東湖水質(zhì)檢測

東湖水質(zhì)的檢測摘要：本試驗通過檢測東湖水中的大腸菌群來檢測東湖水質(zhì)。取東湖水樣，制作合適的稀釋梯度，每一稀釋度5支試管，在37°C下培養(yǎng)后，產(chǎn)酸或產(chǎn)氣為陽性;陽性試管轉(zhuǎn)接至45°C下培養(yǎng)，產(chǎn)氣為陽性。將兩個溫度下的陽性試管中的菌液接種到伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以及進(jìn)行革蘭氏染色，進(jìn)一步驗證確實有大腸桿菌。根據(jù)證實為陽性的管數(shù)，查MPN檢索表，得到lOOmL水樣中大腸菌群數(shù)量為54000MPN/100mL，屬于劣五類水質(zhì)。東湖治理迫在眉睫！關(guān)鍵詞：東湖水質(zhì)大腸菌群檢測前言我們武漢大學(xué)坐落于東湖之濱，東湖與我們的生活息息相關(guān)，東湖的水質(zhì)直接影響到我們的生活質(zhì)量和身心健康，因此，進(jìn)行東湖水質(zhì)檢測、治理水體污染至關(guān)重要。國家頒布的《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法微生物指標(biāo)》是衡量水質(zhì)的權(quán)威指標(biāo)，按照這一文件對東湖水樣用多管發(fā)酵法進(jìn)行實驗，將實驗結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比對即可判斷水質(zhì)情況。本實驗按照文件標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，可了解東湖的污染情況，并采取相應(yīng)的治理措施。目的和意義1、 學(xué)習(xí)檢測水中大腸桿菌數(shù)的基本原理和操作方法。2、 了解水中大腸桿菌總數(shù)和耐熱大腸桿菌數(shù)與水質(zhì)的關(guān)系。3、 鞏固微生物實驗操作技術(shù)，培養(yǎng)設(shè)計實驗和結(jié)果分析的能力。4、 通過實驗了解東湖水質(zhì)污染的嚴(yán)重性，提高環(huán)保意識。材料與方法實驗材料水樣?xùn)|湖水樣培養(yǎng)基乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、EC培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基實驗儀器和試劑試管，接種環(huán)，恒溫水浴箱，恒溫培養(yǎng)箱，移液管，顯微鏡，平皿，小倒管，載玻片濾紙，擦鏡紙，蒸餾水，結(jié)晶紫染液，盧戈氏碘液，95%乙醇，沙黃復(fù)染液實驗方法取樣取樣地點為煙霞橋，如下圖：本步驟已由教師完成。本步驟已由教師完成。制備樣管取三支試管，依次編為1、2、3號，1號管為空，2、3號管中加入9mL無菌生理鹽水。向1號管中加入10mL水樣，再從中吸取1mL加入2號管中，混勻后，吸取1mL加入3號管中，混勻。1、2、3管備用。總大腸菌群檢測總大腸菌群是指一群在37培養(yǎng)24h能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧或兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。2.3.1將15支裝有9mL乳糖蛋白胨培養(yǎng)液和德漢氏小管的試管編號，依次編為1-1、2、3、4、5，2-1、2、3、4、5,3-1、2、3、4、5。從1號管中依次吸取1mL菌液加入編號為1-1、2、3、4、5的試管中，制成稀釋度為10-1的菌液，再從2號管中依次吸取1mL加入編號為2-1、2、3、4、5的試管中，制成稀釋度為10-2的菌液，再從3號管中依次吸取1mL加入編號為3-1、2、3、4、5的試管中，制成稀釋度為10-3的菌液。把3個稀釋度的試管搖勻，備用。2.3.3先將15支試管放在37°C的恒溫水浴槽中保溫3-5分鐘，取出后置于37°C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，第二天取出，觀察是否產(chǎn)酸或者產(chǎn)氣。記錄結(jié)果并拍照。耐熱大腸菌群的檢測用提高培養(yǎng)溫度的方法將自然中的大腸桿菌和糞便中的大腸桿菌區(qū)分開來，在45C條件下仍能生長的為耐熱大腸桿菌。2.4.1從2.3.3中產(chǎn)酸或產(chǎn)氣的試管中吸取50uL加到有EC培養(yǎng)液的試管中，將這些試管對應(yīng)的編號為1-1'、2'……直到將所有的呈陽性的試管轉(zhuǎn)接完。2.4.2將原來的15支試管放回37C的恒溫箱中保存。新接的試管先在45C的水浴槽中保溫3-5分鐘，再轉(zhuǎn)入45C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，第二天取出，觀察是否產(chǎn)氣。記錄結(jié)果并拍照。分離培養(yǎng)2.5.1將37C條件下產(chǎn)酸或產(chǎn)氣的試管接種到伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，于37C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時；將45C條件下產(chǎn)氣的試管接種到伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，置于45C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。第二天取出平板觀察菌落的形態(tài)，挑取符合下列特征的菌落做革蘭氏染色并鏡檢：深紫黑色、具有金屬光澤的菌落；紫黑色、不帶或略帶金屬光澤的菌落；淡紫紅色、中心較深的菌落。觀察后記錄結(jié)果并拍照。結(jié)果與討論1．實驗結(jié)果總大腸菌群檢測結(jié)果觀察37C條件下培養(yǎng)的試管內(nèi)菌液顏色及小倒管內(nèi)是否有氣體產(chǎn)生，可知編號為1-1、2、3、4、5， 2-2、3、4、5及3-1的試管既產(chǎn)酸又產(chǎn)氣，編號為2-1及3-4的試管只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，均為陽性試管，編號為3-2、3、5的試管既不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣，為陰性試管。部分結(jié)果如下圖所示：

