輸血學(xué)檢驗(yàn)紅細(xì)胞血型檢測(cè)

紅細(xì)胞血型檢測(cè)中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院輸血科王勇軍1900年KarlLandsteiner描述了第一個(gè)紅細(xì)胞血型系統(tǒng)：ABO血型系統(tǒng)，啟動(dòng)了現(xiàn)代輸血學(xué)的發(fā)展現(xiàn)代輸血的主要領(lǐng)域免疫血液學(xué)輸血安全血液成分輸血輸血的質(zhì)量管理一、輸血前免疫血液學(xué)檢查（一）、輸血前檢查的目的和要求目的：選擇與患者配合的血液成分，使之能在患者體內(nèi)有效存活，無不良反應(yīng)。要求：使患者與供者之間的血液在免疫學(xué)方面“相容”。

安全及時(shí)有效（二）、輸血前檢查的內(nèi)容

1、患者的病史了解和標(biāo)本的檢查

2、受者、供者ABO、Rh血型的確定

3、不規(guī)則抗體的篩選、鑒定

4、交叉配合試驗(yàn)（紅細(xì)胞、血小板）

5、發(fā)血（三）、受血者標(biāo)本1、標(biāo)本的采集2、標(biāo)本的接收3、標(biāo)本的要求標(biāo)本應(yīng)反映受血者當(dāng)前的免疫學(xué)狀態(tài)防止標(biāo)本稀釋或溶血必須是輸血前3天內(nèi)采集的受血者與獻(xiàn)血者標(biāo)本保留7天紅細(xì)胞血型檢測(cè)一、ABO血型系統(tǒng)ABO血型檢測(cè)（一）、概述1、1900年被發(fā)現(xiàn)，在輸血工作中是最重要的血型抗原系統(tǒng)2、根據(jù)紅細(xì)胞膜上是否有A、B抗原可將人分為四種血型A、B、O、AB.3、Landsteiner分布規(guī)律:A型血清含有抗B,B型血清含有抗A,O型血清含有抗A抗B,AB型血清不含抗A抗B.ABO血型的基因型與表現(xiàn)型基因型血型（表型）基因型血型（表型）AAAAOABBB

BOBABABOOO（二）ABO血型的鑒定正定型（查抗原）用已知的標(biāo)準(zhǔn)抗A和抗B血清來測(cè)定紅細(xì)胞上有無相應(yīng)的A抗原和B抗原反定型（查抗體）用已知的標(biāo)準(zhǔn)A型紅細(xì)胞和標(biāo)準(zhǔn)B型紅細(xì)胞來測(cè)定血清中有無相應(yīng)的抗A抗體和抗B抗體（三）臨床常用的ABO血型鑒定方法試管法反應(yīng)快、時(shí)間短，結(jié)果準(zhǔn)確可靠玻片法定型簡(jiǎn)單，不需要離心設(shè)備，適用于大型血型普查微柱凝膠法結(jié)果穩(wěn)定可靠，靈敏度高，重復(fù)性好，可以實(shí)現(xiàn)儀器自動(dòng)化（四）正反定型不符分析的程序重新采集標(biāo)本查詢病史、輸血史、用藥史用新的生理鹽水洗滌紅細(xì)胞應(yīng)用抗-AB、抗-A1、抗-H檢測(cè)紅細(xì)胞應(yīng)用O細(xì)胞檢測(cè)血清

（五）正反定型的臨床意義保證血型結(jié)果的準(zhǔn)確性發(fā)現(xiàn)亞型糾正疾病影影響的紅細(xì)胞抗原減弱排除獲得性抗原、冷凝聚的影響發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體（六）ABO血型的臨床意義輸血治療器官移植新生兒溶血病

（七）、ABO血型系統(tǒng)的抗原亞型亞型是指屬同一血型抗原，但抗原結(jié)構(gòu)和性能或抗原位點(diǎn)數(shù)有一定差異。

ABO血型檢測(cè)

A抗原的主要兩種亞血型A1和A2

(構(gòu)成A型血的99.99%）A2或A2B均不超過A型和AB型的1%A1和A2表型鑒別簡(jiǎn)表血型抗原抗-A抗-A1植物血凝素

A1A、A1+++A2A+00ABO血型系統(tǒng)的抗原亞型A3、B3Ax、BxAm、BmAel、BelAw、Bw，Amos、BmosABO血型系統(tǒng)的抗原變異型孟買型基因型為hh表型的個(gè)體紅細(xì)胞膜上缺乏A、B、H抗原，血清中含有抗A、抗B、抗H抗體類孟買型

