HPLC法測(cè)定大黃微波提取物中大黃酸和番瀉苷A的含量

HPLC法測(cè)定大黃微波提取物中大黃酸和番

瀉苷A的含量【摘要】目的成立大黃微波提取物中大黃酸、番瀉苷A兩種瀉下成份的含量測(cè)定方式。方式采納HPLC法，色譜柱：PhenomenexGeminiC18柱(250mmXmm,5um),流動(dòng)相：甲醇％磷酸(體積比80:20),流速：mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm,柱溫：25°C。結(jié)果測(cè)定3批提取物，大黃酸和番瀉苷A平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)別離為mg/g和mg/g。結(jié)論本法簡(jiǎn)單快捷，結(jié)果靠得住，可作為大黃提取物中大黃酸和番瀉苷A的含量測(cè)定方式。【關(guān)鍵詞】HPLC法；大黃提取物；大黃酸；番瀉苷AAbstract:ObjectiveTodeterminethecontentsofrheinandsennosideAinextractsofrhubarbpreparedwithmicrowaveextraction.MethodsSampleswereanalyzedonaPhenomenexGeminiC18(250mmXmm,5um)columnusingmethylalcohol%H3P04(80:20)asmobilephase.TheflowratewasmL/minandUVdetectionwavelengthwas254nm.Thecolumntemperaturewas25C.ResultsContentsofrheinandsennosideAintheextractsofrhubarbweremg/gandmg/g,repectively.ConclusionThemethodissimpleandreproducible,whichcouldbeusedfortheanalysisofrheinandsennosideAinrhubarbextracts.大黃的瀉下成份為蔥醌類，以番瀉苷A（sennosideA）的瀉下作用最強(qiáng),大黃酸（rhein）亦有必然瀉下作用。本文在參照文獻(xiàn)[1-3]的基礎(chǔ)上，成立了測(cè)定大黃微波提取物中的大黃酸和番瀉苷A這兩種瀉下成份含量的HPLC法，為研究大黃不同提取工藝提取物、不同大黃品種、大黃不同部位瀉下作用大小奠定了成份分析方面的基礎(chǔ)。1儀器與試藥島津LC10A泵、SPD10A檢測(cè)器、KQ250型超聲波清洗器（250W,40kHz，昆山市超聲儀器）、電熱套（山東鄄城光明儀器）。大黃酸（批號(hào)：110757200206）購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；番瀉＜A（批號(hào)：1126070）購(gòu)自SIGMA公司；大黃藥材購(gòu)自陜西省寶雞市藥材公司，經(jīng)本院藥用植物與中藥鑒定學(xué)教研室酷寒靜副教授鑒定為蓼科植物掌葉大黃（RheumpalmatumL.）；大黃提取物（自制）。甲醇為色譜純（Merk公司），超純水為自制，其余試劑均為分析純。2方式與結(jié)果色譜條件色譜柱：PhenomenexGeminiC18柱(250mmXmm,5um),流動(dòng)相：甲醇％磷酸(體積比80:20),流速：mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng):254nm,柱溫：25°C,進(jìn)樣量：20uLo理論塔板數(shù)以番瀉苷A計(jì)算應(yīng)不低于11000o對(duì)照品溶液的制備周密稱取大黃酸對(duì)照品mg、番瀉苷A對(duì)照品10mg,別離置50mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，別離取得大黃酸對(duì)照品貯備液和番瀉苷A對(duì)照品貯備液。進(jìn)樣前用um微孔濾膜濾過(guò)。周密吸取兩種對(duì)照品貯備液各3mL,置同一個(gè)10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，按“”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，得對(duì)照品溶液色譜圖，見(jiàn)圖1o供試品溶液的制備HPLC法測(cè)定大黃微波提取物中大黃酸和番瀉苷A的含量周密稱取大黃微波提取物適量（約含生藥g），置具塞錐形瓶中，加入甲醇20mL，超聲提取30min，濾過(guò)。濾渣從頭置具塞錐形瓶中，加入三氯甲烷20mL，超聲再提取30min，濾過(guò)。濾渣加mol/LH2S0415mL，電熱套加熱1h,冷卻至室溫，加入三氯甲烷15mL回流30min，冷卻后置分液漏斗中，分出三氯甲烷液，重復(fù)萃取3次，歸并三氯甲烷液，蒸餾水洗至中性，與水解前三氯甲烷提取液歸并，回收三氯甲烷至干。殘?jiān)c甲醇提取液歸并，加甲醇定容至100mL,得供試品溶液I,備用。進(jìn)樣前用um微孔濾膜濾過(guò)。周密量取上述供試品溶液I10mL,定容至50mL，得供試品溶液II。按“”項(xiàng)下色譜條件，別離將供試品溶液I和供試品溶液II進(jìn)樣，結(jié)果見(jiàn)圖2。 線性關(guān)系考察周密吸取“”項(xiàng)下兩種對(duì)照品貯備液各一、二、3、4、5mL，依次置于5個(gè)10mL容量瓶，兩對(duì)照品貯備液混合，加甲醇至刻度，搖勻。別離進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積（A）對(duì)證量濃度（P）進(jìn)行線性回歸，得大黃酸的回歸方程A=51132p-28610，r=9，線性范圍?mg/L；番瀉苷A的回歸方程A=P，r=7，線性范圍?mg/L。周密度實(shí)驗(yàn)取同一濃度的對(duì)照品溶液，持續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，計(jì)算RSD值，取得大黃酸的RSD=%，番瀉苷A的RSD=%。重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取供試品溶液II和供試品溶液I,各持續(xù)進(jìn)樣6次，別離測(cè)定大黃酸和番瀉苷A的峰面積，計(jì)算RSD值，取得大黃酸的RSD=%，番瀉苷A的RSD=%。穩(wěn)固性實(shí)驗(yàn)取同一供試品溶液，別離于0、二、4、六、八、12h進(jìn)樣，別離測(cè)定大黃酸和番瀉苷A的峰面積，計(jì)算RSD值，結(jié)果取得大黃酸的RSD=%，番瀉苷A的RSD=%。說(shuō)明樣品溶液在12h內(nèi)大體穩(wěn)固。加樣回收率實(shí)驗(yàn)取已知濃度的大黃微波提取物適量，周密稱定，精準(zhǔn)加入對(duì)照品，余同“”項(xiàng)下操作，測(cè)定大黃酸和番瀉苷A的峰面積，計(jì)算大黃酸和番瀉苷A加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。表1大黃酸和番瀉苷A加樣回收率（略）樣品測(cè)定取大黃微波提取工藝提取物3批，按“”項(xiàng)下制備供試品溶液，依法測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表2。表2大黃提取物中大黃酸和番瀉苷A含量(略)3討論大黃中瀉下作用最強(qiáng)的成份是番瀉苷A,大黃酸的瀉下作用相對(duì)較弱［4］。本文只研究了大黃酸和番瀉苷A的含量的測(cè)定方式，若是考慮把其他瀉下組分的含量包括進(jìn)來(lái)，依照各組分對(duì)瀉下作用的奉獻(xiàn)的大小，加上權(quán)重，那么更能反映大黃瀉下作用的強(qiáng)弱。由穩(wěn)固性實(shí)驗(yàn)可知，樣品中大黃酸比番瀉苷A穩(wěn)固性更好。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)說(shuō)明，樣品假設(shè)在4°C冰箱中放置一個(gè)月，進(jìn)樣測(cè)定大黃酸峰面積的RSD在％之內(nèi)。【參考文獻(xiàn)】［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：17．［2］張紅霞，金藝，許海燕，等.HPLC法測(cè)定胃力片中大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素