草酸鹽、EDTA等）的試管中，混勻后，以2500～3000r/min離心5min使血漿與血細(xì)胞分離，上清液為血漿。 血清的制備：將采取全血在室溫下放置0.5～1小時(shí)，待血液凝固后，用細(xì)玻棒剝離血餅，以2000～3000r/min離心5～10min，上清液為血清。第95頁(yè)/共128頁(yè)第九十五頁(yè)，共129頁(yè)。

藥物與纖維蛋白幾乎不結(jié)合，血漿與血清中的藥物濃度測(cè)定值通常是相同的。但血漿比血清分離快，且制取的量多，所以血漿較血清更常用。 血樣采取后，應(yīng)及時(shí)分離血漿或血清，并立即進(jìn)行分析。如不能立即測(cè)定，應(yīng)置于具塞硬質(zhì)玻璃管或聚乙烯塑料離心管中密塞保存。 短期保存時(shí)，可置于冰箱冷藏（4?C）；長(zhǎng)期保存需在-20?C或-80?C下冷凍貯藏。第96頁(yè)/共128頁(yè)第九十六頁(yè)，共129頁(yè)。唾液

由腮腺、額下腺、舌下腺和口腔粘膜內(nèi)腺體分泌液混合組成的?？谇徽衬な芑瘜W(xué)刺激，各唾液腺的分泌會(huì)受到影響，造成唾液組成發(fā)生較大變化。

唾液的采集：在安靜狀態(tài)下進(jìn)行，漱口后15分鐘收集；采集后立即除去泡沫，并以3000r/min離心10分鐘，取上清液分析。 若分泌量少，可轉(zhuǎn)動(dòng)舌尖促進(jìn)唾液分泌，也可采用物理的（如嚼石蠟）或化學(xué)的（如酒石酸）方法刺激。但經(jīng)刺激后唾液中的藥物濃度會(huì)受影響。 唾液采集后，應(yīng)在4?C以下保存。第97頁(yè)/共128頁(yè)第九十七頁(yè)，共129頁(yè)。尿液

其主要成分：水、含氮化合物（大部分為尿素）及鹽類(lèi)。

體內(nèi)藥物（原型或代謝物及其綴合物）的清除主要通過(guò)尿液排出。 尿液中藥物濃度高，采集方便、且采集量大。但尿液濃度變化較大。尿液中藥物濃度的改變不能直接反應(yīng)血藥中的濃度。 尿液測(cè)定主要用于藥物劑量回收，尿清除率、生物利用度、以及藥物代謝及其代謝途徑、類(lèi)型、速率等的研究。第98頁(yè)/共128頁(yè)第九十八頁(yè)，共129頁(yè)。

采集的尿液是自然排尿。 測(cè)定尿中藥物的總量時(shí)，應(yīng)收集用藥后的一定時(shí)間內(nèi)（如8h、12h或24h）排泄的全部尿液，記錄體積后，量取一部分用于藥物濃度的測(cè)定，在乘以尿量求得排泄總量。 腎功能不良者不宜采集尿樣。 尿液采集后應(yīng)立即測(cè)定，否則應(yīng)加入防腐劑后置于冰箱中保存。

常用防腐劑：甲苯、二甲苯、三氯甲烷，以及醋酸、鹽酸等。第99頁(yè)/共128頁(yè)第九十九頁(yè)，共129頁(yè)。二、生物樣品分析前處理技術(shù) 生物樣品的前處理應(yīng)主要考慮生物樣品的種類(lèi)、被測(cè)藥物的性質(zhì)和所采用的測(cè)定方法。 依據(jù)生物樣品類(lèi)型：血漿或血清需除蛋白，使藥物從蛋白結(jié)合物中釋出。唾液樣品應(yīng)采用離心去除粘蛋白。尿液樣品常采用酸或酶水解藥物使從綴和物中釋出。第100頁(yè)/共128頁(yè)第一百頁(yè)，共129頁(yè)。

依據(jù)被測(cè)藥物的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)，以及存在形式：藥物的酸堿性與溶解性涉及藥物的萃取手段。是否具有揮發(fā)性涉及能否采用氣相色譜法測(cè)定。光譜特性及官能團(tuán)性質(zhì)涉及是否需要制成衍生物。濃度大的樣品對(duì)前處理要求低，濃度越低的樣品對(duì)前處理要求越高，第101頁(yè)/共128頁(yè)第一百零一頁(yè)，共129頁(yè)。