表型的個(gè)體紅細(xì)胞膜上缺乏H抗原，H基因受到抑制基因的影響，產(chǎn)生的少量H抗原在A或B基因的作用下轉(zhuǎn)化為A或B抗原。ABO血型系統(tǒng)的抗原變異型CisAB型A與B基因均在同側(cè)染色體上遺傳大多的順式AB型的血清有弱的抗B抗體ABO血型檢測(cè)（八）ABO血型目前的研究方法應(yīng)用血型單克隆抗體和核磁共振，質(zhì)譜儀，以及PCR等從ABO血型抗原分子結(jié)構(gòu)，ABO血型糖基轉(zhuǎn)移酶，核苷酸三個(gè)水平來證實(shí)ABO血型的異質(zhì)性。紅細(xì)胞血型檢測(cè)二、Rh血型系統(tǒng)Rh血型檢測(cè)（一）Rh血型系統(tǒng)概述1、Rh血型系統(tǒng)是最復(fù)雜的遺傳多態(tài)性血型系統(tǒng)之一2、Rh血型系統(tǒng)內(nèi)目前發(fā)現(xiàn)有46種抗原，D抗原最重要，臨床常根據(jù)其有無分為Rh陽性或陰性。其次為E，C，c，e大約85%的白種人或99.6%的中國(guó)人為Rh陽性3、Rh血型系統(tǒng)有重要的臨床意義

Rh血型系統(tǒng)（二）Rh血型抗原與抗體1.Rh血型抗原：Rh血型的抗原性可能僅次于ABO血型系統(tǒng)

Rh血型抗原中D抗原的抗原性最強(qiáng),依次為E、C、c、e.正常D抗原數(shù)1萬到3.3萬-D-抗原數(shù)10-20萬Rh血型抗原2、

D抗原的分類

正常的D抗原弱D型（Du型；weakD):

與正常的D抗原無質(zhì)差別,但數(shù)量很少。

不完全D型（PartialD）:

基因表達(dá)不完全的基因基礎(chǔ)主要是D基因和CE基因形成的雜交基因和D基因部分缺失。Rh血型抗原不完全

Du型（PartialDu

型）

抗原數(shù)量少，質(zhì)也不同于正常D抗原

增強(qiáng)D

（-D-型）

CE基因沉默，不表達(dá)其產(chǎn)物D抗原和臨床3、

D不完全型的相關(guān)問題弱D作為獻(xiàn)血者為陽性弱D作為受血者為視為D陰性,只能接受D陰性血液

D不完全型的孕婦有機(jī)會(huì)產(chǎn)生HND4、Rh(D)血型鑒定的常用方法玻片法（單克隆試劑IgM+IgG)試管法（單克隆試劑IgM+IgG)酶介質(zhì)法（IgG試劑)微柱凝膠法Rh血型定型Rh血型的假陽性Rh血型的假陰性RhD陰性的確認(rèn)紅細(xì)胞血型檢測(cè)三、不規(guī)則抗體不規(guī)則抗體的定義亦稱意外抗體，是指抗A、抗B意外的抗體包括自身抗體、同種抗體輸血技術(shù)規(guī)范規(guī)定：受血者有輸血史、妊娠史或短期內(nèi)需要大量輸血時(shí)需進(jìn)行不規(guī)則抗體的篩查四、交叉配血(MatchcrossBlood)試驗(yàn)交叉配血(MatchcrossBlood)一，交叉配血的概念交叉配血實(shí)驗(yàn)也稱配合性實(shí)驗(yàn)，實(shí)際上是檢查不配合性。檢查患者和獻(xiàn)血員之間是否有對(duì)應(yīng)的抗原、抗體存在1.使供血者的紅細(xì)胞與受血者的血清反應(yīng)（主側(cè)交叉配血）2.使受血者的紅細(xì)胞與供血者的血清反應(yīng)（次側(cè)交叉配血）觀察兩者是否出現(xiàn)凝集（溶血）交叉配血(MatchcrossBlood)二，交叉配血的方法

1.只能檢出不配合的完全抗體鹽水介質(zhì)法2.可檢出不配合的不完全抗體抗人球蛋白法蛋白酶法低離子介質(zhì)法等3.改良的交叉配血方法交叉配血(MatchcrossBlood)聚凝胺（Polybrene)配血法利用高價(jià)陽離子的多聚季氨鹽溶解后產(chǎn)生的大量正電荷可中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷縮小其之間的距離微柱凝膠配血法（卡式配血法）利用葡聚糖凝膠具有分子篩效應(yīng)交叉配血(MatchcrossBlood)三，交叉配血不合的原因（一）主側(cè)不合：Ps+Dc主要針對(duì)Ps