編號1-3，產(chǎn)酸產(chǎn)氣號2-1，只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣號編號1-3，產(chǎn)酸產(chǎn)氣號2-1，只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣號3-5，既不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣耐熱大腸桿菌檢測結(jié)果觀察在45°C條件下培養(yǎng)的試管內(nèi)小倒管中是否有氣體，可知編號為1-1',1-3',2-2,及3-4'的試管中產(chǎn)氣，呈陽性，其他試管均呈陰性。部分結(jié)果如下圖：

3-1'不產(chǎn)氣3-1'不產(chǎn)氣伊紅美藍(lán)平板觀察結(jié)果觀察伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上的菌落顏色及光澤，所有從37°C條件下呈陽性的試管中接種生成的菌落均顯金屬光澤；而45C條件下只有2-2'中有菌落生成。結(jié)果如下圖：編號1-1、編號1-1、2、3、4、5及2-12-2、3、4、2-2、3、4、5及3-1、4編號2-2'（左）,3-4'（右）革蘭氏染色鏡檢結(jié)果平板上的菌落經(jīng)革蘭氏染色均為革蘭氏陰性無芽孢桿菌，部分結(jié)果如下圖編號1-5實驗結(jié)果匯總表\項目編號'\37C下產(chǎn)酸產(chǎn)氣結(jié)果45C下產(chǎn)氣結(jié)果37C下伊紅美藍(lán)培養(yǎng)結(jié)果45C下伊紅美藍(lán)培養(yǎng)結(jié)果37C鏡檢結(jié)果45C鏡檢結(jié)果1-1+ff+-G-1-2+f-+G-1-3+ff+-G-1-4+f-+G-1-5+f-+G-2-1+-+G-2-2+ff++G-G-2-3+f-+G-2-4+f-+G-2-5+f-+G-3-1+f-+G-3-2-3-3-3-4+f+-G-3-5---注：+表示產(chǎn)酸或菌落顯金屬光澤，f表示產(chǎn)氣，-表示呈陰性，G-表示鏡檢結(jié)果為革蘭氏陰性,斜劃線表示未進(jìn)行實驗實驗結(jié)論由實驗結(jié)果可知37°C下測得總大腸菌群三個稀釋度陽性管數(shù)分別為5、5、2,由MPN表查得總大腸菌群為540X100=54000MPN/100mL。45C下測耐熱大腸菌群三個稀釋度呈陽性的管數(shù)分別為2、1、1,查MPN表得耐熱大腸菌群數(shù)為9X100=900MPN/100mLo結(jié)果討論總大腸菌群的檢測10-1和10-2稀釋度以及10-3稀釋度中的1號和4號管均呈陽性，說明其中可能有大腸桿菌，而10-3稀釋度的2、3、5號管既不產(chǎn)酸又不產(chǎn)氣，表明其中沒有大腸桿菌或者數(shù)量極少無法檢測。這是因為稀釋1000倍之后，樣液中含有的大腸桿菌數(shù)量很少，不排除有些管中沒有接種到大腸桿菌或者操作失誤使大腸桿菌死亡。在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，呈陽性管的接種物均形成深紫色或者深紅色菌落，對光觀察顯綠色金屬光澤。通過革蘭氏染色后鏡檢，均呈紅色。由此證明這些陽性管中確實有大腸桿菌。耐熱大腸菌群的檢測45C下只有1-1、1-3、2-2、3-4的試管呈陽性，而這些管中的菌液接種到伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上后，只有2-2有菌落形成，且菌落較小，數(shù)量也不多。原因可能在于接種時菌液沒有搖勻，接種環(huán)又沒有伸得足夠深導(dǎo)致接種到的耐熱大腸桿菌極少；或者操作時接種環(huán)太靠近酒精燈火焰致使菌體死亡。根據(jù)2-2形成的菌落數(shù)量，可以推測培養(yǎng)基中的耐熱大腸桿菌數(shù)量很少，其他幾個管接種后沒有形成菌落也有可能是這個原因。水質(zhì)分析由MPN檢索表計算出水中的總大腸菌群數(shù)為54000MPN/100mL，屬于劣五類水質(zhì)；其中耐熱大腸菌群數(shù)為900MPN/100mL,占總大腸菌群數(shù)的比例為1/60，說明造成水質(zhì)污染的大腸桿菌主要是自然生長的，人畜糞便帶入的大腸桿菌只占很少的部分，但大量大腸桿菌的生長可能是一些工業(yè)污水和生活污水的排入使水體營養(yǎng)化，微生物大量繁殖。致謝感謝謝志雄老師在微生物實驗課中的悉心指導(dǎo)。感謝助教們在實驗過程中給我們的幫助和建議。體會與感受此次實驗是由我們小組的四個成員共同完成的，大家都各盡其力卻又互相配合，使實驗?zāi)軌蝽樌倪M(jìn)行。有的同學(xué)善于操作，有的同學(xué)善于記錄，有的善于觀察，有的善于總結(jié)，每個成員不僅可以發(fā)揮自己的優(yōu)點參與實驗，而且在實驗過程中都有很大的收獲。這次實驗是對我們操作的一次檢驗。菌液的稀釋、轉(zhuǎn)移和接種這些操作都要求進(jìn)行無菌操作，稍有不慎，就可能對最后的結(jié)果有很大的影響。我們還進(jìn)行了革蘭氏染色并用油鏡觀察革蘭氏染色后的大腸桿菌；這些讓我們更加熟悉微生物研究中的一些基本的研究方法和操作方法。通過實驗我們還了解了水質(zhì)檢測的一般方法和水質(zhì)評價方法，從我們實驗的結(jié)果我