依據(jù)所采用的測(cè)定方法：純化程度與所采用的測(cè)定方法的專(zhuān)屬性、檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)不純樣品污染的程度密切相關(guān)。放射免疫測(cè)定法具有較高的靈敏度和專(zhuān)屬性，生物樣品只需經(jīng)初步處理除去主要干擾物即可測(cè)定。高效液相色譜法要求除去生物樣品中的蛋白質(zhì)，以防止蛋白質(zhì)等物質(zhì)在色譜柱上沉積。第102頁(yè)/共128頁(yè)第一百零二頁(yè)，共129頁(yè)。蛋白質(zhì)的去除原因：除去蛋白質(zhì)可使蛋白質(zhì)結(jié)合型的藥物釋放出來(lái)。避免溶劑萃取過(guò)程中的乳化現(xiàn)象。保護(hù)儀器性能（如保護(hù)HPLC柱不被玷污），延長(zhǎng)使用壽命。第103頁(yè)/共128頁(yè)第一百零三頁(yè)，共129頁(yè)。方法：加入與水混融的有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑使蛋白質(zhì)凝聚，釋放與之結(jié)合的藥物。常用有機(jī)溶劑：乙腈、甲醇、丙酮、四氫呋喃。含藥物的血漿與有機(jī)溶劑的體積為1:(1～3)時(shí)，可除去90%以上的蛋白質(zhì)。第104頁(yè)/共128頁(yè)第一百零四頁(yè)，共129頁(yè)。加入中性鹽中性鹽使溶液離子強(qiáng)度發(fā)生變化，將與蛋白質(zhì)結(jié)合的水置換出來(lái)，使蛋白質(zhì)脫水而沉淀。常用中性鹽：飽和硫酸銨、硫酸鈉、鎂鹽、磷酸鹽及枸櫞酸鹽加入強(qiáng)酸當(dāng)溶液的pH低于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)時(shí)，以陽(yáng)離子形式存在的蛋白質(zhì)可與酸根離子形成不溶性鹽而沉淀析出。第105頁(yè)/共128頁(yè)第一百零五頁(yè)，共129頁(yè)。含藥物血清與強(qiáng)酸比例為1:0.6混合，可除去90%以上蛋白質(zhì)。常用強(qiáng)酸：10%三氯醋酸、65%高氯酸、5%偏磷酸。過(guò)量的三氯醋酸經(jīng)加熱分解為三氯甲烷和二氧化碳而除去。過(guò)量的高氯酸可用碳酸鉀、醋酸鉀、氫氧化鈉等中和后，加乙醇使之生成高氯酸鉀（或鈉）沉淀除去。偏磷酸可用同法去除。第106頁(yè)/共128頁(yè)第一百零六頁(yè)，共129頁(yè)。加入含鋅鹽及銅鹽的沉淀劑當(dāng)pH高于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)分子中帶負(fù)電荷的羧基與金屬陽(yáng)離子形成不溶性鹽而沉淀。含藥物血清與沉淀劑比例為1:2混合。常用沉淀劑：CuSO4-Na2WO4、ZnSO4-NaOH。第107頁(yè)/共128頁(yè)第一百零七頁(yè)，共129頁(yè)。酶解法測(cè)定某些與蛋白質(zhì)結(jié)合牢固、且對(duì)酸不穩(wěn)定的藥物時(shí)，需用酶解法使蛋白質(zhì)分解而釋放出藥物。常用酶：枯草菌溶素（適用pH：7.0～11.0，溫度：50～60?C