1.不規(guī)則抗體有同種抗體或自身抗體2.有高頻抗體，與譜細(xì)胞凝，自身不凝3.冷凝集4.A2抗A15.Dc的DAT+（二）次側(cè)不合：Pc+Ds1.Pc做DAT：陽性見于自身抗體，輸血反應(yīng)，HDN2.Ds中有不規(guī)則抗體3.忽略ABO亞型誤定血型4.冷凝集素吸附于Pc5.異型輸血A,BAB,OAB,A,B四，交叉配血的注意事項(xiàng)1.時(shí)間與速度2.水溫箱的溫度3.水質(zhì)4.用新鮮的標(biāo)本5.做抗人球?qū)嶒?yàn)時(shí)最好用血清6.注意輸血史，妊娠史7.注意溶血的結(jié)果紅細(xì)胞血型血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)發(fā)展史1、鹽水凝集法：是操作最簡(jiǎn)單的方法（分為玻片法和試管法兩種），所需設(shè)備也很簡(jiǎn)單。由于此方法實(shí)驗(yàn)中的所有影響因素的干擾，靈敏度相對(duì)較低，要求抗A血清效價(jià)>1：128；抗B血清效價(jià)>1：64；而冷凝集素效價(jià)<1：4；對(duì)抗原抗體反應(yīng)的親和力和特異性還有較高要求，因此，目前只有一些基層醫(yī)院血庫仍將此方法作為血型檢查的主要方法。2、低離子強(qiáng)度鹽水法：是當(dāng)降低介質(zhì)溶液的離子強(qiáng)度時(shí)，可減少紅細(xì)胞外圍的離子云的強(qiáng)度，促進(jìn)IgG分子在兩個(gè)紅細(xì)胞間的橋連，進(jìn)一步促進(jìn)紅細(xì)胞間的凝集。例如：當(dāng)離子強(qiáng)度從0.17降至0.03時(shí)，可提高抗-D抗體與D抗原陽性紅細(xì)胞的結(jié)合率，縮短抗原抗體的反應(yīng)時(shí)間，提高反應(yīng)的靈敏度。紅細(xì)胞血型血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)發(fā)展史3、酶技術(shù)：是利用木瓜酶或菠蘿酶來破壞紅細(xì)胞表面的唾液酸，使紅細(xì)胞膜失去電荷，縮小紅細(xì)胞間的距離；同時(shí)能部分地改變紅細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)，使某些隱蔽抗原得以暴露，增強(qiáng)凝集反應(yīng)；由于對(duì)IgG的作用大于對(duì)IgM，故有利于不完全抗體的檢測(cè)。木瓜酶或菠蘿酶對(duì)MNS、Fya、Fyb抗原有破壞作用。紅細(xì)胞血型血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)發(fā)展史紅細(xì)胞血型血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)發(fā)展史4、Coombs試驗(yàn)：是在鹽水凝集法或低離子強(qiáng)度鹽水法的基礎(chǔ)上，加入抗人球蛋白抗體，通過抗人球蛋白抗體特異性的促進(jìn)紅細(xì)胞的凝集反應(yīng)。紅細(xì)胞血型血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)發(fā)展史5、聚凝胺技術(shù)：是利用多聚季氨鹽溶液產(chǎn)生的大量正電荷來中和紅細(xì)胞表面負(fù)電荷，減少紅細(xì)胞間的排斥，促進(jìn)紅細(xì)胞凝集。紅細(xì)胞血型血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)發(fā)展史6、卡式檢測(cè)法（微柱凝膠試驗(yàn)）：是法國(guó)Dr.YvesLapierre在1990年首先發(fā)明的一項(xiàng)免疫學(xué)檢測(cè)新技術(shù)，是微柱凝膠技術(shù)與以上所有實(shí)驗(yàn)技術(shù)相結(jié)合的產(chǎn)物。1994年此項(xiàng)技術(shù)獲得了美國(guó)FDA的認(rèn)可。經(jīng)過不斷改進(jìn)和臨床大量應(yīng)用，目前，在多數(shù)發(fā)達(dá)國(guó)家，此項(xiàng)技術(shù)已作為常規(guī)的紅細(xì)胞血型血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用于臨床。微柱凝膠試驗(yàn)（卡式檢測(cè)法）原理這是抗原抗體反應(yīng)與凝膠分子篩技術(shù)相結(jié)合的產(chǎn)物。通過調(diào)節(jié)葡聚糖凝膠的濃度來控制分子篩孔徑大小，使分子篩只允許游離紅細(xì)胞通過，從而達(dá)到分離凝集紅細(xì)胞和游離紅細(xì)胞的目的。即：將紅細(xì)胞和血清加在凝膠的上部反應(yīng)，離心以后，凝集紅細(xì)胞將受到凝膠的阻礙而停留在凝膠的上部或凝膠中，則證明發(fā)生凝集反應(yīng)，可判為凝集反應(yīng)陽性，反之，所有紅細(xì)胞都停留在凝膠底部，證明未發(fā)生凝集反應(yīng)，則可判為凝集反應(yīng)陰性。微柱凝膠試驗(yàn)（卡式檢測(cè)法）原理反應(yīng)結(jié)果模式如下：五、吸收放散試驗(yàn)檢測(cè)IgM抗體時(shí)：4℃吸收、56℃放散檢測(cè)IgG抗體時(shí)：37℃吸收、乙醚放散吸收放散試驗(yàn)的臨床意義證實(shí)紅細(xì)胞上的弱抗原分離、鑒定混合抗體除去血清中的不需要抗體濃縮低效價(jià)抗體證實(shí)抗體的特異性