）。第108頁(yè)/共128頁(yè)第一百零八頁(yè)，共129頁(yè)。綴合物的水解原因：含羥基、羧基、氨基和巰基的藥物可與內(nèi)源性物質(zhì)葡萄糖醛酸或硫酸形成葡萄糖酸酐或硫酸酯綴合物。綴合物較原型藥物具有較大的極性，不易被有機(jī)溶劑萃取。尿中藥物多數(shù)呈綴合物狀態(tài)，測(cè)定之前，需將綴合物中的藥物釋放出來(lái)。第109頁(yè)/共128頁(yè)第一百零九頁(yè)，共129頁(yè)。方法：酸水解：加入適量的鹽酸溶液進(jìn)行水解。酶水解遇酸及受熱不穩(wěn)定的藥物，可用酶水解；酶水解具有較高的選擇性、很少使被測(cè)藥物發(fā)生降解，常被優(yōu)先采用；常用葡萄酸酐酶或硫酸酯酶或二者混合物；但酶水解時(shí)間長(zhǎng)、酶制劑帶入的粘液蛋白可能導(dǎo)致乳化及污染色譜柱。第110頁(yè)/共128頁(yè)第一百一十頁(yè)，共129頁(yè)。有機(jī)破壞生物樣品中的金屬離子常與蛋白結(jié)合且難以用溶劑萃取，同時(shí)金屬離子可耐受高溫。測(cè)定生物樣品中金屬離子時(shí)，多采用有機(jī)破壞方法進(jìn)行前處理。常用HNO3-HClO4作為消解劑，其破壞能力強(qiáng)，適用與各種生物樣品。所得金屬離子一般為高價(jià)態(tài)。儀器常用硅玻璃和磞玻璃制成的凱氏燒瓶。第111頁(yè)/共128頁(yè)第一百一十一頁(yè)，共129頁(yè)。分離、純化與濃集 生物樣品中的藥物濃度較低或分析方法的特異性或靈敏度不夠高時(shí)，生物樣品需進(jìn)行分離、純化與濃集處理。液-液萃取法多數(shù)藥物是親酯性的，而血樣或尿樣中的多數(shù)內(nèi)源性干擾物是強(qiáng)極性的水溶性物質(zhì)。有機(jī)溶劑萃取可去除大部分干擾物。有機(jī)溶劑的要求：對(duì)被測(cè)藥物的溶解度大、沸點(diǎn)低、易于揮發(fā)濃集、與水不相混溶、無(wú)毒、不易乳化。第112頁(yè)/共128頁(yè)第一百一十二頁(yè)，共129頁(yè)。常用有機(jī)溶劑：乙醚和三氯甲烷有機(jī)溶劑相與水相的容積比為1:1或2:1。多數(shù)藥物是親酯性的堿性物質(zhì)，而生物樣品中的內(nèi)源性物質(zhì)多數(shù)是酸性的，生物樣品中的藥物一般在堿性下萃取。對(duì)堿性pH不穩(wěn)定的藥物，可在近中性pH處用三氯甲烷和異丙醇萃取。中性藥物則在pH=7附近萃取。第113頁(yè)/共128頁(yè)第一百一十三頁(yè)，共129頁(yè)。液-固萃取法

將具有吸附、分配及離子交換性質(zhì)的、表面積大的擔(dān)體作為萃取劑填入小柱，以溶劑淋洗后，將生物樣品通過(guò)，使其藥物或內(nèi)源性干擾物保留在擔(dān)體上，用適當(dāng)?shù)娜軇┫慈ジ蓴_物后，再用適當(dāng)?shù)娜軇⑺幬锵疵撓聛?lái)。優(yōu)點(diǎn)：較少引入雜質(zhì)、消除了乳化現(xiàn)象、萃取效率高、處理樣品速度快，在室溫下操作、適于處理?yè)]發(fā)性及對(duì)熱不穩(wěn)定的藥物。 擔(dān)體：親水性的硅藻土、疏水性的活性炭、聚苯乙烯或C18化學(xué)鍵合硅膠。第114頁(yè)/共128頁(yè)第一百一十四頁(yè)，共129頁(yè)。濃集末次少量溶劑萃取法 在末次萃取時(shí)加入的萃取液盡量少，使被測(cè)組分萃取到小體積溶劑中，然后直接吸取適量供測(cè)定。揮發(fā)萃取溶劑法。避免直接加熱，防止被測(cè)組分破壞或揮發(fā)損失。第115頁(yè)/共128頁(yè)第一百一十五頁(yè)，共129頁(yè)。揮發(fā)萃取溶劑的常用方法是直接通入氮?dú)饬鞔蹈?。?duì)與易隨氣流揮發(fā)或遇熱不穩(wěn)定的藥物，可用減壓法揮發(fā)溶劑。溶劑蒸發(fā)所用試管，底部應(yīng)為尖錐形，便于最終量取。第116頁(yè)/共128頁(yè)第一百一十六頁(yè)，共129頁(yè)?；瘜W(xué)衍生化

藥物中含有活潑H者（如-COOH、-OH、-NH2、-NH-、-SH）均可被化學(xué)衍生化。生物樣品經(jīng)化學(xué)衍生化在進(jìn)行分離的目的：使樣品中的藥物轉(zhuǎn)變成具可被分離的性質(zhì)提高檢測(cè)的靈敏度增強(qiáng)藥物的穩(wěn)定性提高對(duì)光學(xué)異構(gòu)體分離的能力第117頁(yè)/共128頁(yè)第一百一十七頁(yè)，共129頁(yè)。GC中化學(xué)衍生化衍生化可使藥物分子中的極性基團(tuán)，如羥基、氨基、羧基等變成無(wú)極性的、易于揮發(fā)的藥物，從而降低GC溫度。主要衍生化反